實(shí)驗(yàn)七微生物生理生化反應(yīng)觀察省公開課一等獎(jiǎng)全國示范課微課金獎(jiǎng)

試驗(yàn)七

微生物生理生化反應(yīng)觀察

p.220-225)第1頁一.試驗(yàn)?zāi)繕?biāo)初步了解微生物生化判定與分類原理與方法；掌握淀粉水解試驗(yàn)、明膠水解試驗(yàn)、尿素水解試驗(yàn)（脲酶試驗(yàn)）、糖發(fā)酵試驗(yàn)原理和方法。第2頁二.原理：1.一些細(xì)菌能夠分泌一個(gè)胞外酶,即淀粉酶。它可將淀粉水解為小分子糊精、麥芽糖和葡萄糖，再被細(xì)菌吸收利用。淀粉遇碘液會(huì)產(chǎn)生藍(lán)色，所以能產(chǎn)淀粉酶微生物在含淀粉培養(yǎng)基上培養(yǎng)后，因?yàn)榈矸郾患?xì)菌淀粉酶水解，遇碘不在變藍(lán)色，培養(yǎng)基上菌體周圍會(huì)出現(xiàn)無色透明圈。據(jù)此可分辨微生物能否產(chǎn)生淀粉酶。第3頁2.明膠是由膠原蛋白水解產(chǎn)生蛋白質(zhì)，在25℃以下可維持凝膠狀態(tài)，以固體形式存在，而在25℃以上明膠會(huì)液化。假如接種微生物能夠產(chǎn)生明膠酶，它可將明膠水解成小分子物質(zhì)，破壞其交替狀態(tài)，使明膠生化管在25℃以下發(fā)生液化，據(jù)此性質(zhì)能夠判別產(chǎn)明膠酶微生物。第4頁3.許多細(xì)菌含有脲酶，尿素酶能將培養(yǎng)基中尿素分解成氨、二氧化碳和水，產(chǎn)生氨累積在培養(yǎng)基中，使加有酚紅酸堿指示劑營養(yǎng)瓊脂由中性變成堿性，從而產(chǎn)生顏色改變（由黃色變成深粉紅色）。經(jīng)過生化管顏色改變就能夠判斷接種培養(yǎng)基是否產(chǎn)生尿素酶。(注:在空氣中放置一段時(shí)間后上部變紅,原因空氣氧化)第5頁4、有些微生物能夠分解葡萄糖或乳糖產(chǎn)生有機(jī)酸（乳酸、醋酸、丙酸）使生化管pH值降低，從而使含酸堿指示劑溴甲酚紫（pH5黃－pH7紫）營養(yǎng)瓊脂由紫色變成黃色，經(jīng)過生化管顏色改變能夠判斷是否能產(chǎn)生對(duì)應(yīng)糖水解酶類。第6頁三、試驗(yàn)步驟1.淀粉水解試驗(yàn)：每2人接種二支淀粉生化管（分別接種大腸桿菌和枯草芽孢桿菌），37℃培養(yǎng)2d，加盧革氏碘液少許觀察和統(tǒng)計(jì)每管顏色改變，得出結(jié)論?？莶菅挎邨U菌是陽性對(duì)照菌。第7頁2.明膠水解試驗(yàn)：每2人接種二支明膠生化管（分別接種大腸桿菌和金黃色葡萄球菌），37℃培養(yǎng)2天，從37℃取出即觀察和統(tǒng)計(jì)各管明膠水解情況，得出結(jié)論。大腸桿菌是陽性對(duì)照菌。第8頁3.尿素水解試驗(yàn)：每2人接種兩支尿素生化管（分別接種變形桿菌和金黃色葡萄球菌），37℃培養(yǎng)2天，觀察和統(tǒng)計(jì)每管培養(yǎng)前后顏色改變，得出結(jié)論。變形桿菌是陽性對(duì)照菌。

第9頁4、葡萄糖發(fā)酵試驗(yàn)：每2人接種二支葡萄糖生化管（一支接種大腸桿菌、一支接種變形桿菌），37℃培養(yǎng)2天，觀察和統(tǒng)計(jì)每管培養(yǎng)前后顏色改變，得出結(jié)論。大腸桿菌和變形桿菌均是陽性。第10頁5、乳糖發(fā)酵試驗(yàn)：每2人接種二支乳糖生化管（一支接種大腸桿菌、一支接種變形桿菌），37℃培養(yǎng)2天，觀察和統(tǒng)計(jì)每管培養(yǎng)前后顏色改變，得出結(jié)論。大腸桿菌能分解乳糖和葡萄糖產(chǎn)酸并產(chǎn)氣；普通變形桿菌分解葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，但不能分解乳糖。第11頁四、試驗(yàn)注意事項(xiàng)淀粉水解試驗(yàn)，在觀察時(shí)需要加盧革氏碘液方便觀察淀粉水解情況；接種均在無