消毒產(chǎn)品理化檢驗技術(shù)規(guī)范

2.2消毒產(chǎn)品理化檢驗技術(shù)規(guī)范2.2.1消毒產(chǎn)品原料或單方制劑的測定法2.2.1.1常用器材(1)移液管(1ml、5ml、10ml、25ml)；移液器（100μl，1000μl）。(2)滴定管(2ml、5ml、10ml、15ml、25ml、50ml，酸式與堿式)。(3)毛細(xì)滴管。(4)碘量瓶(100ml、250ml)。(5)容量瓶(50ml、100ml、250ml、1000ml)。(6)錐形瓶(100ml、250ml、500ml)。(7)稱量杯(瓶)。(8)吸球。(9)分液漏斗（250ml）。(10)研缽。(11)量筒。(12)燒杯。(13)垂熔玻璃濾器。(14)酒精比重計。(15)天平(感量0.1mg)。(16)比色皿。(17)分光光度計。(18)大氣采樣器。(19)注射器(1ml、5ml、100ml)；微量注射器(10μl、25μl、100μl)。(20)氣相色譜儀。(21)高效液相色譜儀。2.2.1.2含量測定方法2.2.1.2.1有效氯含量的測定(1)配制2mol/L硫酸、100g/L碘化鉀與5g/L淀粉等溶液。配制并標(biāo)定0.1mol/L硫代硫酸鈉滴定液(見2.2..1.3.1)。(2)精密吸取液體含氯消毒劑適量，使其相當(dāng)于有效氯約0.6g，置100ml容量瓶中，加蒸餾水至刻度，混勻。對固體含氯消毒劑，精密稱取適量使其相當(dāng)于有效氯約0.6g，置燒杯中以蒸餾水溶解，轉(zhuǎn)入100ml容量瓶中。稱量杯及燒杯需用蒸餾水洗3次，洗液全部轉(zhuǎn)入容量瓶。(3)向100ml碘量瓶中加2mol/L硫酸10ml，100g/L碘化鉀溶液10ml和混勻的消毒劑稀釋液10.0ml。此時，溶液出現(xiàn)棕色。蓋上蓋并振搖混勻后加蒸餾水?dāng)?shù)滴于碘量瓶蓋緣，置暗處5min。打開蓋，讓蓋緣蒸餾水流入瓶內(nèi)。用硫代硫酸鈉滴定液(裝于25ml滴定管中)滴定游離碘，邊滴邊搖勻。待溶液呈淡黃色時加入5g/L淀粉溶液10滴，溶液立即變藍(lán)色。繼續(xù)滴定至藍(lán)色消失，記錄用去的硫代硫酸鈉滴定液總量，并將滴定結(jié)果用空白試驗校正。重復(fù)測2次，取2次平均值進(jìn)行以下計算。（1）（2）(4)因1mol/L硫代硫酸鈉滴定液1mL相當(dāng)于0.03545g（1）（2）式中：X為有效氯含量，%或g/L；c為硫代硫酸鈉滴定液濃度，mol/L；Vst為滴定用去硫代硫酸鈉滴定液體積，ml；m為碘量瓶中所含消毒劑原藥質(zhì)量，g；V為碘量瓶中含液體消毒劑原液體積，ml。注：（1）式為固體樣品中有效氯含量；（2）式為液體樣品中有效氯含量。2.2.1.2.2有效碘含量的測定(1)配制5g/L淀粉溶液。備36%醋酸溶液。配制并標(biāo)定0.1mol/L硫代硫酸鈉滴定液(見2.2.1.3.1)。(2)精密取含碘消毒劑適量，使其相當(dāng)于有效碘約0.25g，置100ml容量瓶中并加入醋酸5滴。用0.1mol/L硫代硫酸鈉滴定液滴定，邊滴邊搖勻。待溶液呈淡黃色時加入5g/L淀粉溶液10滴(溶液立即變藍(lán)色)，繼續(xù)滴定至藍(lán)色消失，記錄用去的硫代硫酸鈉滴定液總量，并將滴定結(jié)果用空白試驗校正。重復(fù)測2次，取2次平均值進(jìn)行以下計算。(3)由于1mol/L硫代硫酸鈉滴定液1ml相當(dāng)于0.1269g有效碘，按下式計算有效碘含量：（1）（1）（2）式中：X為有效碘含量，%或g/L；c為硫代硫酸鈉滴定液濃度，mol/L；Vst為滴定用去硫代硫酸鈉滴定液體積，ml；m為碘量瓶中所含消毒劑原藥的重量，g；V為碘量瓶中含液體消毒劑原液體積，ml。注：（1）式為固體樣品中有效碘含量；（2）式為液體樣品中有效碘含量。2.2.1.2.3過氧乙酸(C2H4O3)含量的測定(1)配制以下溶液：2mol/L硫酸、100g/L碘化鉀、0.01mol/L高錳酸鉀、100g/L硫酸錳、30g/L鉬酸銨與5g/L淀粉。配制并標(biāo)定0.05mol/L硫代硫酸鈉滴定液(見2.2.1.3.1)。(2)精密吸取樣品適量，使其相當(dāng)于過氧乙酸約0.7g，于100ml容量瓶中用蒸餾水稀釋至刻度，混勻。(3)向100ml碘量瓶中加2mol/L硫酸5ml，100g/L硫酸錳3滴，精密加入混勻的過氧乙酸稀釋液5.0ml，搖勻并用0.01mol/L高錳酸鉀溶液滴定至溶液呈粉紅色。隨即加100g/L碘化鉀溶液10ml與30g/L鉬酸銨3滴，搖勻并用0.05mol/L硫代硫酸鈉滴定液(裝于25ml滴定管中)滴定至淡黃色。加入5g/L淀粉溶液3滴(溶液立即變藍(lán)色)，繼續(xù)用硫代硫酸鈉滴定至藍(lán)色消失，記錄硫代硫酸鈉滴定液的總用量。重復(fù)測2次，取2次平均值進(jìn)行以下計算。(4)由于1mol/L硫代硫酸鈉1ml相當(dāng)于0.03803g過氧乙酸，按下式計算過氧乙酸含量：式中：X為過氧乙酸含量，g/L；c為硫代硫酸鈉滴定液的濃度，mol/L；Vst為滴定中用去的硫代硫酸鈉滴定液的體積，ml；V為碘量瓶中所含過氧乙酸樣液體積，ml。2.2.1.2.4過氧化氫(H2O2)含量的測定(1)配制2mol/L硫酸與100g/L硫酸錳等溶液。另外配制并標(biāo)定0.02mol/L高錳酸鉀滴定液(見2.2.1.3.3)。(2)精密吸取樣品適量，使其相當(dāng)于過氧化氫約0.3g，于100ml容量瓶中用蒸餾水稀釋至刻度，混勻。(3)取過氧化氫稀釋液10.0ml，置100ml碘量瓶中，加入2mol/L硫酸20ml與100g/L硫酸錳3滴，搖勻。用0.02mol/L高錳酸鉀滴定液（裝于25ml滴定管中）滴定至溶液呈粉紅色，記錄高錳酸鉀滴定液用量。重復(fù)測2次，取2次平均值進(jìn)行以下計算。(4)因1mol/L高錳酸鉀滴定液1ml相當(dāng)于0.08505g過氧化氫，故可按下式計算過氧化氫含量式中：X為過氧化氫含量，g/L；c為高錳酸鉀滴定液的濃度，mol/L，Vpp為高錳酸鉀滴定液體積，ml；V為碘量瓶中所含過氧化氫樣液體積，ml。2.2.1.2.5臭氧(O3)含量的測定(1)配制3mol/L硫酸、200g/L碘化鉀與5g/L淀粉等溶液。配制并標(biāo)定0.05mol/L硫代硫酸鈉滴定液(見2.2.1.3.1)。(2)采樣:檢測臭氧水（臭氧水溶液）濃度時，精密吸取樣本100.0ml～300.0ml，（濃度較低，但不低于10mg/L時，取400.0ml）置于500ml帶塞錐形瓶中，加200g/L碘化鉀溶液20ml，混勻。再加3mol/L硫酸5ml，瓶口加塞，靜置5min。取樣涉及到水流量時，水流量應(yīng)按企業(yè)使用說明書設(shè)定。檢測臭氧氣體濃度時，將采集的樣品吸收液(蒸餾水350ml與200g/L碘化鉀溶液20ml)裝于500ml帶塞錐形瓶中，從臭氧發(fā)生器排氣管處采臭氧氣體5L以上，加3mol/L硫酸5ml，瓶口加塞，靜置5min。(3)滴定：上述兩種樣品均用0.05mol/L硫代硫酸鈉滴定液滴定至溶液呈淡黃色時加5g/L淀粉溶液1ml，繼續(xù)滴定至無色。記錄用去硫代硫酸鈉滴定液總量，并將滴定結(jié)果用空白試驗校正。重復(fù)測定2次。(4)濃度計算：取2次測試平均值計算臭氧濃度。因1mol/L硫代硫酸鈉滴定液1ml相當(dāng)于24.00mg臭氧，故臭氧含量可按下式計算式中：X為臭氧含量，mg/L；c為硫代硫酸鈉滴定液的濃度，mol/L；Vst為硫代硫酸鈉滴定液消耗體積，ml；V為臭氧水升數(shù)或其氣體采樣體積，L。2.2.1.2.6二氧化氯(ClO2)含量的測定第一法：五步碘量法(1)制備無氯二次蒸餾水（蒸餾水中加入亞硫酸鈉，將余氯還原為氯離子，并以DPD檢查不顯色，再進(jìn)行蒸餾，即得）。配制并標(biāo)定0.1mol/L硫代硫酸鈉滴定液(見2.2.1.3.1)。配制并標(biāo)定0.01mol/L硫代硫酸鈉滴定液（臨用時現(xiàn)配）。配制5g/L淀粉溶液，2.5mol/L鹽酸溶液，100g/L碘化鉀溶液（稱取10g碘化鉀溶于100ml蒸餾水中，儲于棕色瓶中，避光保存于冰箱中，若溶液變黃需重新配制），飽和磷酸氫二鈉溶液，pH=7磷酸鹽緩沖溶液（溶解25.4g無水KH2PO4和86.0gNa2HPO4·12H2O于800ml蒸餾水中，用水稀釋成1000ml），50g/L溴化鉀溶液（溶解5g溴化鉀于100ml水中，儲于棕色瓶中，每周重配一次）。(2)在500ml的碘量瓶中加200ml蒸餾水、1ml磷酸鹽緩沖液，吸取1.0ml～10.0ml二氧化氯溶液或稀釋液于碘量瓶中，再加入10ml碘化鉀溶液，混勻。