醫(yī)學(xué)宮頸液基細(xì)胞學(xué)制片技術(shù)和鏡下診療專題課件

宮頸液基細(xì)胞學(xué)制片技術(shù)和鏡下診療主要內(nèi)容液基細(xì)胞學(xué)常見制片技術(shù)液基細(xì)胞學(xué)染色方法常見質(zhì)量問題與鏡下形態(tài)宮頸液基細(xì)胞學(xué)質(zhì)量控制4123（一）液基細(xì)胞學(xué)常見制片技術(shù)1.膜式技術(shù)2.沉降式技術(shù)3.離心甩片技術(shù)4.手工制片技術(shù)5.其他膜式技術(shù)最早出現(xiàn)的液基細(xì)胞學(xué)制片技術(shù)原理—膜式負(fù)壓過濾代表產(chǎn)品：TCT膜式技術(shù)制片原理宮頸脫落細(xì)胞中常見的成分：黏液，血液，炎性細(xì)胞，上皮細(xì)胞，腫瘤細(xì)胞過濾膜孔徑8um,黏液，紅細(xì)胞及部分直徑較小的炎性細(xì)胞能穿透，而上皮細(xì)胞及腫瘤細(xì)胞則被“卡”在過濾膜上，從而達(dá)到去除雜質(zhì)，收集有效診斷細(xì)胞成分的目的。膜孔阻塞會造成細(xì)胞成團(tuán)細(xì)胞通透力度大小不一，中間視野細(xì)胞偏少，周邊視野細(xì)胞量聚集細(xì)胞團(tuán)被外力壓扁，腺細(xì)胞團(tuán)特有的三維立體結(jié)構(gòu)消失膜式技術(shù)對制片的影響北京英碩力新柏科技有限公司廣州鴻琪光學(xué)儀器科技有限公司福建泰普生物科學(xué)有限公司湖北泰康醫(yī)療設(shè)備有限公司自動化程度最高的制片技術(shù)原理—分離提??；自然沉降代表產(chǎn)品：LCT,LBP沉降式制片技術(shù)原理一：密度分層去除雜質(zhì)宮頸脫落細(xì)胞中常見的成分：黏液，血液，炎性細(xì)胞，上皮細(xì)胞，腫瘤細(xì)胞分離提取液（密度液）比重較保存液大，細(xì)胞沉降到達(dá)兩者交界處，只有自身比重大，能克服下層分離液阻力的細(xì)胞才能繼續(xù)下降，從而被收集。樣本中的粘液，紅細(xì)胞比重輕，無法透過分離提取液，被分層在上部，繼而被去除；上皮細(xì)胞，腫瘤細(xì)胞及部分炎性細(xì)胞則被收集用來制片。沉降式技術(shù)制片原理LCTLBP原理二：重力自然沉降，優(yōu)先富集有效診斷細(xì)胞沉降式技術(shù)視頻..\企業(yè)宣傳片\LBP舊版.VOB6分56秒→8分50秒細(xì)胞自然沉降，與玻片相吸附，沒有外力施壓，某些成團(tuán)的細(xì)胞保持三維立體結(jié)構(gòu)，一方面對判讀來源有幫助，另一方面，鏡下細(xì)胞不在同一層面上，需要調(diào)節(jié)微調(diào)才能觀察清楚沉降式技術(shù)對制片的影響廣州安必平醫(yī)藥科技有限公司廣州鴻琪光學(xué)儀器科技有限公司福建泰普生物科學(xué)有限公司離心甩片技術(shù)耗材離心收集細(xì)胞加入樣本，甩片制片離心甩片技術(shù)原理洗衣機(jī)“脫水”方法。利用離心機(jī)旋轉(zhuǎn)產(chǎn)生的離心力，將“桶里”的細(xì)胞甩到“桶壁”上，制成涂片，再經(jīng)過染色過程完成整個(gè)制片。離心甩片技術(shù)對制片的影響1.樣本只經(jīng)過簡單的離心處理收集細(xì)胞，對樣本中的雜質(zhì)成分不能有效去除，片子質(zhì)量的好壞取決于標(biāo)本質(zhì)量的好壞。2.甩片不能很好的讓細(xì)胞在玻片上均勻分布，一般來說上面少下面多。3.背景欠清晰，細(xì)胞量少，雜質(zhì)多。4.染色效果對比度不好，不鮮艷。（二）液基細(xì)胞學(xué)染色方法《細(xì)胞病理學(xué)技術(shù)制作規(guī)范及質(zhì)量控制》：宮頸細(xì)胞學(xué)制片需采用巴氏染色非宮頸細(xì)胞學(xué)制片可以采用巴氏，HE染色巴氏染色是國際通用的細(xì)胞學(xué)染色方法，在宮頸細(xì)胞學(xué)染色的效果方面，更是明顯優(yōu)于HE染色。1.顯示鱗狀上皮細(xì)胞的分化層次2.更清楚的表達(dá)核的信息3.體現(xiàn)胞漿的色彩變化4.核漿對比度更加鮮明通過巴氏染色，表層角化細(xì)胞胞漿呈現(xiàn)紅色，中層呈藍(lán)色，底層呈藍(lán)綠色；這一特點(diǎn)可以用來判斷雌激素水平的高低，同時(shí)也能對我們的診斷帶來幫助。小的細(xì)胞本應(yīng)該呈現(xiàn)藍(lán)綠色，但是當(dāng)胞漿呈紅色，核有異型時(shí)，提示鱗癌的可能性大。/forum/forum_display.asp?keyno=310086

