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DBS江蘇省衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會發(fā)布I1食品安全地方標(biāo)準(zhǔn)食源性致病微生物快速檢測核細(xì)胞增生李斯特氏菌、大腸埃希氏菌O157:H7、副溶血性弧菌和志賀氏菌):),3.6引物和探針:引物和探針序列見附錄2):3.7.3亞硒酸鹽胱氨酸(SC)增菌):恒溫空氣振蕩搖床,200r/min振溫空氣振蕩搖床,200r/min振搖4oC、200r/min振搖4h;移取0.1mL,r/min,4oC離心5min,取上清,-20oC保存,作為模板DNA備用。注:也可使用商品化的細(xì)菌DNA提取試劑盒,按照試劑盒說明書操作提取3陽性對照應(yīng)出現(xiàn)典型擴(kuò)增曲線,Ct值<30;同時,陰性對照和空白對照應(yīng)未檢出;Ct值≤35,樣品結(jié)果為陽性;Ct值>35而<40,為可疑結(jié)果。陽性結(jié)果與可疑結(jié)果須按照相應(yīng)GB4789標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行檢驗(yàn),根據(jù)國家標(biāo)準(zhǔn)方法得出的結(jié)果判4.5檢測過程中防止交叉污染及生物安全檢測過程中防止交叉污染按照GB/T27403中的規(guī)定執(zhí)行,4A.1致病菌實(shí)時熒光PCR法中所用的引物探針序列見表A.AATATTAATTGT-3’5’-CGCACAAGGCTCGACGGCTCATC-3’CCTGCGACA-3’GCTTT-3’ACCTTTGTA-3’AACCTGGT-3’CTGG-3’CTA-3’TACCAAAGG-3’A-3’GTC-3’ATGGTCTCAA-3’TTAAGG-3’CAAGGTGAT-3’TTCC-3’AA-3’
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