添加劑預混合飼料中氯化膽堿的測定 編制說明

《預混合飼料中氯化膽堿的測定》（公開征求意見稿）I一、工作簡況 1.1任務來源 1.2制定背景 1.3工作過程 1.3.2技術路線和項目方案的制定 2二、標準編制原則、主要內(nèi)容及其確定依據(jù) 32.1標準編制原則 32.2主要內(nèi)容 32.3主要技術內(nèi)容確定的依據(jù) 32.3.1樣品前處理條件優(yōu)化 32.3.2稱樣量考察 52.3.3流動相考察 62.3.4色譜柱考察 72.3.5色譜條件的選擇性、專屬性和穩(wěn)定性考察 82.3.6試樣溶液穩(wěn)定性考察 92.3.7標準溶液穩(wěn)定性考察 92.3.8其他陽離子干擾試驗考察 2.3.9線性范圍 2.3.10方法檢出限和定量限 2.3.11方法精密度考察 2.3.12回收率試驗 三、試驗驗證的分析、綜述報告，技術經(jīng)濟論證，預期的經(jīng)濟效果 13四、與國際、國外同類標準技術內(nèi)容的對比情況 五、采標情況，以及是否合規(guī)引用或采用國際國外標準 13六、與有關法律、法規(guī)的關系 七、重大分歧意見的處理經(jīng)過和依據(jù) 八、涉及專利的有關說明 九、貫徹國家標準的要求，以及組織措施、技術措施、過渡期和實施日期的建議等措施建議 14十、其他應當說明的事項 1四川威爾檢測技術股份有限公司、國糧武漢科學研究設計院有限公司[國家飼料質量檢驗檢測中心（武漢）]和全國畜牧總站承擔《添加劑預混合飼料中氯化膽2024年1月，四川威爾檢測技術股份有限公司等接到《添加劑預混合飼料表1標準主要起草人員及任務分工人員職稱承擔任務2人員職稱承擔任務 3選取了3個不同含量的預混合飼料樣品，分別稱取2g左右樣品于100mL容量瓶中，加約60mL水，搖勻，采用水浴、空氣浴和超聲等3種加熱方式，表2不同加熱方式氯化膽堿測定結果（n=3）樣品名稱含量（mg/kg）水?。?0℃)空氣?。?0℃)超聲（70℃)8145.78056.18251.7樣品2#15671.915429.116096.6樣品3#8203.88247.78690.14選取了3個不同含量的預混合飼料贗品，分別稱取2g左右樣品于100mL表3不同提取溫度氯化膽堿測定結果（n=3）樣品名稱含量（mg/kg）50℃60℃70℃6137.26442.46511.86417.8樣品2#11302.211502.612030.812038.8樣品3#6706.86819.27092.26980.4每10min搖勻，冷卻至室溫，用三氯甲烷-甲醇溶液定容至刻度。搖勻，過濾。5表4不同前處理方式氯化膽堿測定結果（n=3）樣品名稱含量（mg/kg）三氯甲烷-甲醇三氯甲烷-甲醇三氯甲烷-甲醇+EDTA（2g）三氯甲烷-甲醇+EDTA（3g）1671.91711.8樣品2#1807.31822.91775.91857.3圖2未添加EDTA離子色譜圖圖3添加3gEDTA離子色譜圖圖4添加和不添加EDTA復合預混合飼料試樣溶液離子色譜圖離子色譜圖6中，用水稀釋至刻度，混勻，過0.45μm微孔濾膜，備用。結量基本滿足檢測要求，考慮樣品的均勻性和代表性，最終確表5不同稱樣量氯化膽堿測定結果（n=3）樣品名稱含量（mg/kg）0.2g0.5g2g6266.56591.96670.36511.8樣品2#12604.112495.713504.312038.8表6淋洗液考察試驗條件No.淋洗液成分流速（mL/min）流動相1甲磺酸溶液，3.5mmol/L流動相2檸檬酸溶液（檸檬酸+嘧啶二羧酸）流動相3硝酸溶液，9mmol/L表7不同流動相氯化膽堿測定結果1（n=3）樣品名稱含量（mg/kg）水3.5mmol/L甲磺酸9mmol/L硝酸6833.76871.76817.9樣品2#12844.811725.912527.7樣品3#7112.47036.67179.6表8不同流動相氯化膽堿測定結果2（n=3）樣品名稱20μg/mL氯化膽堿標準溶液峰面積水3.5mmol/L甲磺酸9mmol/L硝酸平行1—0.2673200.770628平行2—0.2677150.7695124平行3—0.2669580.77112547圖59mmol/L硝酸淋洗液20μg/mL氯化膽堿離子色譜圖圖63.5mmol/L甲磺酸淋洗液20μg/mL氯化膽堿離子色譜圖分別考察盛翰SH-CC-4、皖儀MS-5C-P2和ThermoCS1圖7CS12A陽離子色譜柱氯化膽堿離子色譜圖圖8SH-CC-4陽離子色譜柱氯化膽堿離子色譜圖8圖9MS-5C-P2陽離子色譜柱氯化膽堿離子色譜圖，，不同濃度目標化合物標準工作溶液保留時間的RSD值均小于0.50%，峰面積的和專屬性滿足定性和定量測定要求，該方法選擇性、專屬性表9色譜條件的選擇性、穩(wěn)定性和專屬性考察試驗結果氯化膽堿(μg/mL）出峰時間（min）RSD（%）平行1平行2平行3平行4平行5平行60.7512.156712.166712.166712.150012.170012.11330.1712.123312.103312.113312.113312.06670.173.012.063312.066712.090012.086