呼吸道病毒及檢驗講解

呼吸道病毒及檢驗定義及緒論呼吸道病毒是指一大群能侵犯呼吸道的病毒。常見的呼吸道病毒：

1正粘病毒科：流感病毒

2副粘病毒科：副流感病毒、呼吸道合胞病毒、麻疹病毒、腮腺炎病毒

3其他病毒科：腺病毒、鼻病毒、風(fēng)疹病毒、冠狀病毒與呼腸病毒等。第一節(jié)正粘病毒

正粘病毒科包括：1甲型流感病毒屬2乙型流感病毒屬3丙型流感病毒屬三型流感病毒均可引起人和動物的流行性感冒(簡稱流感)。甲型流感病毒易發(fā)生變異形成新的亞型，在引起人類流感流行上最為重要，常引起世界性大流行；乙型流感病毒也存在變異，有時可引起流感流行;

丙型流感病毒抗原性穩(wěn)宗，?？梢鹁植苛餍?，多累及嬰幼兒和青年。

一、生物學(xué)性狀(一)形態(tài)與結(jié)構(gòu)1

形態(tài)球形、橢圓形或絲狀，由雞胚或細(xì)胞培養(yǎng)傳代的病毒多為球形；從人或動物體中新分離的病毒絲狀體多于球形。2結(jié)構(gòu)流感病毒為有包膜的單股負(fù)鏈RNA病毒。

由內(nèi)向外依次為:核衣殼、包膜及刺突。流感病毒電鏡圖球形絲形結(jié)構(gòu)：核心RNA核蛋白RNA多聚酶內(nèi)層中層Ｍ蛋白外層包膜刺突ＮＡＨＡ甲型流感病毒顆粒（1）核衣殼病毒核酸為分節(jié)段的單股負(fù)鏈RNA，1甲型與乙型流感病毒的基因組由8個RNA片段組成。2丙型流感病毒的基因則由7個RNA片段組成。3每個片段編碼一至兩個多肽。4每個RNA片段外面有核蛋白和3個與核酸復(fù)制、轉(zhuǎn)錄有關(guān)的依賴RNA的RNA多聚酶蛋白PA、PBI和PB2。5核衣殼呈螺旋對稱。6NP為可溶性蛋白，抗原性穩(wěn)定，具有型特異性。（2）包膜內(nèi)層：病毒基因編碼的基質(zhì)蛋白M1。外層：來自宿主細(xì)胞的雙層類脂膜。甲型和乙型流感病毒包膜上鑲嵌有離子通道蛋白(M2)和兩種刺突：

1血凝素（HA）

2神經(jīng)氨酸酶（NA）HA和NA抗原性極易變異，是劃分亞型的依據(jù)。①HA：為包膜上的柱狀突起糖蛋白，與病毒吸附和穿人宿主細(xì)胞有關(guān)。

i)HA能與人、雞、琢鼠等多種紅細(xì)胞表面的N-乙酰神經(jīng)氨酸受體結(jié)合引起紅細(xì)胞凝集(簡稱血凝)。

ii)HA還具有誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生保護(hù)性的血凝抑制抗體，該抗體能抑制血凝和中和病毒的致病作用。②NA:為包膜上蘑菇狀突起糖蛋白

i)能水解細(xì)胞膜上各種多糖受體末端的N-乙酰神經(jīng)氨酸，使病毒從細(xì)胞上解離。ii)NA刺激機(jī)體產(chǎn)生的抗體能抑制子代病毒的釋放及其在組織間擴(kuò)散，但不能中和病毒的感染性。(二)分型與變異1分型依據(jù)：

RNANPM蛋白抗原性將流感病毒分為甲(A)、乙(B)、丙(C)三型。甲型又根據(jù)HA和NA抗原的不同，分為不同的亞型。乙型和丙型流感病毒至今末發(fā)現(xiàn)亞型。2變異

流感病毒的HA、NA抗原性可持續(xù)不斷地發(fā)生變異，兩者的變異可同時出現(xiàn)，也可單獨出現(xiàn)，且HA變異得更快。甲型的兩種變異形式:

抗原性漂移：變異幅度小，系量變，出現(xiàn)HA和NA變異率小于1%，導(dǎo)致甲型流感的局部中小流行?？乖赞D(zhuǎn)變：變異幅度大，為超越亞型的變異，HA的變異率為20%~50%，屬質(zhì)變，導(dǎo)致新亞型的出現(xiàn)。

