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革蘭染色黃荔豐省級(jí)精品在線開放課程《臨床檢驗(yàn)技術(shù)》細(xì)菌受色原理等電點(diǎn)學(xué)說：革蘭陽性菌的等電點(diǎn)（PI2-3)比革蘭陰性菌等電點(diǎn)(PI4-5)低，在同一PH條件下，陽性菌比陰性菌所帶負(fù)電荷要多，與帶正電荷的堿性染料結(jié)合力牢固，不易脫色細(xì)菌染色操作【器材及試劑的準(zhǔn)備】1.細(xì)菌標(biāo)本2.接種環(huán)、酒精燈3.載玻片4.濾紙5.革蘭染液：結(jié)晶紫溶液、革蘭碘液、95%乙醇（脫色液）、稀釋石炭酸復(fù)紅細(xì)菌染色操作1.準(zhǔn)備工作

（1）細(xì)菌涂片制作：取清潔無油載玻片一張，在其中央滴加一滴生理鹽水，將接種環(huán)用火焰燒紅滅菌，待冷卻后自固體培養(yǎng)基或瓊脂斜面上菌落挑取細(xì)菌少許混于生理鹽水中，輕輕涂抹制成直徑約1cm大小的薄層，然后將接種環(huán)用火焰燒紅滅菌。涂片置室溫自然干燥，干燥后，標(biāo)本面向上，用鐘擺樣速度來回通過火焰三次，使細(xì)菌殺死并固定于玻片上。1.準(zhǔn)備工作2.染色過程（1）用蠟筆在細(xì)菌涂片兩端畫線，以防染液溢出，然后將細(xì)菌涂片平放在染色架上。（2）初染：先加結(jié)晶紫染液數(shù)滴，以覆蓋整個(gè)菌膜為宜，染色1min。（3）用細(xì)流水自涂面上端向下輕輕沖去染液（切勿直接沖在標(biāo)本上面）（4）媒染：滴加革蘭碘液，覆蓋整個(gè)菌膜，作用1-3分鐘。2.染色過程（5）用細(xì)流水自涂面上端向下輕輕沖去染液（切勿直接沖在標(biāo)本上面）（6）脫色：滴加95%乙醇在菌膜上，并頻頻搖動(dòng)玻片，至無紫色脫出為止（約20秒）。（7）用細(xì)流水自涂面上端向下輕輕沖去染液（切勿直接沖在標(biāo)本上面）2.染色過程（8）復(fù)染：加稀釋石炭酸復(fù)紅染液，覆蓋整個(gè)菌膜，半分鐘。（9）用細(xì)流水自涂面上端向下輕輕沖去染液（切勿直接沖在標(biāo)本上面）（10）用濾紙吸干細(xì)菌涂片上水分2.染色過程思考題為什么有些細(xì)菌革蘭染色會(huì)染成藍(lán)色，有些會(huì)染成紅色？革蘭陽性菌和

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