用0.01mol/L硫代硫酸鈉滴定液滴定至淡黃色時，加1ml淀粉溶液，繼續(xù)滴至藍(lán)色剛好消失為止，記錄讀數(shù)為A。(3)在上述滴定出A值的溶液中再加入2.5mol/L鹽酸溶液2.5ml，并放置暗處5min。用0.01mol/L硫代硫酸鈉滴定液滴定至藍(lán)色消失，記錄讀數(shù)為B。(4)在500ml碘量瓶中加200ml蒸餾水、1ml磷酸鹽緩沖液，吸取1.0ml～10.0ml二氧化氯溶液或稀釋液加于碘量瓶中，然后通入高純氮?dú)獯抵咙S綠色消失，再加入10ml碘化鉀溶液，用硫代硫酸鈉滴定液滴定至淡黃色時，加1ml淀粉溶液，繼續(xù)滴至藍(lán)色剛好消失為止，記錄讀數(shù)為C。(5)在上述滴定出C值的溶液中再加入2.5mol/L鹽酸溶液2.5ml，并放置暗處5min。用0.01mol/L硫代硫酸鈉滴定液滴定至藍(lán)色消失，記錄讀數(shù)為D。(6)在50ml碘量瓶中加入1ml溴化鉀溶液和10ml濃鹽酸，混勻并再加1.0ml～10.0ml二氧化氯溶液，立即塞住瓶塞并混勻。置于暗處反應(yīng)20min，然后加入10ml碘化鉀溶液，劇烈震蕩5s，立即轉(zhuǎn)移至裝有25ml飽和磷酸氫二鈉溶液的500ml碘量瓶中，清洗50ml碘量瓶并將洗液轉(zhuǎn)移至500ml碘量瓶中，使溶液最后體積在200ml～300ml。用0.01mol/L硫代硫酸鈉滴定液滴定至淡黃色時，加1ml淀粉溶液，繼續(xù)滴至藍(lán)色剛好消失為止。同時用蒸餾水作空白對照。得讀數(shù)為E=樣品讀數(shù)-空白讀數(shù)。重復(fù)測2次，取2次平均值進(jìn)行以下計算。(7)計算CLO2（mg/L）=（B-D）×c×16863÷VCLO2-（mg/L）=D×c×16863÷VCLO3-（mg/L）=[E-（A+B）]×c×13908÷VCL2（mg/L）=[A-(B-D)÷4]×c×35450÷V式中：A、B、C、D、E為上述各步中硫代硫酸鈉滴定液用量，ml；V為二氧化氯溶液的樣品體積，ml；c為硫代硫酸鈉滴定液的濃度，mol/L。(8)方法檢出限為0.1mg/L，平均回收率98.0%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差＜10%。第二法：分光光度法(1)二氧化氯標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液制備：在A瓶中放入300ml水，將A瓶一端玻璃管與空氣壓縮機(jī)相接，另一玻璃管與B瓶相連。B瓶為高強(qiáng)度硼硅玻璃瓶，瓶口有三根玻璃管；第一根插至離玻璃瓶底5mm處，用以引進(jìn)空氣；第二根上接滴液漏斗，漏斗下端伸至液面下；第三根下端離開液面，上端與C瓶相接。溶解10g亞氯酸鈉于750ml水中并倒入B瓶中；在分液漏斗中裝有10%硫酸溶液20ml。C瓶裝有亞氯酸鈉飽和溶液。D瓶為2L硼硅玻璃收集瓶，瓶中裝有1500ml水，用以吸收所發(fā)生的二氧化氯，余氣由排氣管排出。整套裝置應(yīng)放在通風(fēng)櫥內(nèi)(見圖2-3)。圖2-3ClO2發(fā)生吸收裝置圖啟動空氣壓縮機(jī)，使空氣均恒通過整個裝置。每隔5min由分液漏斗加入5ml硫酸溶液，加完最后一次硫酸溶液后，空氣流量持續(xù)30min。所獲得的黃色二氧化氯標(biāo)準(zhǔn)溶液放于棕色瓶中，4℃保存，其濃度應(yīng)為250mg/L～600mg/L。(2)二氧化氯標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備：臨用前吸取一定量二氧化氯標(biāo)準(zhǔn)貯備液（按第一法準(zhǔn)確標(biāo)定），用二次蒸餾水稀釋至濃度為250mg/L。(3)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制分別取0.0ml、4.0ml、10.0ml、20.0ml、40.0ml、60.0ml、80.0ml、100.0ml二氧化氯標(biāo)準(zhǔn)溶液于100ml容量瓶中，加二次蒸餾水至刻度，配成濃度為0mg/L、10mg/L、25mg/L、50mg/L、100mg/L、150mg/L、200mg/L、250mg/L的二氧化氯溶液，以蒸餾水為空白于430nm處測定吸光度值，以二氧化氯的質(zhì)量(mg)對吸光度值進(jìn)行線性回歸，并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。(4)樣品測定直接取消毒劑溶液或其稀釋液以蒸餾水為空白于430nm測定其吸光度值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計算其中所含二氧化氯的濃度(mg/L)。(5)計算：式中：X為二氧化氯含量，mg/L；ρ為標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計算二氧化氯的濃度，mg/L；V1為消毒劑稀釋后體積，ml；V2為消毒劑稀釋前體積，ml。方法檢出限10mg/L，標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍10mg/L~250mg/L，方法平均回收率103.3%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差<10%。2.2.1.2.7二溴海因含量測定（1）原理：在酸性溶液中，二溴海因使碘化鉀氧化而析出定量的碘，然后用硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定。（2）試劑：碘化鉀（AR），硫酸溶液（1+8），硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液（0.1mol/L），淀粉指示劑5g/L。（3）測定方法：稱取樣品0.15g（精確至0.0002g），置于先加有125ml水、2g碘化鉀的250ml碘量瓶中，在電磁攪拌器上充分?jǐn)嚢?，使樣品完全溶解，加硫酸溶液?+8）20ml，用20ml蒸餾水沖洗瓶口及瓶壁，迅速加蓋水封，置暗處5min，然后用硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)液滴定，到溶液變淡黃色，加入淀粉指示劑繼續(xù)滴定至蘭色消失，記錄耗用的硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積（同時作空白）。（4）計算：式中：X為二溴海因含量，%；V1為硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的消耗體積，ml；V2為空白滴定硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液消耗體積，ml；m為稱取樣品的質(zhì)量，g；C為硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，mol/L。2.2.1.2.8甲醛(CH2O)含量的測定(1)配制50g/L氫氧化鈉溶液、稀鹽酸溶液(1份鹽酸加2份蒸餾水)與5g/L淀粉溶液。配制并標(biāo)定0.05mol/L硫代硫酸鈉滴定液(見2.2.1.3.1)與0.05mol/L碘滴定液(見2.2.1.3.2)。(2)精密吸取樣品適量，使其相當(dāng)于甲醛約0.30g，置于100ml容量瓶中，用蒸餾水稀釋至刻度，混勻。(3)向碘量瓶中加50g/L氫氧化鈉溶液10ml和混勻的甲醛稀釋液5.0ml，再自50ml滴定管緩慢加入0.05mol/L碘滴定液約40ml，邊加邊搖勻，至溶液呈鮮黃色，精確記下用去的碘滴定液毫升數(shù)。將碘量瓶蓋上蓋子并加蒸餾水于蓋緣。放置20min后再加入25ml稀鹽酸，并用0.05mol/L硫代硫酸鈉滴定液（裝入25ml滴定管中）滴定至溶液呈淡黃色。加入5g/L淀粉溶液10滴(溶液立即變藍(lán)色)，繼續(xù)用硫代硫酸鈉滴定液滴定至藍(lán)色消失。記錄硫代硫酸鈉滴定液總用量。重復(fù)測2次，取2次的平均值進(jìn)行以下計算。(4)因1mol/L碘滴定液1ml相當(dāng)于0.01501g甲醛，故可按下式計算甲醛含量:式中：X為甲醛含量，g/L；VIS為與硫代硫酸鈉反應(yīng)的碘滴定液體積，ml；cst為硫代硫酸鈉滴定液的濃度，mol/L；Vst為硫代硫酸鈉滴定液的體積，ml；cI為碘滴定液濃度，mol/L；VI為碘滴定液滴定中用去的體積，ml；VIF為與甲醛反應(yīng)消耗的碘滴定液，ml；V為碘量瓶中所含甲醛樣液體積，ml。