DB33T 752-2022 植物種苗組培快繁技術(shù)規(guī)程　

33浙江省市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布I 1 1 1 1 2 2 3 6 7 8 9 本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定本標(biāo)準(zhǔn)代替DB33/T752—2009《植物種苗組培快）；k)增加了溫室育苗常見病蟲害及防治1植物種苗組培快繁技術(shù)規(guī)程管理、組培苗生產(chǎn)技術(shù)流程、無(wú)菌接種操作、組培苗移栽和穴盤苗生產(chǎn)及包裝、標(biāo)簽NY/T2306花卉種苗組培快繁技術(shù)規(guī)程4植物組培工廠建設(shè)4.1工廠選址廠址宜選擇地勢(shì)較高、排水良好，遠(yuǎn)離污染源，通水通電，交通便24.2廠房建設(shè)4.3功能區(qū)規(guī)劃及要求4.3.1組培車間樓；組培室凈道、污道分離，人、物流分開。接種操作區(qū)按100級(jí)凈化標(biāo)準(zhǔn)設(shè)計(jì)；培4.3.2管理區(qū)4.3.3溫室5設(shè)備、器材及試劑植物組織培養(yǎng)所需器材包括各類器材、器皿以及其它常用消耗品等，具體參見污染的容器在未打開的情況下，在0.10MPa～0.11MPa、121℃條件下，滅菌30分鐘～40分鐘。3清空培養(yǎng)容器內(nèi)部材料和培養(yǎng)基后放入洗潔精或洗衣粉溶液中浸泡，浸泡時(shí)間不應(yīng)少于1小時(shí)，然組培車間人員換鞋、穿工作服后，經(jīng)風(fēng)淋除塵進(jìn)入車間。進(jìn)出隨手車間內(nèi)部每周用消毒液(0.1%新潔爾滅溶液等)清潔車間內(nèi)部地面、門窗等。每?jī)芍苡米贤鉄粽丈?0分鐘或臭氧發(fā)生器消毒60分鐘。紫外燈按每平方米配置2瓦的比例進(jìn)行配置，臭氧消毒時(shí)，內(nèi)部空間保持70%～80%相對(duì)濕度，溫度保持在25℃~35℃,臭氧濃度為10毫克/立方米～20毫克/立方米。定期檢查培養(yǎng)室內(nèi)漏雨及墻壁長(zhǎng)霉情況，發(fā)現(xiàn)有霉菌時(shí)應(yīng)及時(shí)去除，并用防菌涂料粉刷墻壁。轉(zhuǎn)移至洗滌間，按照6.1進(jìn)行滅菌，然后正常清洗，并對(duì)處理情況作記錄。污染率若超過(guò)3%，應(yīng)及時(shí)反清潔通風(fēng)管道；定期檢查各種設(shè)備使用狀況，發(fā)現(xiàn)異常應(yīng)及時(shí)進(jìn)行廠房外部保持清潔、無(wú)堆積雜物，定期清理廠4母液配制時(shí)，不同試劑分開稱量，單獨(dú)溶解，再逐步混合后定容。配置好的母液應(yīng)無(wú)色透明(鐵鹽考該方法；植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的母液配制及保存方法見附將需要過(guò)濾滅菌的試劑按照附錄F配制成溶液，超凈工作臺(tái)上，用無(wú)菌的過(guò)濾器(濾膜孔徑為0.22根據(jù)培養(yǎng)材料及培養(yǎng)目的選擇合適的基本培養(yǎng)基和植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑種類并準(zhǔn)備好各類容器、蒸餾水(或純凈水)、瓊脂(或其他類型凝固劑)、蔗糖(或白砂糖以配制1升培養(yǎng)基為例。按比例加入各種母液并充分?jǐn)嚢杈鶆?，攪拌，使糖充分溶解。