人類免疫缺陷病毒抗體檢測(cè)（酶聯(lián)免疫法）標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

人類免疫缺陷病毒抗體檢測(cè)（酶聯(lián)免疫法）標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程**生物操作方法：將試劑盒平衡至室溫，取出所需的條板，剩余的即時(shí)封存。用去離子水合蒸餾水25倍稀釋濃縮洗滌液。將所需數(shù)量的條板固定于支架按順序編號(hào)設(shè)置樣品孔、外部對(duì)照孔、陽(yáng)性對(duì)照孔和陰性對(duì)照孔每次實(shí)驗(yàn)需設(shè)外部對(duì)照陽(yáng)性對(duì)照2孔、陰性對(duì)照1孔。在樣品孔中加入100ul待測(cè)樣品，陰性、陽(yáng)性對(duì)照及外部對(duì)照每孔加入100ul，輕拍混勻。置37℃溫育60分鐘。置洗板機(jī)用洗滌液充分洗滌5遍，扣干。每孔加入100ul酶標(biāo)記物，輕拍混勻，置37℃溫育30分鐘。重復(fù)步驟⑥。在所有孔內(nèi)加顯色A、顯色B劑各50ul，輕拍混勻，置37℃避光溫育30分鐘。每孔加入50ul終止液終止顯色反應(yīng)，用酶標(biāo)儀（雙波長(zhǎng)450nm/630nm）測(cè)定各孔A值。結(jié)果判定：臨界值Cutoff＝0.1﹢陰性對(duì)照的平均A值（陰性對(duì)照的平均A值小于0.08按0.08計(jì)算，大于0.08按實(shí)際值計(jì)算），樣品的A值≥Cutoff值為艾滋病抗體陽(yáng)性；樣品的A值〈Cutoff值為艾滋病抗體陰性。同時(shí)滿足以下條件的實(shí)驗(yàn)是有效的。NC<0.080PCx>0.8，抗-艾滋病-2陽(yáng)性對(duì)照OD值>0.3雙波長(zhǎng)讀數(shù)，顯色劑空白≦0.040，單波長(zhǎng)讀數(shù)，顯色劑空白≦0.080.計(jì)算COV：COV=PCxX10%（若PCx>2.5按2.5計(jì)算）初篩陽(yáng)性者應(yīng)重新取樣進(jìn)行雙盲復(fù)試，復(fù)試陽(yáng)性者應(yīng)按照“全國(guó)艾滋病檢測(cè)管理規(guī)范”送艾滋病確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行相關(guān)確認(rèn)試驗(yàn)。

**生物操作方法：配液：將濃縮洗滌液用蒸餾水或去離子水20倍稀釋。編號(hào)：將樣品對(duì)應(yīng)微孔板按序號(hào)編號(hào)，每板應(yīng)設(shè)陰性對(duì)照3孔，陽(yáng)性對(duì)照1型，2型各1孔，空白對(duì)照1孔。（用雙波長(zhǎng)檢測(cè)，可不設(shè)空白對(duì)照孔）。加樣：分別在相應(yīng)孔中加入待測(cè)樣品或陰性，陽(yáng)性對(duì)照100ul.溫育：用封板膜封板后，置37±1℃溫育60±2分鐘。洗板：小心揭掉封板膜，用洗板機(jī)洗滌5遍，最后一次盡量擰干。加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑100ul，空白孔除外。溫育：用封板膜封板后，置37±1℃溫育30±1分鐘。洗板：操作同步驟5.顯色：每孔加入顯色劑A，B液各50ul，輕輕振蕩混勻，37±1℃避光顯色30±1分鐘。測(cè)定：每孔加終止液50ul，輕輕振蕩混勻，10分鐘內(nèi)測(cè)定結(jié)果。設(shè)定酶標(biāo)儀波長(zhǎng)于450nm處（建議用雙波長(zhǎng)450nm/600-650nm），用空白孔凋零后測(cè)定各孔A值。結(jié)果判讀：陰性對(duì)照孔A值≤0.10，陽(yáng)性對(duì)照孔A值≥0.80，否則實(shí)驗(yàn)無(wú)效。若有1孔陰性對(duì)照A值大于0.1應(yīng)舍棄；若兩孔或兩孔以上陰性對(duì)照A值大于0.1，實(shí)驗(yàn)無(wú)效。陰性判定：樣品A值＜臨界值（CUTOFF）者為艾滋病抗體陰性。陽(yáng)性判定：樣品A值≥臨界值（CUTFF）者為艾