年齡：40歲判讀結(jié)果：HSIL巴氏染色能更加清楚的表達(dá)核的信息。細(xì)胞學(xué)的診斷關(guān)鍵還是在于核的異型性改變，核膜，核染色質(zhì)，核仁等信息的表達(dá)清楚與否事關(guān)重要。/forum/forum_display.asp?keyno=311018年齡：34歲判讀意見：HSIL巴氏染色能好的顯示胞漿的色彩變化，常見的有：角化不全嗜橘黃改變，病原微生物感染嗜雙色改變，放療反應(yīng)呈多彩性改變/forum/forum_display.asp?keyno=213598判讀意見：滴蟲（巴氏染色）/forum/forum_display.asp?keyno=215119

判讀意見：滴蟲（HE染色）/forum/forum_display.asp?keyno=253767判讀意見：放療反應(yīng)性改變巴氏染色能使細(xì)胞，特別是腫瘤細(xì)胞有更鮮明的核漿對比效果。HE染色的腫瘤細(xì)胞往往染色較深，很難觀察清楚。/forum/forum_display.asp?classcode=108&keyno=300995&pageno=1年齡：35歲活檢結(jié)果：宮頸管腺癌個(gè)人體會：巴氏染色對于腫瘤細(xì)胞的著色，相比于HE染色，顯得“溫和很多”，一般不會出現(xiàn)細(xì)胞核完全染成看不清楚結(jié)構(gòu)的現(xiàn)象。腺細(xì)胞，或成團(tuán)細(xì)胞，著色能力更加強(qiáng)，巴氏染色對這些細(xì)胞的觀察更加清楚。（三）液基細(xì)胞學(xué)制片常見問題與鏡下形態(tài)常見問題1.細(xì)胞量2.細(xì)胞分布3.細(xì)胞染色4.細(xì)胞清晰度5.污染1.標(biāo)本滿意度評估，是否屬于不滿意標(biāo)準(zhǔn)？2.出現(xiàn)的問題是屬于個(gè)別現(xiàn)象還是整體現(xiàn)象？3.整體現(xiàn)象從哪幾方面檢查？細(xì)胞量過少解決思路：TBS報(bào)告系統(tǒng)對于樣本質(zhì)量的評判液基制片：至少應(yīng)有5000個(gè)形態(tài)清晰完整的鱗狀上皮細(xì)胞。大致判斷標(biāo)準(zhǔn)：400倍鏡下，每個(gè)視野大于4個(gè)（膜式），大于8個(gè)（沉降式）。強(qiáng)調(diào)說明：1.計(jì)數(shù)的為鱗狀細(xì)胞，鱗化細(xì)胞也可以算。2.計(jì)數(shù)的為一張制片，而不是幾張制片的總和。3.最低計(jì)數(shù)標(biāo)準(zhǔn)適用于宮頸細(xì)胞學(xué)樣本，對于子宮全切術(shù)后，陰道取樣標(biāo)本不適合。4.任何存在異常細(xì)胞的樣本均屬于合格樣本。傳統(tǒng)涂片最低細(xì)胞量在8000-12000個(gè)。液基制片最低細(xì)胞數(shù)量為5000個(gè)。以保存完好，形態(tài)清晰的鱗狀上皮做為計(jì)數(shù)依據(jù)。1.計(jì)數(shù)的為鱗狀細(xì)胞，鱗化細(xì)胞也可以算。2.計(jì)數(shù)的為一張制片，而不是幾張制片的總和。3.最低計(jì)數(shù)標(biāo)準(zhǔn)適用于宮頸細(xì)胞學(xué)樣本，對于子宮全切術(shù)后，陰道取樣標(biāo)本不適合。4.任何存在異常細(xì)胞的樣本均不再要求細(xì)胞量達(dá)到最低標(biāo)準(zhǔn)。液基涂片中最低鱗狀上皮細(xì)胞數(shù)量（5000個(gè)細(xì)胞／每張）參考指南目鏡/物鏡抹片直徑N18/10

