四章中藥制劑含量測定教學文稿

第四章中藥制劑含量測定

長春中醫(yī)藥大學學生:07級藥事管理樣品處理的目的第一節(jié)樣品處理1.釋放被測組分，制成穩(wěn)定試樣2.除去雜質，純化3.濃縮或衍生化4.試樣形式符合測定的要求——使其符合所選定的分析方法的要求一、樣品的粉碎

目的——取樣均勻，提取完全粉碎設備——粉碎機、研缽、勻漿機注意：粒度大小合適防止污染或損失溶劑的選擇水、酸水、堿水親水性的有機溶劑：乙醇（酒精）、甲醇（木精）、丙酮親脂性的有機溶劑：石油醚、苯、氯仿、乙醚、乙酸乙酯、二氯乙烷二、樣品的提取關鍵——提取完全2.回流提取法加快溶出速度，省時（每次提取時間0.5~2h，提取次數(shù)1~3次）適宜受熱穩(wěn)定的藥物適宜較難溶出的組分特點采用回流裝置，用單一溶劑或混合溶劑于水浴上加熱回流提取萬應膠囊（黃連等）中鹽酸小檗堿測定+HCl-70%乙醇溶液，加熱回流1h3.連續(xù)回流提取法特點樣品置于索氏提取器中，利用低沸點的有機溶劑進行連續(xù)回流提取保和丸（陳皮等）中橙皮甙測定+甲醇，加熱回流至提取液無色為止節(jié)省溶劑，提高提取效率適宜受熱穩(wěn)定的藥物費時4.超聲提取法利用超聲波的助溶作用進行提取。超聲波振蕩器（超聲波清洗器）簡便

省時提取率高保濟丸（厚樸等）中厚樸酚測定+石油醚（30-60℃），超聲處理（功率500W，頻率33kHz）2次，每次30min5.超臨界流體萃取法（SFE）以超臨界流體（常用CO2）作溶劑的樣品提取新技術。當壓力和溫度超過氣體的臨界點時所形成的單一相態(tài)超臨界流體——特殊的物質狀態(tài)密度d~液體→溶解能力強粘度~氣體→傳質快，有利于待測組分的擴散表面張力幾乎為0→浸潤性能好密度受壓力、溫度的影響大→改變對溶質的溶解能力，加入甲醇、氯仿、苯等改變極性→提取不同極性的成分優(yōu)點：速度快、萃取效率高、方法準確度高、選擇性較高1.沉淀法二、樣品的分離凈化關鍵——保留有效成分復方益母草口服液中水蘇堿的含量測定利用雷氏鹽（硫氰酸鉻銨）作沉淀劑，在酸性介質中可與大部分有機堿生成難溶于水的配合物與其它雜質分離。

2.蒸餾法適用于具揮發(fā)性的待測組分，如揮發(fā)油、小分子的生物堿、丹皮酚等3.液—液萃取法直接萃取法萃取劑的選擇親脂性有機溶劑，如苯、氯仿或乙醚弱親脂性的溶劑，如乙酸乙酯、正丁醇等多次萃取（3-4次）調(diào)整水相酸度，提取有機酸、有機堿利用鹽析作用，提高提取率BH+（水相）+In-(水相)BH+·In-（水相）BH+·In-

（有機相）適合于高度電離的有機酸、堿化合物的萃取

水相酸度的控制離子對試劑的選擇離子對萃取法分離的原理：吸附色譜、分配色譜、離子交換色譜、凝膠色譜按操作方式：柱色譜、薄層色譜、紙色譜裝柱方法：濕法裝柱、干法裝柱微柱色譜（固相萃取）柱的大?。洪L5～15cm，內(nèi)徑0.5～1cm柱填料：硅膠、氧化鋁、活性炭、聚酰胺、大孔樹脂、硅藻土、離子交換樹脂、鍵合相硅膠C8、C18等

4.色譜法（層析法）制劑中所選被測成分主要是：

化學結構已經(jīng)明確的有效成分；能大致明確的某類主要活性物質；能反映某味主要藥物特征的指標性成分；劇毒性成分或貴重藥材的成分。第二節(jié)常用含量測定方法常用方法：

高效液相色譜法；氣相色譜法；薄層色譜法；紫外可見分光光度法；化學分析法重量分析法容量分析法第三節(jié)含量測定方法驗證分析方法驗證的目的

是證明采用的方法適合于相應的檢測要求。需驗證的分析項目

鑒別試驗、雜質檢查、原料藥及制劑中有效成分含量測定及其它成分測定驗證內(nèi)容

準確度、精密度、專屬性、檢測限、定量限、線性、范圍和耐用性

準確度是指測得結果與真實值或參考值接近的程度，表示分析方法測量的正確性。

準確度（Ａccuracy）

由于“真實值”無法準確知道，因此，通常采用回收率（%）來表示。

長春中醫(yī)藥大學要求至少測定高、中、低三個濃度，每個濃度測定三次，共提供9個數(shù)據(jù)進行評價。中藥制劑含量回收率一般為95%~105%，RSD一般應為2％以內(nèi)。

用已知純度的對照品做加樣回收測定，即于已知被測成分含量的供試品中再加入已知純度的被測成分對照品?；厥章视嬎愎綖椋夯厥章?=C-AB×100%A供試品所含被測成分量B加入對照品量C實測值長春中醫(yī)藥大學系指在規(guī)定測試條件下，同一均勻供試品，經(jīng)多樣取樣測定所的結果之間接近的程度。精密度（precision）在藥物分析中，常用相對偏差(RD)、標準偏差（S）和相對標準差（RSD）表示。至少6次結果進行評價精密度是考察分析方法在不同的時間、操作人員、實驗室，所獲得結果之間的重現(xiàn)性和重復性。長春中醫(yī)藥大學1.重復性在較短時間間隔內(nèi)，在相同的操作條件下由同一分析人員測定所得結果的精密度。精密度驗證內(nèi)容包括重復性、中間精密度和重現(xiàn)性2.中間精密度在同一實驗室，由于實驗室內(nèi)部條件的改變，如不同時間由不同分析人員用不同設備測定所得結果的精密度。3.重現(xiàn)性在不同實驗室由不同分析人員測定結果的精密度。長春中醫(yī)藥大學是指在樣品介質中有其他組分（如雜質、降解產(chǎn)物、輔料等）可能存在下，采用的方法能準確測定出被測物的特性。專屬性（specificity）長春中醫(yī)藥大學檢測限（limitofdetection,LOD）試樣中被測物能被檢測出的最低濃度或量。長春中醫(yī)藥大學定量限（limitofquantitation,LOQ）是指在保證具有一定準確度和精密度的前提下，分析方法能夠測定出的樣品中藥物的最低量。長春中醫(yī)藥大學線性（linearity）在設計的范圍內(nèi)，測試結果與樣品中供試物濃度成正比關系的程度。范圍（range）范圍指能達到一定精密度、準確度和線性，測試方法適用的高低限濃度或量的區(qū)間。表示：mg/L~mg/L長春中醫(yī)藥大學耐用性（robustness）指在測定條件有小變動時，測定結果不受影響的承受程度。高效液相色譜法雙黃連口服液的含量測定（反相HPLC外標一點法）[含量測定]

黃芩照高效液相色譜法（附錄VID）測定。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水-冰醋酸（50:50:1）為流動相；檢測波長為274nm。理論板數(shù)按黃芩苷峰計算應不低于1500。對照品溶液的制備取黃芩苷對照品適量，精密稱定，加50%甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得。供試品溶液的制備精密量取本品1ml，置50