DB51T 1849-2014 家畜布魯氏菌病防治技術(shù)規(guī)范　　

2014-09-19發(fā)布2014-10-01實(shí)施四川省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布I II 1 13術(shù)語(yǔ)和定義 1 1 2 27疫情報(bào)告 38疫情處理 39免疫 410監(jiān)測(cè) 511人員防護(hù) 5附錄A(規(guī)范性附錄)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA) 6本標(biāo)準(zhǔn)于2006年首次發(fā)布，2014年5月第一次修訂。自本標(biāo)準(zhǔn)實(shí)施之日起，原DB51/T575-2006同時(shí)廢止。本標(biāo)準(zhǔn)附錄A為規(guī)范性附錄。本標(biāo)準(zhǔn)由四川省農(nóng)業(yè)廳提出并歸口。本標(biāo)準(zhǔn)由四川省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局批準(zhǔn)。本標(biāo)準(zhǔn)由四川省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心負(fù)責(zé)起草。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：余勇、毛光瓊、張東、陳斌、陽(yáng)愛國(guó)、鄧永強(qiáng)、郭莉、侯巍、陳冬、文豪、吳宣、邢坤、張代芬、羅毅。1家畜布魯氏菌病防治技術(shù)規(guī)范本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了家畜布魯氏菌病的樣品采集、實(shí)驗(yàn)室診斷、疫情報(bào)告、疫情處理、免疫、監(jiān)測(cè)和人員本標(biāo)準(zhǔn)適用于家畜布魯氏菌病的防治。2規(guī)范性引用文件下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB16548病害動(dòng)物和病害動(dòng)物產(chǎn)品生物安全處理規(guī)程GB/T18635動(dòng)物防疫基本術(shù)語(yǔ)GB/T18646動(dòng)物布魯氏菌病診斷技術(shù)GB/T16569畜禽產(chǎn)品消毒規(guī)范NY/T541動(dòng)物疫病實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)采樣方法NY/T907動(dòng)物布氏桿菌病控制技術(shù)規(guī)范NY/T1467奶牛布魯氏菌病PCR診斷技術(shù)3術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本標(biāo)準(zhǔn)。布魯氏菌病(brucellosis)由布魯氏菌屬細(xì)菌引起的以感染家畜為主的人獸共患的傳染病，我國(guó)將其列為二類動(dòng)物疫病。4流行病學(xué)特點(diǎn)4.1流行特點(diǎn)潛伏期一般為14d~180d。多種動(dòng)物對(duì)布魯氏菌易感。家畜中羊、牛、豬的易感性最強(qiáng)。母畜比公畜、成年畜比幼年畜發(fā)病多。在母畜中，第一次妊娠母畜發(fā)病較多。帶菌動(dòng)物，尤其是患畜、流產(chǎn)胎兒、胎衣是主要傳染源。消化道、呼吸道、生殖道是主要的感染途徑，也可通過(guò)損傷的皮膚、粘膜等感染。常呈地方性流行。4.2臨床癥狀最顯著癥狀是懷孕母畜發(fā)生流產(chǎn)，流產(chǎn)后可能發(fā)生胎衣滯留和子宮內(nèi)膜炎，從陰道流出污穢不潔、2惡臭的分泌物。