細(xì)胞（個(gè)）／視野N20/10

細(xì)胞（個(gè)）／視野N22/10

細(xì)胞（個(gè)）／視野N18/40

細(xì)胞（個(gè)）／視野N20/40

細(xì)胞（個(gè)）／視野N22/40

細(xì)胞（個(gè)）／視野13mm沉降式95.2118.3143.26.08.49.017mm55.769843.54.35.220mm膜式40.35060.52.53.13.8一張非常滿意的液基細(xì)胞涂片應(yīng)含有4－7萬細(xì)胞滿意的制片效果：鱗狀細(xì)胞量(Bethesda2001):40000~70000細(xì)胞

鱗狀上皮細(xì)胞數(shù)量過少的原因：1.取樣環(huán)節(jié)：取樣刷過軟，取樣醫(yī)生用力過小2.分泌物過多，取樣前沒有擦拭干凈3.制片操作環(huán)節(jié)：抽吸力度過大，轉(zhuǎn)移樣本量過少，玻片吸附力差傳統(tǒng)涂片和液基制片都應(yīng)具有足夠的移形區(qū)成分，至少需要10個(gè)保存完好的宮頸管上皮細(xì)胞或者鱗狀化生細(xì)胞。單個(gè)，成團(tuán)的頸管細(xì)胞都可以做為計(jì)數(shù)。1.子宮全切術(shù)后婦女的標(biāo)本不用計(jì)數(shù)。2.如果病例診斷為HSIL或者CA，就不用報(bào)告有無宮頸管細(xì)胞。3.老年萎縮性樣本，難以區(qū)分基底層，副基底層和鱗狀化生細(xì)胞1.細(xì)胞量過多的表現(xiàn)有哪些？2.出現(xiàn)的是個(gè)別現(xiàn)象還是整體現(xiàn)象？3.出現(xiàn)的為整體現(xiàn)象時(shí)要考慮哪些因素？細(xì)胞量過多解決思路：

細(xì)胞量整體過多時(shí)要考慮以下因素：1.吸附力影響2.轉(zhuǎn)移標(biāo)本量過多3.振蕩不充分1.個(gè)別現(xiàn)象還是整體現(xiàn)象？2.個(gè)別現(xiàn)象考慮什么原因？整體現(xiàn)象考慮什么原因？細(xì)胞分布不均勻解決思路

個(gè)別制片細(xì)胞分布不均1.標(biāo)本自身原因：粘液，血液過多2.玻片吸附力不穩(wěn)定整體制片細(xì)胞分布不均勻1.玻片吸附力低2.技術(shù)自身缺陷1.個(gè)別現(xiàn)象還是整體現(xiàn)象？2.染色深了還是染色淺了？3.細(xì)胞核還是細(xì)胞漿的染色問題?4.影響染色的因素有哪些？染色問題解決思路