2.2.1.2.9戊二醛（C5H8O2）含量的測定(1)配制6.5%三乙醇胺溶液、1%鹽酸溶液、10g/L氫氧化鈉溶液、0.4g/L溴酚藍(lán)乙醇溶液與鹽酸羥胺中性溶液[17.5g鹽酸羥胺加蒸餾水75ml溶解，并加異丙醇稀釋至500ml，搖勻。加0.4g/L溴酚藍(lán)乙醇溶液15ml，用6.5%三乙醇胺溶液滴定至溶液顯藍(lán)綠色]。配制并標(biāo)定0.25mol/L硫酸滴定液(見2.2.1.3.4)。(2)精密吸取樣品適量，使其相當(dāng)于戊二醛約0.2g，置250ml碘量瓶中，精確加6.5%三乙醇胺溶液20.0ml與鹽酸羥胺中性溶液25ml，搖勻。靜置反應(yīng)1h后，用0.25mol/L硫酸滴定液（裝于25ml滴定管中）滴定。待溶液顯藍(lán)綠色，記錄硫酸滴定液用量。同時，以不含戊二醛的三乙醇胺、鹽酸羥胺中性溶液重復(fù)上述操作(空白對照)。重復(fù)測2次，取2次的平均值進(jìn)行以下計算。(3)由于1mol/L硫酸滴定液1ml相當(dāng)于0.1001g戊二醛，按下式計算戊二醛含量：式中：X為戊二醛含量，g/L；c為硫酸滴定液濃度，mol/L；V1與V2分別為樣品與空白對照滴定中用去的硫酸滴定液體積，ml；V為戊二醛樣品體積，ml。對于堿性或酸性戊二醛樣品，應(yīng)先用1%鹽酸或10g/L氫氧化鈉溶液調(diào)pH至7.0，再用上法進(jìn)行含量測定。2.2.1.2.10環(huán)氧乙烷(C2H4O)含量的測定第一法：容量分析法(1)配制5g/L甲基橙溶液及鹽酸-氯化鎂溶液(在0.2mol/L鹽酸中加入MgCL2·6H2O120g，溶解并稀釋至100ml)。配制并標(biāo)定0.1mol/L氫氧化鈉滴定液(見2.2.1.3.5)。(2)取20ml鹽酸-氯化鎂溶液放入40ml稱容量瓶中，蓋上瓶蓋，稱重。于冰瓶中取出裝有環(huán)氧乙烷樣品的容器，取樣品適量，使其相當(dāng)于環(huán)氧乙烷約40mg～50mg，盡快置于稱量瓶中，重新蓋上瓶蓋，混勻，稱重。兩次重量差即為環(huán)氧乙烷樣品重量。然后，加5g/L甲基橙溶液1滴作為指示劑，用0.1mol/L氫氧化鈉滴定液(裝入25ml滴定管中)滴定。當(dāng)紅色溶液變成黃色時，記錄氫氧化鈉滴定液用量。同時以蒸餾水代替環(huán)氧乙烷重復(fù)上述操作(空白對照)。重復(fù)測2次，取2次的平均值進(jìn)行以下計算。(3)由于1mol/L氫氧化鈉滴定液1ml相當(dāng)于0.04405g環(huán)氧乙烷，故可用下式計算其含量：式中：X為環(huán)氧乙烷含量，%；C為氫氧化鈉滴定液濃度，mol/L；V1與V2分別為樣品與空白對照滴定中用去的氫氧化鈉滴定液體積，ml；m為環(huán)氧乙烷樣品的質(zhì)量，g。第二法：氣相色譜法(1)色譜參考條件與系統(tǒng)適用性試驗：色譜柱：2m×4mm不銹鋼柱；固定相：角鯊?fù)?吐溫80-101白色硅烷化擔(dān)體(10：0.5：100)；柱溫60℃；氣化室溫度：150℃；檢測室溫度150℃；載氣(N2)流速50ml/min。理論塔板數(shù)按環(huán)氧乙烷峰計算，應(yīng)不低于500，環(huán)氧乙烷峰與其他雜質(zhì)峰的分離度應(yīng)大于1.5。(2)標(biāo)準(zhǔn)曲線用5mL注射器取一定量的環(huán)氧乙烷純氣（在標(biāo)準(zhǔn)狀況下1ml環(huán)氧乙烷氣體重1.965mg），注入100ml注射器中，用清潔空氣稀釋至100ml，計算環(huán)氧乙烷濃度，然后再用100ml注射器適當(dāng)稀釋配成環(huán)氧乙烷濃度為0.0025μg/mL、0.005μg/mL、0.01μg/mL、0.05μg/mL及0.1μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)氣體。分別進(jìn)樣0.1ml，測量其峰高，以環(huán)氧乙烷峰高對其質(zhì)量(μg)進(jìn)行線性回歸，計算線性回歸方程。(3)樣品測定用大氣采樣器在現(xiàn)場采集一定量的空氣，取0.1ml空氣樣品（記錄溫度及氣壓）直接進(jìn)樣，測其峰高，根據(jù)線性回歸方程計算樣品中環(huán)氧乙烷含量。(4)按式（1）將換算成體積。式中：X為樣品中環(huán)氧乙烷的含量，mg/m3；V為進(jìn)樣體積，ml；p為測定樣品時的氣壓，KPa；t為測定樣品時的溫度，℃；m為樣品中環(huán)氧乙烷的質(zhì)量，μg；V0為換算為標(biāo)準(zhǔn)狀況下的樣品體積，ml。2.2.1.2.11乙醇(C2H6O)含量的測定第一法氣相色譜法：色譜參考條件色譜柱：2.0m×4mm玻璃柱；固定相：GDX—102（60-80目）；柱溫180℃；進(jìn)樣口溫度和檢測器溫度230℃；載氣（N2）流速45mL/min；氫氣流速45ml/min；空氣流速450ml/min。標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制配制乙醇濃度分別為0.1%、0.2%、0.3%、0.5%、1.0%及2.0%的乙醇標(biāo)準(zhǔn)系列，取1ul標(biāo)液進(jìn)入氣相色譜儀測其峰高，以乙醇峰高對其含量繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。樣品測定直接取1ul樣品溶液或稀釋液進(jìn)入氣相色譜儀測其峰高，與標(biāo)準(zhǔn)系列比較而定量。計算式中：X為樣品中乙醇濃度，%；C為樣品測定溶液中乙醇濃度，%；V1為樣品稀釋后定容的體積，ml；V2為取樣品原液的體積，ml。本方法檢出限0.1%，方法線性范圍0.0%～2.0%，加標(biāo)回收率99.5%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差＜10%。乙醇的含量測定方法也適用于甲醇、異丙醇的含量測定。第二法比重法：本方法適用于僅含乙醇和水的溶液于約20℃在量筒中加入適量乙醇樣品熔液，其量以使酒精比重計放入后能充分浮起為準(zhǔn)。將比重計下按后，緩慢松手，當(dāng)其上浮靜止且溶液無氣泡時，讀取液面處比重計刻度即為其百分含量。2.2.1.2.12醋酸氯己定(醋酸洗必泰，C22H30CL2N10·2C2H4O2)和葡萄糖酸氯己定含量的測定第一法容量分析法(1)配制甲基橙的飽和丙酮溶液(0.1g甲基橙加約50ml丙酮，振搖使其溶解為飽和溶液)。備丙酮和冰醋酸。配制并標(biāo)定0.1mol/L高氯酸滴定液(見2.2.1.3.6)。(2)精密稱取樣品適量，使其相當(dāng)于醋酸氯己定約0.15g，置于100ml錐形瓶中，加丙酮30ml與冰醋酸2ml，振搖使溶解后，加甲基橙的飽和丙酮溶液1.0ml，用高氯酸滴定液（裝入25ml滴定管中）滴定。待溶液顯橙色，記錄高氯酸滴定液用量。同時以不含醋酸氯己定的丙酮與冰醋酸溶液重復(fù)上述操作(空白對照)。重復(fù)測2次，取其平均值進(jìn)行以下計算。(3)因為1ml的1mol/L高氯酸滴定液相當(dāng)于0.3128g醋酸氯己定，故可按下式計算醋酸氯己定含量：式中：X為醋酸氯己定含量，%；c為高氯酸滴定液濃度，mol/L；V1與V2分別為樣品與空白對照滴定中所用高氯酸滴定液體積，ml；m為醋酸氯己定樣品質(zhì)量，g。(4)本法僅適用于非水溶液的樣品。若為醋酸氯己定水溶液樣品，則量取約含醋酸氯己定0.15g的溶液，置于預(yù)先稱重的潔凈蒸發(fā)皿（重量為G1）中。置水浴上加熱蒸干，稱重（G2）。以G2減去G1即得醋酸氯己定重量。然后，用30ml丙酮加2ml冰醋酸，分3次將蒸發(fā)皿上不揮發(fā)物洗入碘量瓶中。待不揮發(fā)物全部溶解后，按上述方法測定并計算其含量。亦可以水溶液毫升數(shù)代入公式中的m，計算醋酸氯己定的含量（g/L）。葡萄糖酸氯己定含量(X)的測定，可參照上述測定步驟，計算公式如下：第二法：高效液相色譜法(1)試劑①乙腈；②0.02mol/L磷酸二氫鉀溶液：稱取磷酸二氫鉀2.7g加蒸餾水溶解并定容至1000ml，用磷酸調(diào)節(jié)pH值至2.5；③醋酸氯己定標(biāo)準(zhǔn)溶液：稱取醋酸氯己定標(biāo)準(zhǔn)品0.1g，用少量蒸餾水溶解后并定容至100ml，此溶液每1L含醋酸氯己定1g。