人群對新的亞型缺乏免疫力，故可引起大流行，甚至世界大流行。甲型流感病毒在歷史上曾引起多次世界性大流行。(三)培養(yǎng)特性(四)抵抗力流感病毒抵抗力較弱。不耐干燥、不耐熱，56℃30min被滅活，0~4℃能存活數(shù)周，室溫下很快喪失傳染性，一70℃以下或凍干可長期保存。對日光、紫外線、乙醚、甲醛等敏感。二、致病性流感病毒經(jīng)飛沫傳播侵入易感者呼吸道，在呼吸道上皮細(xì)胞內(nèi)增殖并引起細(xì)胞變性、脫落、粘膜充血水腫。感染后經(jīng)1~4d潛伏期，患者出現(xiàn)鼻塞、咳嗽、流涕等癥狀。發(fā)病初期2~3d鼻咽分泌物中病毒含量達(dá)104~107pfu/ml，此時傳染性最強(qiáng)，病毒最易分離成功。流感病毒很少入血，主要是在代謝過程中產(chǎn)生的毒素樣物質(zhì)進(jìn)入血流，引起發(fā)熱、頭痛和全身酸痛等癥狀。少數(shù)患者病毒可蔓延至細(xì)支氣管和肺泡，引起間質(zhì)性肺炎并可引起死亡。兒童流感除高熱外，還可發(fā)生抽搐、譫妄，嘔吐、腹痛、腹瀉等癥狀。三、免疫性體液免疫：抗HA抗體為中和抗體，中和抗體在預(yù)防感染和阻止疾病發(fā)生中有重要作用。血清抗HA中和抗體可持續(xù)幾十年，對同型病毒有牢固免疫力，對型內(nèi)變異株的交叉免疫可持續(xù)4~7年，但亞型間無交叉免疫。細(xì)胞免疫：CD4+和CD8+T細(xì)胞可產(chǎn)生廣泛的亞型間交叉免疫，決定病毒的清除和疾病的恢復(fù)。四、微生物學(xué)檢驗1標(biāo)本采集和處理

盡早采集

菌采集

盡快送檢。如48小時內(nèi)未能進(jìn)行接種，標(biāo)本應(yīng)置低溫一70℃保存。雞胚或培養(yǎng)細(xì)胞核酸雜交

PCR檢測病毒RNA。(二)血清學(xué)診斷血凝抑制試驗補(bǔ)體結(jié)合試驗中和試驗酶免疫試驗固相放免取患者急性期(發(fā)病后5天內(nèi))和恢復(fù)期(發(fā)病2~4周)雙份血清檢測特異性抗體效價，如恢復(fù)期抗體效價比急性期升高4倍或4倍以上即有診斷意義。(三)快速診斷（1）免疫法直接檢測抗原（2）分子雜交檢測病毒RNA（3）逆轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR)（4）免疫電鏡、病毒培養(yǎng)結(jié)合ELISA第二節(jié)副粘病毒對人類有致病作用的副粘病毒主要有：麻疹病毒腮腺炎病毒副流感病毒呼吸道合胞病毒

一、麻疹病毒麻疹病毒是麻疹的病原體。麻疹是兒童時期最常見的急性呼吸道傳染病，?？梢虿l(fā)癥的發(fā)生導(dǎo)致死亡。研究發(fā)現(xiàn)麻疹病毒感染與亞急性硬化性全腦炎（SSPE）相關(guān)。(一)生物學(xué)性狀1形態(tài)與結(jié)構(gòu)

球形有包膜單股負(fù)鏈RNA病毒。核衣殼為螺旋對稱，外有脂蛋白包膜，包膜上有含糖蛋白血凝素和融合因子，無NA。2結(jié)構(gòu)蛋白和抗原組成

6個主要結(jié)構(gòu)蛋白:核蛋白、磷酸蛋白、融合蛋白、血凝素蛋白、依賴RNA的RNA聚合酶以及基質(zhì)蛋白。麻疹病毒抗原穩(wěn)定，只有一個血清型。

3培養(yǎng)特性

能在人胚腎和人羊膜等細(xì)胞中增殖，并使細(xì)胞融合形成多核巨細(xì)胞，細(xì)胞核和細(xì)胞漿內(nèi)出現(xiàn)嗜酸性包涵體。

4抵抗力

麻疹病毒抵抗力弱。易被日光、紫外線、干燥、熱等滅活，對一般消毒劑敏感。(二)致病性與免疫性致病性：急性患者為傳染源，通過飛沫或鼻咽分泌物等污染用具感染易感人群，冬春季發(fā)病率最高。潛伏期約10-14d，病毒先在呼吸道上皮細(xì)胞內(nèi)增殖，進(jìn)入血流出現(xiàn)第一次病毒血癥。病毒隨血流侵入淋巴組織和單核吞噬細(xì)胞系統(tǒng)并在其中增殖，再次入血形成第二次病毒血癥，此時病人傳染性最強(qiáng)，臨床表現(xiàn)為發(fā)熱、流涕、流淚、眼結(jié)膜充血、咳嗽等癥狀，約95%的患者在發(fā)病2d后口腔粘膜出現(xiàn)柯氏斑，隨后全身皮膚相繼出現(xiàn)紅色斑丘疹。麻疹一般可治愈，但免疫力低下或營養(yǎng)不良的患者，可因合并肺炎或腦膜炎等而使死亡率高達(dá)20%~25%以上。少數(shù)患者在患麻疹2－17年后出現(xiàn)SSPE。免疫性：自然感染或接種疫苗后可獲持久免疫力。（三）微生物學(xué)檢查臨床診斷一般無須進(jìn)行實驗室檢查。二、腮腺炎病毒分類：腮腺炎病毒是引起流行性腮腺炎的病原體，分類上屬腮腺炎病毒屬，僅有一個血清型。結(jié)構(gòu)：腮腺炎病毒為球形有包膜的單股負(fù)鏈RNA病毒，包膜上有血凝素-神經(jīng)氨酸酶（HN）和融合蛋白(F)，具有HA、NA和融合細(xì)胞活性。致病性：