巴氏染色的幾點(diǎn)基本常識：1.染色原理：物理作用，化學(xué)作用。2.染料分類：堿性染料，酸性染料。巴氏染色相關(guān)的影響因素1.時(shí)間2.溫度3.PH值4.固定是否及時(shí)5.脫水是否干凈PH值當(dāng)染色效果通過調(diào)節(jié)時(shí)間長短，考慮了溫度變化后，仍然不能獲得滿意效果。需要考慮染液自身或者次緩沖液的PH值。在堿性環(huán)境下蘇木素容易著色，伊紅，亮綠，橘黃不容易著色；反之亦然。固定不及時(shí)核染色質(zhì)信息表達(dá)不清晰，胞漿透明效果差。脫水不干凈整片細(xì)胞顏色單一，不鮮艷，?？梢姳尘爸杏行∷?。干燥現(xiàn)象表現(xiàn)：鱗狀上皮細(xì)胞胞漿里出現(xiàn)深褐色斑點(diǎn)原因：片子染色完成后，封片以前在空氣中暴露時(shí)間過久所致1.制片過程中的交叉污染2.外源性污染污染

如何鑒別制片污染如果不注意制片環(huán)境及操作流程，制片中經(jīng)常會見到污染成分。特別是一些形態(tài)與念珠菌類似的污染菌，往往會影響到我們的判讀結(jié)果，可以從以下幾個(gè)方面加以鑒別：1.，看整體：污染菌常漂浮在片子中，或者是單獨(dú)出現(xiàn)背景中，多的時(shí)候彼此纏繞如雜草一般。念珠菌感染則常常串起在鱗狀上皮團(tuán)之間。2，看反應(yīng)性改變：污染菌不引起細(xì)胞的增生，也不引起細(xì)胞的蟲蛀樣改變及嗜雙色改變。念珠菌感染可以引起鱗狀上皮的普遍性增生，有較明顯的反應(yīng)性改變。3，看具體形態(tài)：污染菌染色常較淺，多為灰紅色或藍(lán)綠色，念珠菌為紅色；污染菌無竹節(jié)狀典型特征，多為面條狀或串珠狀；污染菌的芽孢不如念珠菌典型，或沒有。4，看出現(xiàn)概率（很簡單也很重要）：一批制片中如果出現(xiàn)菌絲的比例過高（個(gè)人覺得超過30%），首先要考慮污染。如何解決制片污染1，徹底清洗機(jī)器管道2，檢查載玻片，蓋玻片是否清潔3，更換自配的試劑，特別要注意清洗試劑瓶，污染菌往往長在瓶壁與瓶底4，實(shí)驗(yàn)室環(huán)境差的話，建議安裝紫外線燈交流，討論在宮頸液基細(xì)胞學(xué)制片中，有些少見的東西，見過一次就不會再忘記，問題是當(dāng)它初次出現(xiàn)的時(shí)候，我們認(rèn)識它嗎？/forum/forum_display.asp?keyno=298540/forum/forum_display.asp?keyno=293946/forum/forum_display.asp?keyno=207890判讀意見：吳策線蟲屬班氏絲蟲型微絲蚴/forum/forum_display.asp?keyno=303175/forum/forum_display.asp?keyno=207888判讀意見：蟯蟲卵/forum/forum_display.asp?classcode=108&keyno=283637&pageno=1判讀意見：鐮刀菌/forum/forum_display.asp?keyno=16654判讀意見：鏈格孢菌屬/forum/forum_display.asp?keyno=19581單細(xì)胞藻類病例討論制片存在哪些質(zhì)量問題？1.細(xì)胞量過多2.染色過深3.雜質(zhì)（粘液）去除不干凈4.成團(tuán)細(xì)胞觀察不清楚解決制片問題以后病例討論結(jié)果第一次制片判讀意見：HSIL第二次制片判讀意見：HSV病理診斷中最大的陷阱是人為造成的。病理診斷醫(yī)生重視制片質(zhì)量問題，是對自己的保護(hù)。（四）液基細(xì)胞學(xué)制片質(zhì)量控制

好的液基細(xì)胞學(xué)制片取決于質(zhì)量優(yōu)異的液基細(xì)胞學(xué)制片產(chǎn)品，取決于責(zé)任心強(qiáng)的液基細(xì)胞學(xué)制片技術(shù)員，取決于懂得制片技術(shù)的細(xì)胞病理診斷醫(yī)生對質(zhì)量的控制。網(wǎng)絡(luò)上很多爭論激烈的帖子，其實(shí)是由于制片效果不好，細(xì)胞形態(tài)觀察不清楚所造成的。實(shí)際工作中