(2)色譜參考條件①色譜柱：C18柱（150mm×4.6mmI.D.，5m）；②流動相：0.02mol/L磷酸二氫鉀溶液和乙腈以65：35的體積比相混合，分析前，經(jīng)0.45m濾膜過濾及真空脫氣；③流量：1.0ml/min；④紫外檢測波長：254nm；⑤柱溫：25℃。在該色譜條件下，醋酸氯己定的tR約3.1min。(3)標(biāo)準(zhǔn)曲線用醋酸洗必泰標(biāo)準(zhǔn)溶液配制質(zhì)量濃度分別為0g/L、0.05g/L、0.2g/L、0.4g/L和0.5g/L的標(biāo)準(zhǔn)系列。在設(shè)定色譜條件下，分別取5l進(jìn)行分析。以標(biāo)準(zhǔn)系列質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)C，峰面積為縱坐標(biāo)Y，進(jìn)行線性回歸處理，得到線性方程。(4)樣品測定在設(shè)定的色譜條件下，進(jìn)10l經(jīng)0.45m濾膜過濾的樣品溶液進(jìn)行分析。根據(jù)峰面積，從線性方程計算出相應(yīng)的醋酸洗必泰濃度。若消毒劑中醋酸洗必泰的標(biāo)示濃度過高，需適當(dāng)稀釋，使其稀釋后濃度在標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍內(nèi)。對于固體或膏體樣品應(yīng)先用蒸餾水配制成水溶液。根據(jù)取樣量和稀釋倍數(shù)，換算出樣品中醋酸洗必泰的最終濃度。2.2.1.2.13苯扎溴銨(新潔爾滅，C22H40BrN)含量的測定(1)配制氫氧化鈉試液(4.3g氫氧化鈉加蒸餾水溶解成100ml溶液)、溴酚藍(lán)指示液(0.1g溴酚藍(lán)加0.05mol/L氫氧化鈉溶液3l，溶解，再加蒸餾水至200ml)。備氯仿。配制并標(biāo)定0.02mol/L四苯硼鈉滴定液(2.2.1.3.7)。(2)精密稱取樣品適量(液體樣品取適量體積)，使其相當(dāng)于苯扎溴銨約0.25g，置250ml碘量瓶中。加蒸餾水50ml與氫氧化鈉試液1ml，搖勻。再加溴酚藍(lán)指示液0.4ml與氯仿10ml。用四苯硼鈉滴定液（裝入50ml滴定管中）滴定，邊滴邊搖勻，接近終點(diǎn)時尚須強(qiáng)力振搖。待氯仿層的藍(lán)色消失，記錄四苯硼鈉滴定液用量。重復(fù)測2次，取2次的平均值進(jìn)行以下計算。同時做空白實驗。(3)因1mol/L四苯硼鈉滴定液1ml相當(dāng)于0.3984g苯扎溴銨，按下式計算其含量：（1）（2）式中：X為苯扎溴銨含量，%或g/L；c為四苯硼鈉滴定液的濃度，mol/L；Vstp為四苯硼鈉滴定液樣品與空白體積差，ml；m為碘量瓶中苯扎溴銨質(zhì)量，m；V為碘量瓶中含苯扎溴銨原液體積，ml。注：（1）式為固體樣品中苯扎溴銨含量；（2）式為液體樣品中苯扎溴銨含量。2.2.1.2.14苯扎氯銨（潔爾滅，C22H40ClN）含量的測定(1)配制0.1mol/L氫氧化鈉溶液、50g/L碘化鉀溶液。備氯仿、鹽酸。配制0.05mol/L碘酸鉀滴定液（2.2.1.3.9）。(2)精密稱取樣品適量（液體樣品取適量體積），使其相當(dāng)于苯扎氯銨約0.5g，置燒杯中，用蒸餾水35ml分3次洗入250ml分液漏斗中。加0.1mol/L氫氧化鈉溶液10ml與氯仿25ml，精密加入新配制的50g/L碘化鉀溶液10ml，振搖，靜置使分層，棄去氯仿層。水層用氯仿提取3次，每次10ml。然后，棄去氯仿層，水層移入250ml具塞錐形瓶中，用蒸餾水約15ml分3次淋洗分液漏斗，合并洗液與水液。加鹽酸40ml，放冷，用碘酸鉀滴定液（裝于25ml滴定管中）滴定至淡棕色，加氯仿5ml，繼續(xù)滴定并劇烈振搖至氯仿層無色，記錄碘酸鉀滴定液用量，并將滴定結(jié)果用空白試驗校正。重復(fù)測2次，取2次的平均值進(jìn)行以下計算。(3)因1mol/L碘酸鉀滴定液1ml相當(dāng)于0.7080g苯扎氯銨，故可按下式計算其含量：（1）（2）式中：X為苯扎氯銨，%或mg/L；c為碘酸鉀滴定液的濃度，mol/L；Vst為滴定中用去碘酸鉀滴定液的體積，ml；m為苯扎氯銨樣品質(zhì)量，g；V為苯扎氯銨樣品體積，ml。注：（1）式為固體樣品中苯扎溴銨含量；（2）式為液體樣品中苯扎溴銨含量2.2.1.2.15甲酚皂（煤酚皂，C7H8O）含量的測定（氣相色譜法）（1）色譜參考條件與系統(tǒng)適用性試驗：以含2%磷酸的己二酸乙二醇聚酯為固定相，涂布濃度為4%～10%，氫火焰檢測器，柱溫為145℃，進(jìn)樣口和檢測器溫度為200℃。（2）校正因子測定：精密稱取水楊醛約1.3g，置50ml容量瓶中，加乙醚使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為內(nèi)標(biāo)溶液。另精密稱取鄰位甲酚對照品約0.65g，至25ml容量瓶中，加乙醚使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。精密量取對照品溶液和內(nèi)標(biāo)溶液各5ml，置具塞試管中，密塞，搖勻。取1μl注入氣相色譜儀，計算鄰位甲酚的校正因子，再乘以1.042，即間，對位甲酚的校正因子。（3）測定法：精密稱取本品1.0g，置分液漏斗中，加鹽酸0.1ml，搖勻，加水3ml，搖勻，精密加入乙醚20ml，輕輕振搖，靜置分層，棄去水層，加水5ml，輕輕振搖，分層，棄去水層。精密量取乙醚提取液5ml和內(nèi)標(biāo)溶液5ml，置具塞試管中，搖勻，取1μl注入氣相色譜儀，測定，按下式計算：式中：X為甲酚皂含量，%；A為內(nèi)標(biāo)物質(zhì)峰面積；A1為鄰位甲酚峰面積；A2為間、對位甲酚峰面積；f1為鄰位甲酚校正因子；f2為間、對位甲酚校正因子；m1為內(nèi)標(biāo)物質(zhì)質(zhì)量，g；m樣品中甲酚質(zhì)量，g。2.2.1.2.16甲酸、水楊酸和山梨酸含量的測定（HPLC法）：(1)儀器與試劑：高效液相色譜儀（紫外檢測器，檢測波長280nm）；C18色譜柱，流動相：0.05mol/L磷酸二氫鉀—甲醇—三乙胺(500:500:1，用磷酸調(diào)pH至4.3～4.4)。(2)方法：1）標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備：準(zhǔn)確稱取水楊酸、苯甲酸和山梨酸各0.25g，置于100ml棕色容量瓶中，加甲醇使其溶解并定容至刻度，搖勻。精密吸取1.00ml于50ml棕色容量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，此溶液各成分濃度為0.05mg/ml。2）樣品溶液的制備：精密稱取樣品約0.5g，置于50ml棕色容量瓶中，加甲醇40ml，超聲處理3min，加甲醇至刻度，搖勻，過濾，棄去初濾液，精密吸取濾液1.00ml置另一棕色容量瓶中，用流動相定容至刻度，搖勻。3）測定方法：吸取標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣品溶液各10l，分別注入液相色譜儀，記錄峰面積，與標(biāo)準(zhǔn)溶液比較而定量。(3)計算：式中：X為樣品2.2.1.3滴定液的配制及其濃度標(biāo)定2.2.1.3.1硫代硫酸鈉(Na2S2O3)滴定液(1)配制0.1mol/L硫代硫酸鈉滴定液時，稱取Na2S2O3·5H2O26g，加無水碳酸鈉0.20g，用蒸餾水溶解成1000ml，搖勻。裝于棕色玻璃瓶中，置暗處，30d后經(jīng)過濾并標(biāo)定其濃度。(2)標(biāo)定濃度時，稱取經(jīng)120℃烘干至恒重的基準(zhǔn)重鉻酸鉀0.15g(精確至0.0001g)，置于250ml碘量瓶中，加蒸餾水50ml溶解。加2mol/L硫酸15ml和200g/L碘化鉀溶液10ml，蓋上蓋并混勻，加蒸餾水?dāng)?shù)滴于碘量瓶蓋緣，置暗處10min后再加蒸餾水90ml。在室溫20℃～25℃，用裝于50ml滴定管中的硫代硫酸鈉滴定液滴定至溶液呈淡黃色，加5g/L淀粉溶液10滴(溶液立即變藍(lán))，繼續(xù)滴定到溶液由藍(lán)色變成亮綠色。記錄硫代硫酸鈉滴定液總毫升數(shù)，并將滴定結(jié)果用空白試驗校正。若空白試驗中有硫代硫酸鈉消耗，則將滴定用去的硫代硫酸鈉滴定液毫升數(shù)減去空白試驗中其用量，得校正后的硫代硫酸鈉滴定液毫升數(shù)。