712.096711.96670.407.511.910011.876711.846711.863311.880011.74000.5011.706711.703311.733311.723311.736711.75670.173011.523311.533311.536711.536711.53670.056011.376711.370011.370011.353311.366711.35330.08氯化膽堿(μg/mL）峰面積(μs/cm*min）RSD（%）平行1平行2平行3平行4平行5平行60.750.0654030.0664710.0618880.0658270.0633330.0635142.740.1320020.1274530.1250390.1328470.1287710.1337412.6493.00.2474520.2468970.2342050.2494680.2445770.2256733.897.50.6753440.658720.6450770.6652520.6376070.6788742.481.4651091.5453611.5665251.4660741.5506791.562843303.1366083.160273.1478873.1700633.1697623.1955560.65604.8042474.8166454.8391124.7760634.8403824.8365450.53性，結果見表10。結果表明，試樣溶液放置0h~24h峰面積變化不大，偏差均表10試樣溶液穩(wěn)定性考察結果（n=3）目標化合物時間（h）峰面積（mAU）偏差/%氯化膽堿00.81329740.83363580.8121720.8165280.844238200.820537240.816598配制2.0mg/mL氯化膽堿標準儲備溶液，置于2℃~8℃冰箱中保存，每10次氯化膽堿標準溶液穩(wěn)定性，結果見表11。結果表明，氯化膽堿標準儲備溶液90天內(nèi)穩(wěn)定，確定氯化膽堿標準儲備溶液有效期為3個月。表11標準溶液穩(wěn)定性考察結果序號檢測濃度/(μg/mL）配置濃度/(μg/mL）偏差/%平行1平行2平行3平均值183.371283.809482.245283.141983.77430.38283.469183.259482.958483.229083.77430.33382.54783.803382.76183.037183.77430.44483.803982.535479.962482.100683.7743序號檢測濃度/(μg/mL）配置濃度/(μg/mL）偏差/%平行1平行2平行3平均值582.632182.686382.974682.764383.77430.61682.432382.176582.696482.435183.77430.81783.132382.079982.924482.712283.77430.64881.639082.090282.933882.221083.77430.94982.432382.080482.974482.495783.77430.77圖10鋰、鈉、銨、鉀、鎂和鈣對氯化膽堿標準溶液色譜圖樣溶液中氯化膽堿色譜峰的保留時間應與標準溶液中氯化膽堿色譜峰的保留時表12氯化膽堿線性范圍、線性方程及決定系數(shù)（R2）化合物線性范圍(μg/mL）線性方程R2氯化膽堿y=0.077186x-0.086930.999373量限。結合稱樣質量、定容體積和稀釋體積，計算檢出限20mg/kg、定量限50氯化膽堿的測定結果批內(nèi)、批間的相對標準偏差（表13精密度試驗結果樣品批次氯化膽堿/mg/kg平均值mg/kg批內(nèi)RSD(%)批間RSD(%)復合預混合飼料1I12480126891261412979129071299512777126441228012616126501255913235126642.46III123641176711906126951209713093123214.09復合預混合飼料2I886.5909.1886.9854.6862.9838.78732.942.82871.2855.3861.4840.6857.3850.1856III896.4869.8848.4824.7854.0813.38513.54維生素預混合飼料I819.6823.3789.0788.4777.5814.58022.413.03851.5854.1840.7856.0841.8841.38480.83III814.3794.2808.7800.4846.2827.38152.33間相對標準偏差，結果見表14。結果表明，按照上述方法和條件，氯化膽堿的平均回收率在70.26%~100.39%，批內(nèi)相對標準偏差在0.64%表14回收率試驗結果ⅠⅡⅢⅠⅡⅢⅠⅡⅢⅠⅡⅢⅠⅡⅢⅠⅡⅢ果目前，對比ISO等國際組織和其他國家有關預混合飼料中氯化膽堿檢測的標準方法、與國內(nèi)同類標準技術內(nèi)容對比情況見表15。結果表明，本標準檢測表15與國內(nèi)外同類標準技術內(nèi)容的對比情況標準編號和名稱適用范圍檢測項目檢出限和定量限GB/