另取容器，加入蒸餾水400毫升～500毫升(所需配制培養(yǎng)基體積的40%～50%)，再加入瓊脂6克～9克，加熱攪拌使瓊脂溶化(如更換瓊脂生產(chǎn)公司及批次，在培養(yǎng)基配制前須取少量瓊脂測(cè)試合適用量)。將配制好的各種母液混合液加入到融化的瓊脂中，攪拌均勻，加蒸餾水定容，用1mol/L的HCl或1mol/L的NaOH調(diào)節(jié)培養(yǎng)基pH至要求值(一般為pH5.5～pH6.0)，然后根據(jù)不同需要定量分裝，培養(yǎng)基厚度以高于瓶底1.0厘米～1.5厘米為宜,分裝時(shí)培養(yǎng)基不得沾在培養(yǎng)瓶口周圍及外壁。分培養(yǎng)基封口后，0.1MPa～0.11MPa、121℃環(huán)境下，滅菌18分鐘～20分鐘，滅菌完成后待滅菌鍋內(nèi)溫度低于90℃時(shí)，將培養(yǎng)基及時(shí)取出，擰緊瓶蓋；若用組培專用封口膜封口則無(wú)需擰緊。滅菌后的培5天后再用，但存儲(chǔ)時(shí)間不應(yīng)超過(guò)15天。培養(yǎng)基當(dāng)天配制當(dāng)天滅菌。接種器械用紙或布包好后，在1.15植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑經(jīng)過(guò)濾滅菌或母液解凍，然后在超凈工作臺(tái)上加到經(jīng)高溫滅菌后溫度降至50℃~55℃70%～75%酒精溶液并沒過(guò)外植體表面0.5厘米～1.0厘米，輕搖錐形瓶以除去然后清洗，待用，氯化汞廢液按NY/T2在超凈工作臺(tái)上，將經(jīng)消毒的外植體取出放在接種盤內(nèi)或無(wú)菌紙上，稍晾干表面水分，1瓶接種16準(zhǔn)備好體積比70%～75%酒精溶液、無(wú)菌脫脂棉或紗布、接種器械等。打開超凈工作臺(tái)(或潔凈無(wú)菌接種室)電源，開啟超凈工作臺(tái)的風(fēng)機(jī)，若使用電熱滅菌器，同時(shí)打開電熱滅菌器電源75%酒精溶液擦拭超凈工作臺(tái)內(nèi)壁，打開超凈工作臺(tái)、接種室、更衣室及緩沖室的紫外燈30分鐘；紫外接種室，上超凈工作臺(tái)后用70%～75%的酒精溶液進(jìn)入接種室前，仔細(xì)檢查培養(yǎng)基和母瓶，若發(fā)現(xiàn)污染立即剔除，按6.1滅菌、清洗。接種材料和培養(yǎng)基通過(guò)傳遞窗進(jìn)入接種室，用體積比70%～75%酒精溶液噴霧培養(yǎng)基和母瓶表面，放于超凈工作臺(tái)旁盤口與超凈工作臺(tái)桌面接觸的接種盤不可用，與超凈工作臺(tái)接觸的接種紙也不可用。室進(jìn)行培養(yǎng)培養(yǎng)，培養(yǎng)室光照強(qiáng)度、培養(yǎng)溫度7熄滅酒精燈或關(guān)閉電熱滅菌器電源。清理干凈超凈工作臺(tái)面，并用體積比70%～75%酒精溶液擦拭），若火勢(shì)較大，用滅火器撲滅；更大火情應(yīng)立即疏散人員9組培苗移栽和穴盤苗生產(chǎn)9.1煉苗將符合移栽要求的組培瓶苗放置在有散射光(60μmol.m-2.s-1～100μmol.m-2.s-1)的溫室中，溫度宜控制在15℃~35℃,培養(yǎng)3天以上。移栽2周～4周內(nèi)用薄膜小拱棚保濕，相對(duì)濕度控制在80%～95%，當(dāng)?shù)谝黄氯~完全張開后，降低薄膜小拱棚內(nèi)濕度，4周～6周后完全打開小拱棚，大棚相對(duì)濕度保持在60%～80%。移栽4周內(nèi)，薄膜拱棚內(nèi)的光照強(qiáng)度控制在60μmol.m-2.s-1～100μmol.m-2.s-1，之后逐漸增大光照強(qiáng)度。