公畜往往發(fā)生睪丸炎、附睪炎或關(guān)節(jié)炎。4.3病理變化主要病變?yōu)樯称鞴俚难仔詨乃?，淋巴結(jié)、肝、腎、脾等器官形成特征性肉芽腫(布病結(jié)節(jié))。有的可見關(guān)節(jié)炎。胎兒主要呈敗血癥病變，漿膜和粘膜有出血點(diǎn)和出血斑，皮下結(jié)締組織發(fā)生漿液性、出血性炎癥。5樣品采集、保存和運(yùn)輸包裝要求采集、保存和運(yùn)輸包裝須符合下列要求。5.1樣品的采集和保存5.1.1組織樣品組織樣品采集流產(chǎn)胎衣、絨毛膜和流產(chǎn)胎兒的肺、脾、胃內(nèi)容物等。5.1.2血清樣品采集動(dòng)物血液，每頭不少于5ml。分離血清裝入滅菌離心管中，加蓋密封后冷藏保存。5.1.3采集樣品時(shí)，應(yīng)采集雙份作備份，填寫樣品采集登記表。樣品容器須加貼防水標(biāo)簽，并寫明樣品編號(hào)、采集地點(diǎn)、采樣人、動(dòng)物種類、時(shí)間等。5.2樣品運(yùn)輸包裝5.2.1內(nèi)包裝要求：不滲水的主容器；不滲水的輔助包裝；必須在主容器和輔助包裝之間填充吸附材料。吸附材料必須充足，能夠吸收主容器內(nèi)所有的液體。多個(gè)主容器裝入一個(gè)輔助包裝時(shí)，必須將它們分別包裹。5.2.2外包裝要求：包裝材料要不易破碎，要注意防水和滲漏。必要時(shí)填充防震材料和適當(dāng)冷凍劑。6實(shí)驗(yàn)室診斷6.1病原學(xué)診斷6.1.1顯微鏡檢查采集流產(chǎn)胎衣、絨毛膜和流產(chǎn)胎兒的肺、脾、胃內(nèi)容物等組織，制成抹片，用柯茲羅夫斯基染色法染色，鏡檢，如果發(fā)現(xiàn)有紅色球桿狀小桿菌時(shí)，而其它菌為藍(lán)色，即可初步診斷。6.1.2分離培養(yǎng)病料可用胰蛋白胨瓊脂斜面或血液瓊脂斜面、肝湯瓊脂斜面、3%甘油0.5%葡萄糖肝湯瓊脂斜面等培養(yǎng)基培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)，一份在普通條件下，另一份放于含有5～10%二氧化碳的環(huán)境中，37℃培養(yǎng)7d~10d。然后進(jìn)行菌落特征檢查和單價(jià)特異性抗血清凝集試驗(yàn)可確診布魯氏菌病。奶牛新鮮原乳、流產(chǎn)母牛乳汁、流產(chǎn)母牛陰道分泌物、血液、流產(chǎn)胎兒胃液、種公牛精液，可采用PCR診斷，見NY/T1467。36.2血清學(xué)診斷6.2.1虎紅平板凝集試驗(yàn)(RBPT)(按GB/T18646操作)。6.2.2酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(見附錄)。6.2.4試管凝集試驗(yàn)(SAT)(按GB/T6.3結(jié)果判定縣級(jí)以上動(dòng)物預(yù)防控制機(jī)構(gòu)負(fù)責(zé)布魯氏菌病診斷結(jié)果的判定。6.3.1疑似疫情判定符合4.1、4.2和4.3時(shí)，判定為疑似疫情。6.3.2疑似患病動(dòng)物判定6.2.1或6.2.2或6.2.3為陽(yáng)性時(shí)，判定為疑似患病動(dòng)物。6.3.3確診患病動(dòng)物6.3.3.1符合6.1.1,且6.1.2或6.1.3陽(yáng)性時(shí)，判定為患病動(dòng)物。6.3.3.2未免疫動(dòng)物，6.2.4或6.2.5陽(yáng)性時(shí)，判定為患病動(dòng)物。7疫情報(bào)告7.1任何單位和個(gè)人發(fā)現(xiàn)疑似疫情，應(yīng)及時(shí)向縣級(jí)以上動(dòng)物疫病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)報(bào)告。