因為1mol/L硫代硫酸鈉滴定液1ml相當(dāng)于0.04903g重鉻酸鉀，故可按下式計算硫代硫酸鈉滴定液濃度：式中：C為硫代硫酸鈉滴定液濃度，mol/L；m為碘量瓶中重鉻酸鉀質(zhì)量，g；V為硫代硫酸鈉滴定液（減空白）體積，ml。用0.05mol/L硫代硫酸鈉滴定液時，在臨用前于容量瓶中加蒸餾水稀釋0.1mol/L該液制成。必要時可標(biāo)定其濃度。(3)注意事項=1\*GB3①配制的碘化鉀溶液及所用碘化鉀易被空氣氧化，每次取后應(yīng)及時加蓋。一旦變成黃色即不可再用。=2\*GB3②用硫代硫酸鈉溶液滴定需加淀粉溶液時，一定待溶液至淡黃色再加。過早加淀粉，溶液中多量的游離碘易與淀粉生成過多的碘淀粉吸附產(chǎn)物，影響終點(diǎn)的準(zhǔn)確。2.2.1.3.2碘(I2)滴定液(1)配制0.1mol/L碘滴定液時，稱取13g碘片、36g碘化鉀，加100ml蒸餾水溶解后，再加濃鹽酸3滴與蒸餾水使成1000ml。混勻，裝于帶玻璃塞的棕色玻璃瓶中，保存于暗處備用。(2)標(biāo)定濃度時，向100ml碘量瓶中加已知濃度（0.05mol/L～0.09mol/L）的硫代硫酸鈉滴定液25.0ml，5g/L淀粉溶液2ml，搖勻。用裝于25ml滴定管中的碘滴定液滴定至溶液變成藍(lán)色，記錄用去的碘滴定液毫升數(shù)。因1mol/L碘滴定液相當(dāng)于同容量的1mol/L硫代硫酸鈉滴定液，故可按下式計算碘滴定液濃度：式中：C為碘滴定液濃度，mol/L；C1為硫代硫酸鈉滴定液濃度，mol/L；V1為硫代硫酸鈉滴定液體積，ml；V為碘滴定液體積，ml。用0.05mol/L碘滴定液時，在臨用前于容量瓶中加蒸餾水稀釋0.1mol/L該液制成。必要時可標(biāo)定其濃度。2.2.1.3.3高錳酸鉀(KMnO4)滴定液(1)配制0.02mol/L高錳酸鉀滴定液時，稱取3.2g高錳酸鉀，溶于1000ml蒸餾水中，煮沸15min。冷后裝于玻璃瓶中，嚴(yán)密塞上塞子。靜置2d后，用垂熔玻璃濾器濾過，將濾液混勻，裝瓶保存。(2)標(biāo)定濃度時，稱取經(jīng)105℃烘干至恒重的基準(zhǔn)草酸鈉0.2g(精確至0.0001g)，置燒杯中，加蒸餾水250ml與硫酸10ml，攪拌使溶解。自50ml滴定管中迅速加入高錳酸鉀滴定液約25ml，待褪色后，置水浴上加熱至65℃。繼續(xù)用高錳酸鉀滴定液滴定至溶液顯微紅色并持續(xù)30s不褪色時(此時液溫仍＞55℃)，記錄用去的高錳酸鉀滴定液毫升數(shù)。因1mol/L高錳酸鉀滴定液1ml相當(dāng)于0.3350g草酸鈉，用下式計算其濃度：式中：C為高錳酸鉀滴定液濃度，mol/L；m為草酸鈉質(zhì)量，g；V為高錳酸鉀滴定液體積，ml。2.2.1.3.4硫酸(H2SO4)滴定液(1)配制0.25mol/L硫酸滴定液時，取硫酸15ml，沿盛有蒸餾水的燒杯壁緩緩注入水中。待溶液溫度降至室溫，再加蒸餾水稀釋至1000ml，搖勻。(2)標(biāo)定濃度時，稱取經(jīng)270℃～300℃烘干至恒重的基準(zhǔn)無水碳酸鈉0.8g(精確至0.0001g)，置250ml碘量瓶中，加蒸餾水50ml使溶解。加甲基紅-溴甲酚綠混合指示液（1g/L甲基紅乙醇溶液20ml與2g/L溴甲酚綠乙醇溶液30ml混勻）10滴，用配制的硫酸滴定液（裝入50ml滴定管中）滴定。待溶液由綠色轉(zhuǎn)變?yōu)樽霞t色時，煮沸2min。冷卻至室溫后，繼續(xù)滴定至溶液由綠色變?yōu)榘底仙?，記錄用去的硫酸滴定液總毫升?shù)。因1mol/L硫酸滴定液1ml相當(dāng)于0.1060g無水碳酸鈉，按下式計算硫酸滴定液濃度：式中：C為硫酸滴定液濃度，mol/L；m為無水碳酸鈉質(zhì)量，g；V為硫酸滴定液體積，ml。2.2.1.3.5氫氧化鈉(NaOH)滴定液(1)稱取37g氫氧化鈉，加蒸餾水振搖，使溶解成50ml飽和溶液。冷卻后，置聚乙烯塑料瓶中，靜置數(shù)日待澄清。配制0.1mol/L氫氧化鈉滴定液時，取澄清的氫氧化鈉飽和溶液5.6ml，加蒸餾水成1000ml，搖勻。(2)標(biāo)定濃度時，稱取經(jīng)105℃烘干至恒重的基準(zhǔn)鄰苯二甲酸氫鉀0.4g(精確至0.0001g)，置250ml碘量瓶中。加蒸餾水50ml溶解，加2滴酚酞指示液(1g酚酞，加乙醇溶成100ml溶液)，用氫氧化鈉滴定液(裝于50ml堿式滴定管中)滴定。待溶液呈紅色時，記錄用去的氫氧化鈉滴定液毫升數(shù)。因1mol/L氫氧化鈉滴定液1ml相當(dāng)于0.2042g鄰苯二甲酸氫鉀，按下式計算其濃度：式中：C為氫氧化鈉滴定液濃度，mol/L；m為鄰苯二甲酸氫鉀質(zhì)量，g；V為氫氧化鈉滴定液體積，ml。2.2.1.3.6高氯酸(HCLO4)滴定液(1)配制0.1mol/L高氯酸滴定液時，取冰醋酸750ml，緩緩加入高氯酸(濃度為70%～72%者)8.5ml，振搖使混勻。在室溫下緩緩滴加醋酐(邊加邊搖)23ml后，搖勻。待冷卻后，加冰醋酸使成1000ml溶液，搖勻，放置24h后標(biāo)定其濃度。(2)標(biāo)定濃度時，稱取經(jīng)105℃烘干至恒重的基準(zhǔn)鄰苯二甲酸氫鉀0.4g(精確至0.0001g)，置100ml碘量瓶中，加冰醋酸20ml使溶解，加結(jié)晶紫指示液(0.5g結(jié)晶紫用冰醋酸溶成100ml溶液)1滴，用配制的高氯酸滴定液(裝于25ml滴定管中)滴定。待溶液由紫色變成藍(lán)色時，記錄用去的高氯酸滴定液毫升數(shù)。同時，使用不含鄰苯二甲酸氫鉀的冰醋酸重復(fù)上述操作(空白對照)。因1mol/L高氯酸滴定液1ml相當(dāng)于0.2042g鄰苯二甲酸氫鉀，用下式計算其濃度：式中：C為高氯酸滴定液濃度，mol/L；m為鄰苯二甲酸氫鉀質(zhì)量，g；V1、V2為樣本組與空白組用去高氯酸滴定液體積，ml。2.2.1.3.7四苯硼鈉[(C6H5)4BNa]滴定液(1)配制0.02mol/L四苯硼鈉滴定液時，稱取四苯硼鈉7.0g，加蒸餾水50ml，振搖使溶解。加入新配制的氫氧化鋁凝膠(取三氯化鋁1.0g，溶于25ml蒸餾水中。在不斷攪拌下緩緩滴加氫氧化鈉試液至pH為8～9，與氯化鈉16.6g，充分?jǐn)嚢杈鶆颉Ｈ缓?，加蒸餾水250ml，振搖15min。靜置10min，過濾。取濾液，并滴加氫氧化鈉試液至pH為8～9，再加蒸餾水稀釋至1000ml，搖勻。(2)標(biāo)定濃度時，精確量取本液10.0ml，加醋酸-醋酸鈉緩沖液(取無水醋酸鈉20g，加蒸餾水300ml溶解。加溴酚藍(lán)指示液1ml與冰醋酸60ml～80ml，至溶液從藍(lán)色變?yōu)榧兙G色，再加水稀釋至1000ml，pH3.7)10ml與溴酚藍(lán)指示液0.5ml。用0.01mol/L烴銨鹽滴定液(見2.2.1.3.8)滴定至藍(lán)色。同時做不含本液的空白試驗滴定。因1mol/L四苯硼鈉滴定液1ml相當(dāng)于1mol/L烴銨鹽滴定液1ml，故可按下式計算其濃度：式中：C為四苯硼鈉滴定液濃度，mol/L；V1、V2樣本組與空白組用去烴銨鹽體積，ml；C1為烴銨鹽滴定液濃度，mol/L；V為量取四苯硼鈉滴定液的體積，ml。2.2.1.3.8烴銨鹽(C22H40ClN)滴定液(1)配制0.01mol/L烴銨鹽滴定液時，取氯化二甲基芐基烴銨3.8g，加蒸餾水使溶解。再加醋酸-醋酸鈉緩沖液(pH3.7)10ml，并加蒸餾水稀釋成1000ml，搖勻。(2)標(biāo)定濃度時，稱取經(jīng)150℃烘干1h的分析純氯化鉀0.18g(精確至0.0001g)，置250ml容量瓶中，加醋酸-醋酸鈉緩沖液(pH3.7)使溶解并稀釋至刻度，搖勻。精確吸取稀釋液20.0ml，置50ml容量瓶中，精確加0.02mol/L四苯硼鈉溶液25.0ml，再加蒸餾水至刻度，搖勻后經(jīng)干燥濾紙過濾。棄去初濾液，精確取續(xù)濾液25.0ml，置250ml碘量瓶中，加溴酚藍(lán)指示液0.5ml，用配制的烴銨鹽滴定液滴定。待溶液呈藍(lán)色時，記錄用去的烴銨鹽滴定液毫升數(shù)。同時，用不含氯化鉀的醋酸-醋酸鈉緩沖液重復(fù)上述操作(空白對照)。因1mol/L烴銨鹽滴定液1ml相當(dāng)于0.07455g氯化鉀，故可用下式計算烴銨鹽滴定液濃度：式中：C為烴銨鹽滴定液濃度，mol/L；m氯化鉀質(zhì)量，g；V1、V2為樣本組與空白組用去烴銨鹽滴定液體積，ml。2.2.1.3.9碘酸鉀（KIO3）滴定液配制0.05mol/L碘酸鉀滴定液時，將基準(zhǔn)碘酸鉀在105℃干燥至恒重后，精密稱取10.700g，置1000ml容量瓶中。