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DB3301杭州市質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布I本標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)GB/T1.1-2009給出的規(guī)則起草。本標(biāo)準(zhǔn)由杭州市農(nóng)業(yè)局提出并歸口。請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專(zhuān)利,本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別這些專(zhuān)利的責(zé)任。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位:浙江傳化生物技術(shù)有限公司。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人:米曉潔、張明奎、榮松、俞永奇。1DB3301/T1062—2018鐵皮石斛組織培養(yǎng)育苗技術(shù)規(guī)程本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了鐵皮石斛制種、組培育苗、煉苗與移栽的要求及模式圖。本標(biāo)準(zhǔn)適用于杭州市鐵皮石斛組織培養(yǎng)育苗生產(chǎn)。2規(guī)范性引用文件下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T3543(所有部分)農(nóng)作物種子檢驗(yàn)規(guī)程GB4285農(nóng)藥安全使用標(biāo)準(zhǔn)DB33/T635—2015鐵皮石斛生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程3術(shù)語(yǔ)和定義DB33/T635—2015界定的術(shù)語(yǔ)和定義適用于本標(biāo)準(zhǔn)。4制種4.1品種選擇根據(jù)生產(chǎn)實(shí)際,選擇優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)并經(jīng)過(guò)鑒定確認(rèn),符合GB/T3543(所有部分)要求的品種。4.2授粉4月~6月,進(jìn)行人工授粉,授粉后掛牌標(biāo)記,采用物理隔絕。4.3采收9月~10月,當(dāng)蒴果開(kāi)始轉(zhuǎn)黃時(shí),選擇飽滿(mǎn)的果實(shí)采收備用。5組培育苗5.1蒴果消毒蒴果經(jīng)過(guò)后熟,除去表面的雜物,在超凈工作臺(tái)上用75%的酒精浸泡30秒,無(wú)菌水清洗干凈,再放入0.5%的次氯酸鈉溶液中浸泡10分鐘~15分鐘后,用無(wú)菌水沖洗3次~5次。5.2種子保存2DB3301/T1062—2018在超凈工作臺(tái)上無(wú)菌手術(shù)刀、鑷子將滅菌好的蒴果剖開(kāi),將種子密封貯藏于5毫升~10毫升無(wú)菌玻璃瓶中,每瓶保存1個(gè)蒴果的種子。將裝好種子的玻璃瓶置于3℃~5℃的冰箱中保存。保存4個(gè)月~6個(gè)月。5.3萌發(fā)培養(yǎng)5.3.1播種用75%酒精擦拭裝有種子的玻璃瓶表面,置于超凈工作臺(tái)上,用無(wú)菌鑷子均勻撒播于萌發(fā)培養(yǎng)基中。萌發(fā)培養(yǎng)基的基本培養(yǎng)基為MS,激素和添加物配方見(jiàn)附錄A。5.3.2培養(yǎng)條件天~12小時(shí)/天,培養(yǎng)溫度為25℃±2℃。5.4分化培養(yǎng)5.4.1轉(zhuǎn)接培養(yǎng)培養(yǎng)60天~75天后,將原球莖均勻地轉(zhuǎn)接到分化培養(yǎng)基上,分化培養(yǎng)基的基本培養(yǎng)基為MS,激素和添加物配方見(jiàn)附錄A。5.4.2培養(yǎng)條件度為25℃±2℃。5.5壯苗與生根培養(yǎng)5.5.1轉(zhuǎn)接培養(yǎng)培養(yǎng)60天~70天后,轉(zhuǎn)接到壯苗與生根培養(yǎng)基上。壯苗與生根培養(yǎng)基的基本培養(yǎng)基為MS,激素和添加物配方見(jiàn)附錄A。5.5.2培養(yǎng)條件度為25℃±2℃。組培苗達(dá)到DB33/T635—2015中合格苗標(biāo)準(zhǔn)時(shí),即可煉苗。6煉苗與移栽6.1煉苗組培苗移栽前放置于栽培環(huán)境相近的設(shè)施大棚中,遮光率80%~85%,溫度25℃~28℃,自然光閉瓶煉苗3周~4周,定期用殺菌劑消毒。殺菌液應(yīng)符合GB4285規(guī)定。6.2移栽小心取出合格組培苗,用清水洗凈培養(yǎng)基后,用0.1%高錳酸鉀溶液浸泡3分鐘~5分鐘。晾干至根部發(fā)白,種植于由松麟、木屑、碎石等組成的基質(zhì)中。基質(zhì)在使用前應(yīng)堆制發(fā)酵或高溫滅菌處理。3DB3301/T1062—20187模式圖鐵皮石斛組織培養(yǎng)育苗技術(shù)模式圖見(jiàn)附錄B。4DB3301/T1062—2018(資料性附錄)鐵皮石斛組織培養(yǎng)各生長(zhǎng)階段培養(yǎng)基激素和添加物推薦配方鐵皮石斛組織培養(yǎng)各生長(zhǎng)階段培養(yǎng)基激素和添加物推薦配方見(jiàn)表A.1表A.1鐵皮石斛組織培養(yǎng)各生長(zhǎng)階段培養(yǎng)基激素和添加物推薦配方(資料性附錄)5表B.1鐵皮石斛組織培養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)化育苗技術(shù)模式圖5制種種子保存萌發(fā)分化壯苗1、品種選擇:根據(jù)生產(chǎn)實(shí)際,選擇優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)的定確認(rèn),符合GB/T3543(所有部分)要求的品種。3、采收:9月~10月,當(dāng)蒴果開(kāi)始轉(zhuǎn)黃時(shí)1、蒴果消毒:蒴果經(jīng)過(guò)后熟,除去表面的雜凈工作臺(tái)上用75%的酒精浸泡30秒,無(wú)菌水清洗干再放入0.5%的次氯酸鈉溶液中浸泡10分鐘~15分鐘后,2、種子保存:在超凈工作臺(tái)上無(wú)菌手術(shù)刀、菌好的蒴果剖開(kāi),將種子貯藏于5毫升~10毫升無(wú)菌玻璃瓶中,每瓶保存1個(gè)蒴果的種子。將裝好種子的玻璃瓶置于3℃~5℃的冰箱中保存。保存4個(gè)月~6個(gè)月。于超凈工作臺(tái)上,用無(wú)菌鑷子均勻撒播于萌發(fā)培養(yǎng)基中,萌發(fā)培養(yǎng)基的基本培養(yǎng)基為MS,激素和添加物配方見(jiàn)附錄A。時(shí)間8小時(shí)/天~12小時(shí)/天,培養(yǎng)溫度為25℃±2℃。轉(zhuǎn)接到分化培養(yǎng)基上,分化培養(yǎng)基的基本培養(yǎng)基為根培養(yǎng)基上,壯苗與生根培養(yǎng)基的基本培養(yǎng)基為MS,2015中合格苗標(biāo)準(zhǔn)時(shí),即可煉苗。1、煉苗:組培
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