7.2疫情報(bào)告內(nèi)容包括：疫情發(fā)生的時(shí)間、地點(diǎn)，染疫和疑似染疫動(dòng)物種類和數(shù)量、同群動(dòng)物數(shù)量、免疫情況死亡情況、臨床癥狀、病理變化、診斷情況、流行病學(xué)和疫源追蹤情況，已采取的控制措施，疫情報(bào)告單位、負(fù)責(zé)人及聯(lián)系方式。7.3動(dòng)物疫病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)接到疫情報(bào)告并確認(rèn)后，按規(guī)定及時(shí)上報(bào)。8疫情處理8.1發(fā)現(xiàn)疑似疫情，畜主應(yīng)限制動(dòng)物移動(dòng)；對(duì)疑似患病動(dòng)物應(yīng)立即隔離。8.2確診后，按下列要求處理。對(duì)患病動(dòng)物全部撲殺。8.2.2.1對(duì)受威脅的畜群(病畜的同群畜)實(shí)施隔離，可采用圈養(yǎng)和固定草場(chǎng)放牧兩種方式隔離。8.2.2.2隔離飼養(yǎng)用草場(chǎng)，遠(yuǎn)離交通要道，居民點(diǎn)或人畜密集區(qū)。場(chǎng)地周圍最好有自然屏障或人工柵48.2.3無(wú)害化處理患病動(dòng)物及其流產(chǎn)胎兒、胎衣、排泄物、乳、乳制品等按照GB16548《病害動(dòng)物和病害動(dòng)物產(chǎn)品生物安全處理規(guī)程》進(jìn)行無(wú)害化處理。8.2.4流行病學(xué)調(diào)查開展流行病學(xué)調(diào)查和疫源追蹤；對(duì)同群動(dòng)物進(jìn)行監(jiān)測(cè)。8.2.5.1對(duì)患病動(dòng)物污染的場(chǎng)所、用具、物品嚴(yán)格進(jìn)行消毒。8.2.5.2飼養(yǎng)場(chǎng)的金屬設(shè)施、設(shè)備可采取火焰、熏蒸等方式消毒；養(yǎng)畜場(chǎng)的圈舍、場(chǎng)地、車輛等，可選用2%燒堿等有效消毒藥消毒；飼養(yǎng)場(chǎng)的飼料、墊料等，可采取深埋發(fā)酵處理或焚燒處理；糞便消毒采取堆積密封發(fā)酵方式。皮毛消毒用環(huán)氧乙烷、福爾馬林熏蒸等。9.1免疫接種9.1.1免疫接種的對(duì)象：牛、羊等。種用、乳用動(dòng)物禁止免疫。9.1.2免疫接種的范圍：甘孜州、阿壩州部分疫區(qū)縣。9.1.3免疫接種時(shí)間：根據(jù)所選擇疫苗的使用說(shuō)明書要求的時(shí)間和程序進(jìn)行免疫。9.1.4免疫接種方式：根據(jù)不同疫苗、不同畜種選用適合的免疫接種方式。9.1.5疫苗的運(yùn)輸、貯藏和使用應(yīng)符合《獸藥管理?xiàng)l例》的相關(guān)規(guī)定。9.2疫苗接種要求9.2.1疫苗使用前須檢查包裝，是否破損。9.2.2對(duì)家畜的要求：接種的家畜臨床未見異常，處于安靜狀態(tài)，畜體清潔。病畜、體質(zhì)瘦弱畜暫不接種，待患病畜康復(fù)后再按規(guī)定接種。9.2.3器械要求9.2.3.1根據(jù)接種途徑、畜種及其日齡等因素，選擇適合的針頭或灌喂器具。9.2.3.2注射器和針頭應(yīng)潔凈，并用濕熱方法高壓滅菌或用潔凈水加熱煮沸消毒至少15分鐘。不可使用化學(xué)方法消毒。9.2.3.3滅菌后的注射器與針頭放置7d以上的，使用前應(yīng)重新滅菌消毒。9.2.4接種操作9.2.4.1疫苗在使用間歇中應(yīng)冷藏，避免日光直射。9.2.4.2疫苗稀釋后，應(yīng)放在冷藏容器內(nèi)，嚴(yán)禁凍結(jié)。