加適量蒸餾水使溶解，再稀釋至刻度，搖勻，即得。2.2.1.4pH值的測定(pH計法或試紙法)(1)樣品處理：原液直接測定pH值，對于需調(diào)節(jié)pH后使用的消毒劑，加入pH調(diào)節(jié)劑后，再次測定pH值。固體樣品按使用最高濃度，測定其溶液的pH值。(2)測定方法：水溶液樣品經(jīng)pH試紙確定溶液pH范圍后，用相應(yīng)的pH校正液校正pH計，再測定樣品的pH值。以有機(jī)物為溶劑的樣品采用pH試紙測定pH值。(3)儀器校正中常用的標(biāo)準(zhǔn)緩沖液：應(yīng)使用標(biāo)準(zhǔn)緩沖物質(zhì)配制，配制方法如下。=1\*GB3①鄰苯二甲酸氫鉀標(biāo)準(zhǔn)緩沖液(pH4.00，20℃)精密稱取在115℃±5℃干燥2h～3h的鄰苯二甲酸氫鉀（KHC8H4O4）10.12g，加水使溶解并稀釋至1000ml。=2\*GB3②磷酸鹽標(biāo)準(zhǔn)緩沖液（pH6.88，20℃）精密稱取在115℃±5℃干燥2h～3h的無水磷酸氫二鈉3.533g與磷酸二氫鉀3.387g，加水使溶解并稀釋至1000ml。=3\*GB3③硼砂標(biāo)準(zhǔn)緩沖液（pH9.23，20℃）精密稱取硼砂（Na2B4O7?10H2O）3.80g(注意避免風(fēng)化)，加水使溶解并稀釋至1000ml，置聚乙烯塑料瓶中，密塞，避免與空氣中二氧化碳接觸。(4)注意事項：=1\*GB3①測定前，按各品種項下的規(guī)定，選擇二種pH值約相差3個單位的標(biāo)準(zhǔn)緩沖液，使樣品液的pH值處于二者之間。=2\*GB3②取與樣品液pH值較接近的第一種標(biāo)準(zhǔn)緩沖液對儀器進(jìn)行校正（定位），使儀器示值與標(biāo)準(zhǔn)緩沖液的pH值一致。=3\*GB3③儀器定位后，再用第二種標(biāo)準(zhǔn)緩沖液核對儀器示值，誤差應(yīng)不大于±0.02pH單位。若大于此偏差，則應(yīng)小心調(diào)節(jié)斜率，使示值與第二種標(biāo)準(zhǔn)緩沖液的pH值相符。重復(fù)上述定位與斜率調(diào)節(jié)操作，至儀器示值與標(biāo)準(zhǔn)緩沖液的規(guī)定數(shù)值相差不大于0.02pH單位。否則，須檢查儀器或更換電極后，再行校正至符合要求。=4\*GB3④每次更換標(biāo)準(zhǔn)緩沖液或樣品液前，應(yīng)用蒸餾水充分洗滌電極，然后將水吸盡，也用所換的標(biāo)準(zhǔn)緩沖液或樣品液洗滌。=5\*GB3⑤在測定高pH值的樣品時，應(yīng)注意堿誤差的問題，必要時選用適當(dāng)?shù)牟Ａщ姌O測定。=6\*GB3⑥對弱緩沖液（如水）的pH值測定，先用鄰苯二甲酸氫鉀標(biāo)準(zhǔn)緩沖液校正儀器后測定樣品液，并重取樣品液再測，直至pH值的讀數(shù)在1min內(nèi)改變不超過±0.05為止；然后再用硼砂標(biāo)準(zhǔn)緩沖液校正儀器，再如上法測定；二次pH值的讀數(shù)相差應(yīng)不超過0.1，取二次讀數(shù)的平均值為其pH值。=7\*GB3⑦配制標(biāo)準(zhǔn)緩沖液與溶解樣品的水，應(yīng)是新沸過的冷蒸餾水，pH值應(yīng)為5.5～7.0。=8\*GB3⑧標(biāo)準(zhǔn)緩沖液一般可保存2個月～3個月，但發(fā)現(xiàn)有渾濁、發(fā)霉或沉淀等現(xiàn)象時，不能繼續(xù)使用。2.2.1.5重金屬(以鉛計)檢查具體檢驗方法參見GB9986。2.2.1.6砷鹽檢查具體檢驗方法參見GB9986。2.2.1.7誤差及有效數(shù)字修約(1)操作程序中所規(guī)定的固體樣品的取樣量均為參考值。測定中實際取值可略低或略高，但均需精確至稱量值的千分之一。如稱取1g與0.1g，分別精確至0.001g與0.0001g。(2)測定的誤差以相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD%)或平均相對偏差(%)表示。(3)容量分析中，標(biāo)定滴定液時，2次平行滴定間的平均相對偏差(%)不得超過0.5%；測定消毒劑原料及其制劑中有效成分含量時，其平均相對偏差(%)不得超過1%。(4)儀器分析中，若被分析組分的含量≥1%，其平均相對偏差(%)不得超過5%；若被分析組分的含量＜1%，其平均相對偏差(%)不得超過10%。(5)所有測定的最終結(jié)果均保留三位有效數(shù)字。為減少運(yùn)算過程中的舍入誤差，其他數(shù)值的修約可以暫時多保留一位，待運(yùn)算得到結(jié)果時，再修約至三位。(6)修約規(guī)則如下：擬舍棄數(shù)字的最左一位數(shù)字小于5時，則舍棄；擬舍棄數(shù)字的最左一位數(shù)字大于5，或者是5而其后跟有非0的數(shù)字時，則進(jìn)1；擬舍棄數(shù)字的最左一位數(shù)字為5，例如，以下數(shù)字修約至三位有效數(shù)字，分別為：0.3204→0.3200.3205→0.3200.320501→0.3210.3215→0.32117000→1.70×1040.0004231→4.23×10-42.2.2復(fù)方消毒產(chǎn)品有效成分含量測定的指導(dǎo)原則2.2.2.1分析方法的選擇首選儀器分析法，如色譜分析法、光學(xué)分析法以及電化學(xué)分析法等；化學(xué)分析法經(jīng)證實可靠者，也可以采用。2.2.2.2分析方法的可靠性論證(1)專屬性經(jīng)試驗驗證，除有效成分以外的其它成分均不得干擾有效成分的測定。(2)準(zhǔn)確性以加標(biāo)回收百分率表示?；厥瞻俜致室话阍谄骄礨±10.0%之間(n≥6)。(3)重復(fù)性某已知含量的模擬樣品，用該法連續(xù)測定六次，其RSD應(yīng)≤5.0%(n≥6)。(4)回歸方程的線性配制一系列已知濃度的模擬樣品五份（高、低濃度之間的倍數(shù)一般為5倍～10倍），用某法測定。以測定信號(如色譜峰面積或峰高、吸光度等)對其濃度(或質(zhì)量)進(jìn)行線性回歸，其相關(guān)系數(shù)應(yīng)滿足r≥0.999(n≥5)。(5)靈敏度即用某法測定某樣品的最低檢出濃度（S/N=3）。2.2.3消毒產(chǎn)品穩(wěn)定性測定2.2.3.1外觀檢查除測定有效成分含量或殺滅微生物效果外，還應(yīng)觀察記錄消毒劑有無顏色變化；并且對液體消毒劑應(yīng)觀察記錄有無沉淀或懸浮物產(chǎn)生，對片劑應(yīng)觀察記錄外觀性狀是否完好。性狀變化的記錄應(yīng)寫進(jìn)檢測報告。2.2.3.2化學(xué)測定法：2.2.3.2.1加速試驗法：(1)取包裝好的消毒劑，置37℃(對粉劑、片劑要求相對濕度>75%)恒溫箱內(nèi)3個月，或54℃恒溫箱內(nèi)14d。于放置前、后分別測定消毒劑殺菌有效成分含量。每次檢測樣品為三批，每批樣品重復(fù)測2次，取其平均值即可。(2)加速試驗法結(jié)果評價以有效成分下降率超過10%為不符合要求。若經(jīng)37℃存放3個月的樣本，其殺菌有效成分含量下降率≤10%，可將貯存有效期定為2年；經(jīng)54℃存放14d者，殺菌有效成分下降率≤10%，則貯存有效期可定為1年。(3)未通過本試驗的消毒劑，或欲觀察2年以上儲存有效期的消毒劑，可按下述室溫留樣法（2.2.3.2.2）測定其儲存有效期。(4)測定結(jié)果應(yīng)對其性狀變化進(jìn)行描述，若因有顏色等性狀變化而無法進(jìn)行有效成分經(jīng)驗法測定時，以室溫留樣法結(jié)果為準(zhǔn)。2.2.3.2.2室溫留樣法：取已測有效成分含量并包裝好的消毒劑，放置溫度為25℃±2℃環(huán)境(記錄溫度)，按產(chǎn)品保存期時限（企業(yè)提供），取樣測定有效成分含量，有效成分含量下降率≤10%為通過。2.2.3.3微生物測定法(1)貯存方法和取樣要求同化學(xué)測定法(2.2.3.2)。(2)在殺滅或抑制微生物試驗中，所用試驗微生物應(yīng)為使用說明書中擬殺滅或抑制微生物中抗力最強(qiáng)者。(3)對只使用原液消毒的消毒劑，直接用其原液進(jìn)行殺菌或抑菌試驗。對需稀釋后使用的消毒劑，則以其使用說明書中殺菌合格最低濃度的溶液進(jìn)行試驗。(4)該實驗作用時間、分組及其他試驗條件均應(yīng)與原殺滅試驗相同。(5)貯存后樣品增加10%的濃度，對微生物的殺滅效果仍能達(dá)到消毒的要求，可判為通過，比照2.2.3.2.1和2.2.3.2.2定出貯存有效期。