室外光照強(qiáng)度大9.4肥水管理9.5病蟲害防治移栽4周后，每周噴施75%百菌清可濕性粉劑或80%多菌靈可濕性粉劑1000倍～1250倍液1次；移栽懸掛高度應(yīng)高于穴盤苗15厘米，密度以每20平方米懸掛1張為宜。溫室育苗常見病蟲害及防治方法參見8種苗運(yùn)輸過(guò)程中應(yīng)避免倒置、擠壓、日曬、雨淋，溫度保持10℃~25℃,相對(duì)濕度保持60%～90%9 ————滅菌不能高溫滅菌的試劑———精確稱量微量元素及————— — 配置培養(yǎng)基時(shí)量取用-——— — —————— ————— — ——— —————————NH4NO3室溫、干燥、避直射室溫、干燥、避直射2O室溫、干燥、避直射室溫、干燥、避直射MgSO420室溫、干燥、避直射室溫、干燥、避直射4)2SO4室溫、干燥、避直射NaH2PO42O室溫、干燥、避直射NaH2PO4室溫、干燥、避直射2O室溫、干燥、避直射2O室溫、干燥、避直射室溫、干燥、避直射Na2SO4室溫、干燥、避直射Manganese(II)sulfaMnSO42O室溫、干燥、避直射MnSO42O室溫、干燥、避直射2O室溫、干燥、避直射室溫、干燥、避直射室溫、干燥、避光、Na2MoO42O室溫、干燥、避直射2O室溫、干燥、避直射2O室溫、干燥、避直射2O室溫、干燥、避直射4)3室溫、干燥、避直射2O室溫、干燥、避直射室溫、干燥、避直射室溫、干燥、避直射室溫、干燥、避直射室溫、干燥、避直射Myo-inositol室溫、干燥、避直射————室溫、干燥、避直射室溫、干燥、避直射Agar12H18O9)n室溫、干燥、避直射室溫、干燥、避直射室溫、干燥、避直射N6-異戊烯基腺嘌呤N6-(2-Isopentenyl)aden室溫、干燥、避直射室溫、干燥、避直射Adenine(A)室溫、干燥、避直射室溫、干燥、避直射室溫、干燥、避直射室溫、干燥、避光、NaClOAR；5.2%室溫、干燥、避直射HgCl2室溫、干燥、避光、2H4O)n————室溫、干燥、避直射———室溫、干燥、避直射C室溫、干燥、避直射低溫、干燥、避直射NaOH室溫、干燥、避直射表D.1植物組織培養(yǎng)長(zhǎng)陽(yáng)基本培養(yǎng)基Murashige&WoodyplantWhite NH4NO3————2O—MgSO42O NaH2PO42O——————Na2HPO4—————2O——————2O—————— Na2SO4——————MnSO42O7—2O2313Murashige&WoodyplantWhite—Na2MoO42O 2O——2O ——————2O——4)3——————MS培養(yǎng)基母液配制見表E.1。NH4NO3MgSO42O2O2OMnSO42ONa2MoO22O2O52O52Myo-inositol2ONa2.EDTA用母液濃度為0.1mg/ml、0.5過(guò)濾滅菌、現(xiàn)配現(xiàn)用或過(guò)濾后小先用適量二甲基亞砜(DMSO)充分用母液濃度為0.05mg/ml、0.1常用母液濃度為0.1mg/ml、0.5冷藏(4℃)，密常用母液濃度為0.1mg/ml、0.5↓!培基制培條優(yōu)養(yǎng)配及養(yǎng)件化!!培基制培條優(yōu)養(yǎng)配及養(yǎng)件化!優(yōu)化d)合理控制馴化濕度，發(fā)病時(shí)要適當(dāng)減少灰霉病發(fā)病癥狀如圖H.2所示,在11月～次年4月均會(huì)出現(xiàn)，最早在葉尖出現(xiàn)灰白色霉層，逐漸擴(kuò)展至整個(gè)植株，浸染部位呈水漬狀，最后植株a)合理控制溫室濕