氣溫在15℃以下，須在6h內(nèi)用完；氣溫在159.2.4.3吸出的疫苗不可回注于瓶?jī)?nèi)；針筒排氣溢出的疫苗應(yīng)吸積于酒精棉球上，用過(guò)的酒精棉球、碘酊棉等應(yīng)集中無(wú)害化處理。9.2.4.4注射部位必須消毒，疫苗的稀釋液及注射劑量按疫苗使用說(shuō)明書進(jìn)行。9.2.4.5嚴(yán)禁與其它疫苗混合注射，接種時(shí)每頭畜須更換針頭。9.2.4.6緊急接種時(shí)，免疫接種順序應(yīng)從安全區(qū)到受威脅區(qū)，最后到疫區(qū)。59.3免疫檔案免疫接種后應(yīng)建立免疫檔案。免疫檔案須填寫畜主姓名、畜種、疫苗名稱、疫苗生產(chǎn)廠家、疫苗來(lái)源、批號(hào)、免疫劑量、免疫時(shí)間、免疫耳標(biāo)編號(hào)、防疫員簽名、畜主簽名等內(nèi)容。10.1監(jiān)測(cè)方法常規(guī)監(jiān)測(cè)以血清學(xué)方法為主，按6.2中的監(jiān)測(cè)方法進(jìn)行。10.2監(jiān)測(cè)范圍、數(shù)量10.2.1所有的奶牛、奶山羊和種畜每年必須進(jìn)行1次以上血清學(xué)監(jiān)測(cè)。10.2.2免疫地區(qū)：對(duì)新生畜、未免疫畜、免疫一年半或口服免疫一年以后的牲畜進(jìn)行監(jiān)測(cè)(豬可在口服免疫半年后進(jìn)行)。監(jiān)測(cè)至少每年進(jìn)行一次，每個(gè)縣抽檢300頭(只)以上。10.2.3非免疫地區(qū)：監(jiān)測(cè)至少每年進(jìn)行一次。每個(gè)縣抽檢200頭(只)以上對(duì)成年動(dòng)物監(jiān)測(cè)時(shí)，牛在8月齡以上，羊、豬在5月齡以上，懷孕動(dòng)物則在初產(chǎn)后半個(gè)月至1個(gè)月間進(jìn)行；免疫接種過(guò)的動(dòng)物，在接種后18個(gè)月(豬接種后6個(gè)月)進(jìn)行。10.4監(jiān)測(cè)結(jié)果處理及時(shí)對(duì)監(jiān)測(cè)結(jié)果分析、匯總和報(bào)告，確診為陽(yáng)性動(dòng)物時(shí)，應(yīng)立即進(jìn)行無(wú)害化處理。11人員防護(hù)11.1飼養(yǎng)場(chǎng)工作人員：每年要定期進(jìn)行健康檢查。發(fā)現(xiàn)有患布魯氏菌病的應(yīng)及時(shí)調(diào)離崗位，隔離治療。工作人員的工作服、用具要保持清潔，不得帶出場(chǎng)。11.2疫情處置人員：進(jìn)入感染或可能感染場(chǎng)和無(wú)害化處理地點(diǎn)，需要穿防護(hù)服，戴可消毒的橡膠手套，戴標(biāo)準(zhǔn)手術(shù)用口罩和護(hù)目鏡，穿膠靴。處理工作完畢后，對(duì)場(chǎng)地及其設(shè)施進(jìn)行徹底消毒。在場(chǎng)內(nèi)或處理地的出口處脫掉防護(hù)裝備，將脫掉的防護(hù)裝備置于容器內(nèi)進(jìn)行消毒處理。對(duì)換衣區(qū)域進(jìn)行消毒，人員用消毒水洗手，工作完畢要洗浴。6(規(guī)范性附錄)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)A.1材料準(zhǔn)備A.1.1具備國(guó)家批文的布魯氏菌ELISA檢測(cè)試劑盒A.1.2蒸餾水或超純水A.1.3lA.1.4一次性滴頭A.1.5酶標(biāo)儀A.2檢測(cè)步驟A.2.1所有試劑(除酶標(biāo)結(jié)合物外)使用前必須恢復(fù)至室溫。推薦試劑在37℃預(yù)熱20-30min。A.2.2加樣：除對(duì)照孔外，每孔中加入90ul稀釋液，在稀釋液中加入10ul的1/10預(yù)稀釋的樣品，最后加入100ul對(duì)照孔。室溫(20-25℃)孵育1h。A.2.3