2.2.4消毒劑對金屬腐蝕性的測定2.2.4..1目的測定消毒劑對各種金屬的腐蝕程度，以能注明在使用時是否需給予應(yīng)有的注意。2.2.4.2常用器材(1)金屬片圓形，直徑24.0mm，厚1.0mm，穿一直徑為2.0mm小孔，表面積總值約為9.80cm2(包括上、下、周邊表面與小孔側(cè)面)。光潔度為6。原料如下:碳鋼(規(guī)格見GB700-65)；銅(規(guī)格見GB2060-80)；鋁(規(guī)格見GB1173-74)；不銹鋼(規(guī)格見GB1220-75)。碳鋼易氧化生銹，應(yīng)保存于油中。(2)浸泡容器(玻璃制，帶蓋，容積為800ml～1000ml)。(3)砂紙(120號粒度水砂紙，GB2477)。(4)稱量杯。(5)天平(感量0.1mg)。2.2.4.3操作程序(1)在有表面活性作用的清潔劑中浸泡10min，充分去油，洗凈；亦可用氧化鎂糊劑涂抹除油后洗凈；以120號粒度水砂紙磨去金屬片兩面和周邊表面的氧化層，再用自來水沖凈。測量片的直徑、厚度、孔徑（精確至0.1mm）。用無水丙酮或無水乙醇再次脫脂。置50℃恒溫箱中干燥1h，待其溫度降至室溫后稱重(每金屬片待天平回零后稱重3次，精確至0.1mg，取其平均值作為試驗前重量。稱重時，應(yīng)戴潔凈手套，勿以手直接接觸樣片。(2)按消毒劑最高使用濃度配制試驗用消毒液，用以浸泡試驗樣片。浸泡時，每一金屬片需浸泡在200ml消毒液中。(3)金屬樣片用塑料線系以標(biāo)簽，編號和注明日期，懸掛于消毒液中。一次性浸泡72h。易揮發(fā)性或有效成分不穩(wěn)定的消毒劑，根據(jù)情況，酌情定時更換消毒液，直至浸泡72h。(4)每種金屬每次試驗放置3片樣片。浸泡時，若同種金屬每一樣片相隔1cm以上，可在同一容器內(nèi)(含600ml消毒液)進(jìn)行。(5)浸泡到規(guī)定時間后，取出金屬片，先用自來水沖洗，再用毛刷或其它軟性器具去除腐蝕產(chǎn)物。如仍有清除不掉的腐蝕產(chǎn)物，可按GB10124-88所介紹的下列方法清除:銅片:在室溫下浸泡于鹽酸溶液(500ml36%～38%鹽酸加蒸餾水至1000ml，鹽酸比重為1.19)中1min～3min。碳鋼片：置含鋅粉200g/L的氫氧化鈉溶液中，煮沸5min～30min。鋁片：浸泡于三氧化鉻磷酸溶液(三氧化鉻20g，磷酸500ml，加蒸餾水至1000ml。磷酸比重為1.69)中，升溫至80℃，持續(xù)5min～10min。如還未清除干凈，可在室溫浸于硝酸(比重1.42)溶液中1min。不銹鋼：浸泡于60℃硝酸溶液(66%～68%硝酸100ml加蒸餾水至1000ml)20min?；蚪?0℃檸檬酸銨溶液(檸檬酸銨150g加蒸餾水至1000ml)中10min～60min。(6)金屬樣片除去腐蝕產(chǎn)物并清洗后，用粗濾紙吸干水分，置于墊有濾紙的平皿中，放入50℃溫箱，干燥1h，用鑷子夾取，待其溫度降至室溫后分別在天平上稱重。天平回零后稱3次，以其平均值作為試驗后重量。稱重時，與試驗前相同，應(yīng)戴潔凈手套，勿以手直接接觸樣片(下同)。(7)樣片在用化學(xué)法去除腐蝕物時，需設(shè)相應(yīng)空白對照以校正誤差?？瞻讓φ諛悠c試驗組樣片同樣進(jìn)行表面處理、洗凈和稱重，但不經(jīng)消毒劑浸泡。事后隨同試驗組樣片用相同方法進(jìn)行化學(xué)處理、水沖洗、干燥、稱重，并計算其平均失重值。(8)試驗的全過程應(yīng)同時設(shè)不銹鋼片浸泡蒸餾水的對照，浸泡前后的重量差應(yīng)<0.3mg。否則，在找出原因后，全部試驗重做。(9)試驗結(jié)果，觀察與紀(jì)錄金屬片顏色變化，并以金屬腐蝕速率(R)平均值表達(dá)，在計算時應(yīng)減去空白對照組樣片的失重值。計算公式如下[R為腐蝕速率，mm/a（毫米/年）；m為試驗前金屬片重量，g；mt為試驗后金屬片重量，g；mk為化學(xué)處理去除腐蝕產(chǎn)物樣片失重值，g，試驗中未進(jìn)行化學(xué)清除處理者，計算時在公式中刪去mk值；S為金屬片的表面積總值，cm2；t為試驗時間，h；d為金屬材料密度，kg/m3]。2.2.4.4腐蝕性分級標(biāo)準(zhǔn)腐蝕速率R（mm/a）級別<0.0100基本無腐蝕0.0100～<0.100輕度腐蝕0.100～<1.00中度腐蝕≥1.00重度腐蝕2.2.4.5注意事項(1)每張砂紙只能磨一種金屬材料。一個容器盛的消毒液只能浸泡同一種金屬。(2)稱重關(guān)系到結(jié)果的準(zhǔn)確性，必須認(rèn)真進(jìn)行。接觸樣片的器具不得帶有油垢。(3)所用金屬片大小、厚薄應(yīng)嚴(yán)格一致，表面需磨光。(4)試驗期間，需換消毒劑溶液時，操作應(yīng)迅速，勿使樣片暴露空氣中過久。(5)金屬樣片僅可使用一次，否則影響試驗的準(zhǔn)確性。試驗在20℃～25oC條件下進(jìn)行。(7)在報告其結(jié)果時應(yīng)對試驗后金屬樣片的外觀變化等現(xiàn)象進(jìn)行描述。2.3消毒產(chǎn)品毒理學(xué)實驗技術(shù)規(guī)范2.3.1急性經(jīng)口毒性試驗2.3.1.1目的（1)檢測消毒劑對實驗動物的急性毒性作用和強(qiáng)度。（2)為亞急（慢）性毒性等試驗提供劑量選擇的依據(jù)。2.3.1.2實驗動物小鼠或大鼠任選一種，雌雄各半。小鼠體重18g～22g，大鼠體重180g～220g，根據(jù)不同的計算LD50方法，選用適當(dāng)?shù)膭游飻?shù)量。2.3.1.3試驗分組如應(yīng)用概率單位-對數(shù)圖解法計算LD50，隨機(jī)分為5個～6個劑量組。通常最高劑量組的動物死亡率應(yīng)≥90%，最低劑量組動物死亡率應(yīng)≤10%?？上纫暂^大的組距較少量動物進(jìn)行預(yù)試，找出其粗略致死劑量范圍，然后再設(shè)計正式試驗的劑量分組。2.3.1.4操作程序（1）動物的準(zhǔn)備：試驗前，一般禁食過夜，不限制飲水。（2）受試物的配制：常以水或食用植物油為溶劑配制成溶液，或采用0.5%羧甲基纖維素配制成混懸液。灌胃給予受試物的最大容量，小鼠不超過0.2ml/10g體重，大鼠不超過1.0ml/100g體重。（3）染毒方法：用灌胃方式將受試物一次給予動物。若受試物毒性很低，一次灌胃容量太大，可在24h內(nèi)分成2次～3次給予，其總劑量作為一日劑量計算。（4）染毒后觀察動物的中毒表現(xiàn)和死亡數(shù)及死亡時間，并對死亡動物和觀察期滿處死動物進(jìn)行尸體解剖，肉眼觀察，發(fā)現(xiàn)有異常的組織或臟器，尚需進(jìn)一步作組織病理學(xué)檢查。觀察時間14d。2.3.1.5LD50的計算方法根據(jù)給受試物后14d內(nèi)的各劑量組動物死亡率計算LD50(半數(shù)致死劑量)。2.3.1.5.1概率單位-對數(shù)圖解法：（1）根據(jù)各劑量組動物死亡率，從表2-9中查各組的概率單位。因死亡率為0%和100%的概率單位，與所試動物數(shù)有關(guān)，故需另在表2-10中查找。例如：對死亡率為45%的概率單位，可查表2-9。先在表的左側(cè)縱標(biāo)目上找到40，而后在表的上行橫標(biāo)目處找到5，兩者交叉點(diǎn)處的4.87，即為45%的概率單位。又如:某組用10只實驗動物，如果全部存活(死亡率為0%)，查表2-10，其概率單位為3.04。表2-9百分率-概率單位換算表%01234567890..2.672.953.123.253.363.453.523.593.66103.723.773.823.873.923.964.014.054.084.12204.164.194.234.264.294.334.364.394.424.45304.484.504.534.564.594.614.644.674.694.72404.754.774.804.824.854.874.904.924.954.97505.005.035.055.085.105.135.155.185.205.23605.252.285.315.335.365.395.415.445.475.50705.525.555.585.615.645.675.715.745.775.81805.845.885.925.955.996.046.086.136.186.23906.286.346.416.486.556.646.756.887.057.33注:橫標(biāo)目數(shù)字為死亡率的個位數(shù)，縱標(biāo)目數(shù)字為死亡率的十位數(shù)。