1

人是腮腺炎病毒唯一的宿主，經(jīng)呼吸道傳播引起流行性腮腺炎，但大約有1/3腮腺炎病毒感染者無明顯的臨床癥狀。

2

感染可累及睪丸、卵巢、中樞神經(jīng)系統(tǒng)等多種器官和腺體組織并出現(xiàn)不同的臨床癥狀。病后可獲終生免疫。抵抗力：腮腺炎病毒對乙醚、氯仿、去氧膽酸鈉等脂溶劑敏感，紫外線和加熱均可滅活。不同毒株對熱的抵抗力有所差異，病毒保存液中加入蛋白能增加病毒的穩(wěn)定性。免疫力：典型病例無需實驗室檢查即可作出診斷。三、副流感病毒

副流感病毒是引起成人和兒童上呼吸道疾病的一類較重要的病原體，分類上屬副粘病毒屬。引起上呼吸道疾病的人類副流感病毒有1－4四個型。(一)生物學(xué)性狀形態(tài)結(jié)構(gòu)

類似流感病毒，為有包膜單股負(fù)鏈RNA病毒。球形顆粒；亦可見到絲狀的病毒顆粒，長達(dá)800~1000nm。核衣殼呈雙股螺旋對稱，核酸不分片段，亦有依賴RNA的轉(zhuǎn)錄酶。病毒包膜由雙層脂蛋白組成，包膜上有二種刺突HN和F(fusion)因子。

HN具有HA和NA的作用

F因子具有使病毒進(jìn)入宿主細(xì)胞和在宿主細(xì)胞間傳播的作用。抵抗力：副流感病毒抵抗力弱，不耐酸，對熱敏感，在4℃能短暫存活，可在-70℃長期保存。培養(yǎng)特性：副流感病毒用原代人胚腎和猴腎細(xì)胞培養(yǎng)最為敏感，各型在此細(xì)胞上增殖并形成多核巨細(xì)胞或包涵體。(二)致病性與免疫性副流感病毒（PIV）經(jīng)患者呼吸道分泌物通過氣溶膠或人與人密切接觸方式傳播，引起兒童和成人的上呼吸道感染。PIV1和PIV2是小兒咽喉、氣管、支氣管炎的主要致病因子。PIV3能引起嬰兒氣管炎和肺炎。PIV4引起輕微上呼吸道疾病。PIV1和PIV3亦是醫(yī)院內(nèi)感染的重要病原體。大齡兒童和成人PIV感染常無癥狀或引起與普通感冒類似癥狀的輕微疾病。PIV的再感染常見，且臨床癥狀比原發(fā)感染的要輕。(三)微生物學(xué)檢驗1.分離與鑒定病毒鑒定常用紅細(xì)胞吸附抑制試驗，血凝抑制試驗、補(bǔ)體結(jié)合試驗和中和試驗進(jìn)行鑒定。2·血清學(xué)診斷血清學(xué)試驗常有交叉反應(yīng)。3·分子生物學(xué)方法可用RT-PCR等檢測病毒RNA。四、呼吸道合胞病毒人呼吸道合胞病毒(RSV)是世界范圍內(nèi)引起嬰幼兒病毒性嚴(yán)重呼吸道感染主要的和常見的病原之一。分類上屬肺炎病毒屬。因其在細(xì)胞培養(yǎng)中能形成特殊的細(xì)胞融合病變而得名。(一)生物學(xué)特性結(jié)構(gòu)：核酸：RSV為有包膜單股負(fù)鏈RNA病毒。病毒呈球形或絲狀，其核酸不分片段，核衣殼螺旋對稱，含RNNA依賴的RNA多聚酶。包膜上有兩種刺突:

F蛋白，能引起病毒包膜之間的融合。吸附G蛋白，對宿主細(xì)胞有吸附作用。

F和G蛋白均具有免疫原性。培養(yǎng)：RSV能在人上皮細(xì)胞傳代細(xì)胞中增殖，出現(xiàn)CPE的特點是形成多核巨細(xì)胞，胞漿內(nèi)形成嗜酸性包涵體。(二)致病性與免疫性RSV通過呼吸道、手和污染物品傳播，每年冬季均有流行。引起嬰幼兒嚴(yán)重呼吸道感染，在6周至9個月嬰幼兒中易發(fā)展成嚴(yán)重的下呼吸道感染，較大兒童和成人則是上呼吸道感染，它也是醫(yī)院感染的重要病原體。RSV感染后，免疫力不強(qiáng)，再感染常見，但再感染的臨床癥狀越來越輕。(三)微生物學(xué)檢驗1分離與鑒定

無菌采集，盡快送檢或冷藏送檢，用已知RSV抗體進(jìn)行交叉中和試驗或免疫熒光等方法進(jìn)行鑒定。2·血清學(xué)診斷

ELISA