表2-10相應(yīng)于反應(yīng)率為0％及100％的概率單位該組動物數(shù)反應(yīng)率該組動物數(shù)反應(yīng)率0%100%0%100%.........113.007.0023.856.15122.977.0333.626.38132.937.0743.476.53142.907.1053.366.64152.877.1363.276.73162.857.1573.206.80172.827.1883.136.87182.807.2093.096.91192.787.22103.046.96202.767.24（2)用方格紙繪散點(diǎn)圖，橫軸表示劑量的對數(shù)值(X)，縱軸為概率單位值(Y)，將各組數(shù)值點(diǎn)在圖上。（3)按各點(diǎn)的分布趨勢，用直尺繪出一條最適合于各點(diǎn)的直線，使線上方的點(diǎn)到線的總距離與線下方的點(diǎn)到線的總距離相近，此線應(yīng)盡量靠近概率單位為5的點(diǎn)及附近的點(diǎn)。（4）查出求概率單位5處的劑量對數(shù)，其反對數(shù)即為LD50。按下列公式計算LD50的95%可信限。S=(X2－X1)/(Y2－Y1)Sm=S/(N'/2)-1/2LD50對數(shù)值的95%可信限=logLD50±1.96Sm(上式結(jié)果，經(jīng)反對數(shù)變換后，可得LD50的95%可信限)[Sm為LD50的標(biāo)準(zhǔn)誤；S為標(biāo)準(zhǔn)差；X1、X2分別為機(jī)率單位等于4(Y1)和6(Y2)時相應(yīng)的劑量對數(shù)值；N'為Y1(=4)及Y2(=6)相應(yīng)的死亡率間所用的動物數(shù)]。2.3.1.5.2一次最大限度試驗：如20只動物(雌雄各半)一次灌胃劑量5000mg/kg體重，在14d內(nèi)又無死亡，可判定LD50大于5000mg/kg體重。2.3.1.5.3其他方法：如霍恩(Horn)法、寇氏(Karber)法等。2.3.1.6評價規(guī)定消毒劑的毒性評價：LD50大于5000mg/kg體重者屬實際無毒；LD50為501mg/kg～5000mg/kg體重者屬低毒；LD50為51mg/kg～500mg/kg體重者屬中等毒；LD50為1mg/kg～50mg/kg體重者屬高毒；LD50小于1mg/kg體重者屬劇毒。注：為評價消毒劑在實際應(yīng)用時對人體的安全性，當(dāng)產(chǎn)品原形LD50≤5000mg/kg體重時，需增做消毒劑最高應(yīng)用液濃度5倍溶液的急性經(jīng)口毒性試驗，并計算其LD50。2.3.2急性吸入毒性試驗2.3.2.1目的檢測消毒劑對實驗動物的急性吸入毒性作用和強(qiáng)度。2.3.2.2實驗動物小鼠或大鼠任選一種，雌雄各半。小鼠體重為18g～22g，大鼠體重為180g～200g。2.3.2.3操作程序染毒可采用靜式染毒法或動式染毒法。2.3.2.3.1靜式染毒法靜式染毒是將實驗動物放在一定體積的密閉容器（染毒柜）內(nèi)，加入一定量的消毒劑，并使其揮發(fā)，造成實驗需要消毒劑濃度的空氣，一次吸入性染毒2h。（1）染毒柜的容積以每只染毒小鼠每小時不少于3L空氣計，每只大鼠不少于30L計。（2）染毒濃度的計算：染毒濃度一般應(yīng)采用實際測定濃度。在染毒期間一般可測4次~5次，求其平均濃度。在無適當(dāng)測試方法時?？捎孟率接嬎闳径緷舛萢×dC=×106V式中:C—染毒濃度（mg/m3）a—加入消毒劑量(ml)d—消毒劑比重V—染毒柜容積（L）2.3.2.3.2動式染毒法動式染毒是采用機(jī)械通風(fēng)裝置，連續(xù)不斷地將含有一定濃度消毒劑的空氣均勻不斷地送入染毒柜，并排出等量的染毒氣體，維持相對穩(wěn)定的染毒濃度。一次吸入性染毒2h。（1）消毒劑氣化（霧化）和輸入的常用方法氣體消毒劑，經(jīng)流量計與空氣混合成一定濃度后，直接輸入染毒柜。易揮發(fā)液體消毒劑，通過空氣鼓泡或適當(dāng)加熱促使揮發(fā)后輸入染毒柜。若消毒劑現(xiàn)場使用采取噴霧法時，可采用噴霧器或超聲霧化器使其霧化后輸入染毒柜。（2）染毒濃度計算染毒濃度一般應(yīng)采用動物呼吸帶實際測定濃度，每半小時一次，取其平均值。若無適當(dāng)?shù)臏y試方法，也可采用以下公式計算染毒濃度：a×dC=×106V1+V2式中：C—染毒濃度（mg/m3）a—?dú)饣蜢F化消毒劑量(ml)d—消毒劑比重V1—輸入染毒柜風(fēng)量(L)V2—染毒柜容積（L）2.3.2.3.3觀察和記錄染毒過程和觀察期內(nèi)的動物癥狀和死亡情況。關(guān)于染毒濃度的設(shè)計、動物分組、觀察期限、觀察指標(biāo)和LC50（半數(shù)致死濃度）的計算等可參照急性經(jīng)口毒性試驗(2.3.1)。在預(yù)試驗的基礎(chǔ)上，如20只動物（雌雄各半）一次2h吸入染毒濃度10000mg/m3，在14d內(nèi)無死亡，可判定LC50大于10000mg/m3。2.3.2.4評價規(guī)定消毒劑的毒性評價：LC502h大于10000mg/m3者屬實際無毒；LC502h為1001mg/m3～10000mg/m3者屬低毒；LC502h為101mg/m3～1000mg/m3者屬中等毒；LC502h為10mg/m3～100mg/m3者屬高毒；LC502h小于10mg/m3者屬劇毒。2.3.3皮膚刺激試驗2.3.3.1目的檢測消毒劑對實驗動物皮膚的刺激/腐蝕作用和強(qiáng)度。2.3.3.2實驗動物每次試驗至少需3只皮膚完好的健康家兔或豚鼠。2.3.3.3操作程序2.3.3.3.1一次完整皮膚刺激試驗(1)在試驗前24h，用脫毛劑將家兔或豚鼠背部脊柱兩側(cè)的毛去掉，不得損傷皮膚。去毛范圍，左、右各約3cm×3cm。(2)次日將受試物(濃度一般為皮膚消毒應(yīng)用液的5倍或原液0.5ml（g）直接滴于面積為2.5cm×2.5cm的一側(cè)去毛完整皮膚上，或滴于同樣大小的2層~4層紗布上并敷貼在一側(cè)去毛皮膚表面，然后用一層無刺激塑料膜或油紙覆蓋，再用無刺激膠布固定。另一側(cè)去毛皮膚作為空白對照(或溶劑對照)。敷貼時間為4h。試驗結(jié)束后，用溫水或無刺激性溶劑除去殘留受試物。(3)2.3.3.3.2一次破損皮膚刺激試驗（1）涂受試物前，在2.5cm×2.5cm的去毛皮膚上，用75％酒精清潔、消毒暴露皮膚，待酒精揮發(fā)后，用滅菌刀片或注射針頭在皮區(qū)內(nèi)劃一個“井”形的破損傷口，并在該破損皮區(qū)內(nèi)染毒。注意皮膚破損僅達(dá)表皮，不要傷及真皮。（2）手術(shù)前的皮膚準(zhǔn)備，手術(shù)后受試物涂抹和局部皮膚反應(yīng)的觀察，評分方法同2.3.3.3.1。注意鑒別感染和原發(fā)性刺激反應(yīng)的區(qū)別，若有感染可疑，應(yīng)進(jìn)行重復(fù)測試。2.3.3.3.3多次完整皮膚刺激試驗（1）試驗前動物皮膚準(zhǔn)備同2.3.3.3.1（1）。（2）次日將受試物[濃度同2.3.3.3.1(2)]0.5ml（g）涂在一側(cè)皮膚上，另一側(cè)涂溶劑作為對照，在涂抹后4h，用水或無刺激的適宜溶劑清洗，除去殘留物。每天涂抹一次，連續(xù)涂抹14d。在每次涂抹后24h觀察結(jié)果，按表2-11評分。為了便于受試物的涂抹和結(jié)果觀察，必要時應(yīng)剪毛。對照區(qū)的處理方法同試驗區(qū)。2.3.3.4評價規(guī)定2.3.3.4.1一次皮膚刺激試驗在各個觀察時間點(diǎn)，按照表2-11對動物的皮膚紅斑與水腫形成情況進(jìn)行評分，并分別按時間點(diǎn)將3只動物的評分相加，除以動物數(shù)，獲得不同時間點(diǎn)的皮膚刺激反應(yīng)積分均值(刺激指數(shù))。取其中最高皮膚刺激指數(shù)，按表2-12評定該受試物對動物皮膚刺激強(qiáng)度的級別。2.3.3.4.2多次皮膚刺激試驗按下列公式計算每天每只動物平均積分（刺激指數(shù)），并以表2-12判定皮膚刺激強(qiáng)度。∑（每只動物14d的紅斑和水腫總積分）每天每只動物平均積分=受試動物數(shù)×14表2-11皮膚刺激反應(yīng)的評分標(biāo)準(zhǔn)皮膚刺激反應(yīng)皮膚刺激反應(yīng)評分紅斑形成：無 0勉強(qiáng)可見 1明顯 2嚴(yán)重 3紫紅色紅斑，并有焦痂 4水腫形成: