1.2.2 微生物的選擇培養(yǎng)和計數(shù) 課件高二下學期生物人教版選擇性必修3

酵母菌的純培養(yǎng)酵母菌的純培養(yǎng)2.接種和分離酵母菌1.制備培養(yǎng)基3.培養(yǎng)酵母菌①配制培養(yǎng)基（馬鈴薯、葡萄糖、瓊脂、水）②滅菌③倒平板（在酒精燈火焰附近操作）培養(yǎng)基：濕熱滅菌（高壓蒸汽滅菌鍋）培養(yǎng)皿：干熱滅菌（干熱滅菌箱）用接種環(huán)在固體培養(yǎng)基上用平板劃線法接種平板倒置，放入28℃左右的恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)第1章發(fā)酵工程第2節(jié)微生物的培養(yǎng)技術及應用第2課時微生物的選擇培養(yǎng)和計數(shù)1通過實例，理解各類微生物都能適應其生活環(huán)境。2根據(jù)微生物的代謝類型，配制選擇培養(yǎng)基，總結(jié)分離微生物的過程和測定微生物數(shù)量的常用方法。3通過對土壤中分解尿素的細菌進行分離和計數(shù)，理解并掌握微生物計數(shù)的方法。思考：那么，如何從眾多的微生物中篩選出單一菌種？自然界中微生物數(shù)量繁多，種類龐雜，要想從中分離出需要的特定微生物并不容易，尤其當要分離的微生物在混合菌群中不是優(yōu)勢種群時，僅通過一般的平板劃線法或稀釋涂布平板法很難實現(xiàn)。稀釋涂布平板法呈現(xiàn)的雜菌群選擇培養(yǎng)基應運而生。選擇培養(yǎng)基微生物的選擇培養(yǎng)微生物的數(shù)量測定土壤中分解尿素的細菌的分離與計數(shù)尋找耐高溫的DNA聚合酶聚合酶鏈式反應（PCR）是一種在體外DNA復制的技術，此項技術要求使用耐高溫的DNA聚合酶。（一）科學實例：2.篩選原因：1.篩選思路：耐高溫的酶耐高溫的生物體高溫環(huán)境（熱泉、火山口）尋找尋找美國黃石公園1966年，布魯克在美國黃石國家公園的一個熱泉中發(fā)現(xiàn)了耐熱的水生棲熱菌，并分離到耐高溫的DNA聚合酶。

熱泉的高溫淘汰了絕大多數(shù)微生物，而水生棲熱菌能生存。例：在被石油污染的土壤中可以篩選

微生物

在冰川凍土層可以篩選

微生物

以纖維素為唯一碳源培養(yǎng)基分解石油耐寒——分離______________纖維素分解菌生存環(huán)境3.啟示:人為提供____________________的條件（包括________、________和________等），同時_________________________________有利于目的菌生長營養(yǎng)溫度PH抑制或阻止其他微生物的生長4.實驗室篩選微生物的原理：尋找目的菌種時要根據(jù)它對

的要求，到相應的環(huán)境中去尋找。冰川凍土層被石油污染的土壤（三）選擇培養(yǎng)基的概念：

在微生物學中，將允許特定種類的微生物生長，同時抑制或阻止其他種類微生物生長的培養(yǎng)基稱為選擇培養(yǎng)基。

培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分是否完全分類：（1）基本培養(yǎng)基：只能保證某些微生物的野生型菌株正常生長，是

含有營養(yǎng)要求最低成分的合成培養(yǎng)基。（2）完全培養(yǎng)基：在基本培養(yǎng)基中加入一些富含氨基酸、維生素和堿基等天然物質(zhì)，可用來滿足絕大多數(shù)微生物的生長需要的培養(yǎng)基。（3）補充培養(yǎng)基：在基本培養(yǎng)基中有針對性加進某一種或某幾種營養(yǎng)成分，以滿足相應的營養(yǎng)缺陷型菌株生長的需要的培養(yǎng)基。舉例:選擇出抗氨芐（biàn）青霉素能力的細菌培養(yǎng)基中加氨芐青霉素有抗氨芐青霉素能力的菌落沒有抗氨芐青霉素能力的菌落被淘汰基礎培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基（四）

選擇培養(yǎng)基四種常見制備方法或?qū)嵗愋蜅l件選擇分離得到的菌種改變培養(yǎng)條件70～80℃的高溫無氧環(huán)境下培養(yǎng)添加某種化學物質(zhì)加入青霉素高濃度食鹽特殊碳、氮源石油是唯一碳源營養(yǎng)缺陷不加碳源不加氮源水生棲熱菌酵母菌、霉菌等真菌金黃色葡萄球菌能消除石油污染的微生物自養(yǎng)型微生物固氮菌青霉素能殺死細菌、放線菌,對真菌不起作用厭氧型微生物，兼性厭氧型尿素［CO(NH2)2］含氮量高，化學性質(zhì)穩(wěn)定，是一種重要的農(nóng)業(yè)氮肥，尿素不能直接被農(nóng)作物吸收，土壤中的細菌將尿素分解成NH3，再被轉(zhuǎn)化為NO3-、NH4+等被植物吸收。細菌利用尿素的原因：土壤中的細菌分解尿素是因為他們能合成脲酶。CO(NH2)2+H2O2NH3+CO2

脲酶選擇培養(yǎng)基配方的設計P16思考·討論尿素討論1.如果讓你配制一種培養(yǎng)基，將土壤稀釋液中能分解尿素的細菌

分離出來，培養(yǎng)基的配方該如何設計？設計一種選擇培養(yǎng)基,用尿素作為唯一氮源,可以將分解尿素

的細菌分離出來。2.該培養(yǎng)基與普通培養(yǎng)基有哪些共同點和不同點？這種培養(yǎng)基與普通培養(yǎng)基相比，只是用尿素作為唯一氮源，培養(yǎng)基的其他營養(yǎng)成分基本相同。選擇培養(yǎng)基配方的設計P16思考·討論牛肉膏5.0g蛋白胨10.0gNaCl5.0g瓊脂20.0g蒸餾水定容到1000mlKH2PO41.4gNaH2PO42.1gMgSO4·7H2O0.2g葡萄糖10.0g尿素CO(NH2)21.0g瓊脂15.0g蒸餾水定容到1000ml培養(yǎng)基一培養(yǎng)基二1.從物理性質(zhì)看兩種培養(yǎng)基屬于哪類？依據(jù)是什么？培養(yǎng)

基的主要用途是什么？都屬于固體培養(yǎng)基。依據(jù)是添加了凝固劑瓊脂，且比例為1.5%-2%。培養(yǎng)基的主要用途是分離、鑒定、計數(shù)、保存。2.從用途上來講，哪個屬于選擇培養(yǎng)基？將得到何種細菌？培養(yǎng)基二屬于選擇培養(yǎng)基；其可獲得能分解尿素的微生物。3.兩種培養(yǎng)基中共有哪些成分？碳源、氮源、無機鹽、水培養(yǎng)基一的碳源為_____________，氮源為__________。培養(yǎng)基二的碳源為_______，氮源為_______。牛肉膏、蛋白胨牛肉膏、蛋白胨葡萄糖尿素典例分析編號①②③④⑤成分(NH4)2SO4KH2PO4FeSO4CaCl2H2O含量0.4g4.0g0.5g0.5g100mL據(jù)某微生物培養(yǎng)基的配方表回答下列問題1.此培養(yǎng)基按物理性質(zhì)劃分屬于______培養(yǎng)基，理由是______________________

按功能劃分屬于_______培養(yǎng)基，因為沒有碳源，只有__________微生物才能生長

(利用空氣中的CO2)。2.此培養(yǎng)基含有的微生物的營養(yǎng)成分包括____________________三類，若加入氨基酸，

則它可充當?shù)臓I養(yǎng)成分包括_________________________。3.若要觀察微生物的菌落特征，培養(yǎng)基中應添加的成分是_________________。4.若用該培養(yǎng)基來分離尿素分解菌，應除去表中

成分(填表中序號)，應加入

_________和_______________的有機物。液體選擇自養(yǎng)型水、無機鹽、氮源碳源、氮源、生長因子凝固劑(瓊脂)①尿素不含氮元素沒有凝固劑(瓊脂)典例分析選擇培養(yǎng)基微生物的選擇培養(yǎng)微生物的數(shù)量測定土壤中分解尿素的細菌的分離與計數(shù)如果想知道1g土壤中有多少能分解尿素的細菌，需要解決哪2個問題？選擇培養(yǎng)：獲得能分解尿素的細菌的純培養(yǎng)物計數(shù)：土壤菌液進行充分稀釋及科學的微生物數(shù)量測定方法—稀釋涂布平板法?！♂屚坎计桨宸ㄌ荻认♂尅坎计桨逡阅蛩刈鳛槲ㄒ坏吹倪x擇培養(yǎng)基培養(yǎng)基類型：方法：問：由于土壤細菌的數(shù)量龐大，那么怎么獲得特定微生物的純培養(yǎng)物呢？答：要對土壤進行充分稀釋，然后再將菌液涂布到制備好的選擇培養(yǎng)基上。稀釋涂布平板法（統(tǒng)計菌落數(shù)）3.兩個基本操作：___________和___________1.概念：是將菌液進行一系列梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進行培養(yǎng)的方法。梯度稀釋涂布平板聚集的微生物單個細胞菌液梯度稀釋單個菌落涂布平板生長繁殖2.原理：當樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌。通過計數(shù)平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少活菌4.操作過程①土壤取樣

細菌宜在酸堿度接近中性的潮濕土壤中生長，絕大部分分布在距地表3~8cm的土壤層。鏟去表層土3cm左右，取樣，將樣品裝入事先準備好的信封中。注意：取土樣時用的鐵鏟和取樣袋在使用前都需要

。操作完成后，一定要

。滅菌洗手②樣品梯度稀釋將10g土樣加入盛有90mL無菌水的錐形瓶中，充分搖勻。取1mL上清液加入盛有9mL無菌水的試管中，依次等比稀釋。10g1×1090mL無菌水1mL1mL1mL1mL1mL1mL1×1021×1031×1041×1051×1061×1076只試管分別加入9mL無菌水③涂布平板a.取0.1mL菌液，滴加到培養(yǎng)基表面。微量移液器b.將涂布器浸在盛有酒精（體積分數(shù)70％）的燒杯中。c.將涂布器放在火焰上灼燒，待酒精燃盡、涂布器冷卻后，再進行涂布。d.用涂布器將菌液均勻地涂布在培養(yǎng)基表面。涂布時可轉(zhuǎn)動培養(yǎng)皿，使涂布均勻。待涂布的菌液被培養(yǎng)基吸收后，將平板倒置，放入恒溫箱培養(yǎng)。待涂布的菌液被培養(yǎng)基吸收后，將平板倒置，放入30-37℃的恒溫培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)1-2d。問題1：當目的菌數(shù)量太少時，怎么辦？需要利用選擇培養(yǎng)基對其進行富集培養(yǎng)（擴大培養(yǎng)），以確?？梢缘牡玫剿枘康木＂芘囵B(yǎng)與觀察恒溫培養(yǎng)箱待涂布的菌液被培養(yǎng)基吸收后，將平板倒置，放入30-37℃的恒溫培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)1-2d。問題2：培養(yǎng)時要將一個未接種的培養(yǎng)基和一個已

接種的培養(yǎng)基放在一起培養(yǎng)為什么？培養(yǎng)未接種的培養(yǎng)基的作用是對照。④培養(yǎng)與觀察恒溫培養(yǎng)箱未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫一段時間后，如果無菌落生長，說明培養(yǎng)基制備成功、合格，未受到污染。問題3：與平板劃線法相比，為什么稀釋涂布平板法可以用于細菌的計數(shù)？

平板劃線法最開始的劃線很可能菌類會長成一片，導致無法計數(shù)，此外灼燒接種環(huán)的時候也會殺死一部分菌類。平板劃線法稀釋涂布平板法⑤注意事項：將涂布器從酒精中取出時，要讓多余的酒精在燒杯中滴盡，然后再放在火焰上灼燒；不要將過熱的涂布器放在盛有酒精的燒杯中，以免引燃酒精。過程中所有操作都應在酒精燈火焰旁進行10g土樣加入盛有90mL無菌水中后，已稀釋10倍，在計算時，不要忽略；由于使用的是選擇培養(yǎng)基，所以一般情況下，獲得的單菌落即目的菌，但因為有些微生物可以利用目的菌的代謝產(chǎn)物來生長繁殖，所以還需要進一步驗證5.操作過程稀釋涂布平板法（統(tǒng)計菌落數(shù)）方法平板劃線法稀釋涂布平板法純化原理接種工具單菌落的獲得用途效果圖相同點連續(xù)劃線梯度稀釋→涂布平板接種環(huán)涂布器從最后劃線區(qū)挑取稀釋度合適的整個平板上都可找到單菌落分離純化菌種，獲得單菌落①分離純化菌種，獲得單菌落②用于計數(shù)①都能分離純化菌種；②都在固體培養(yǎng)基上進行常用微生物分離方法比較如圖為“土壤中分解尿素的細菌的分離和計數(shù)”實驗中樣品稀釋示意圖。請據(jù)圖分析，下列說法錯誤的是(

)AA.③號試管的稀釋倍數(shù)為103B.④號試管中稀釋液進行平板培養(yǎng)得到的菌落平均數(shù)可能為⑤號試管的10倍C.⑤號試管的結(jié)果表明每克土壤中的菌株數(shù)為1.7×109D.將涂布器在酒精燈火焰上灼燒冷卻后，再進行涂布典例分析稀釋102倍稀釋103倍稀釋105倍

既然稀釋涂布平板法可以計算活菌數(shù)目，那么是怎么通過稀釋涂布平板法統(tǒng)計活菌的數(shù)目呢？還有哪些統(tǒng)計活菌的方法呢？選擇培養(yǎng)基微生物的選擇培養(yǎng)微生物的數(shù)量測定土壤中分解尿素的細菌的分離與計數(shù)1.間接計數(shù)法——稀釋涂布平板法當樣品的稀釋度足夠

時，培養(yǎng)基表面生長的一個

，來源于

中的一個

。通過計數(shù)平板上的

數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少

。（1）原理：高菌落樣品稀釋液活菌菌落活菌樣品的稀釋度將直接影響平板上的菌落數(shù)目（2）計數(shù)原則①選擇菌落數(shù)為

的平板計數(shù)。②

稀釋度下，應

對

個平板進行重復計數(shù)，然后求出

。③統(tǒng)計的菌落往往比活菌的實際數(shù)目

。④統(tǒng)計的結(jié)果一般用

而不是活菌數(shù)。30-300同一至少3平均值低菌落數(shù)因為當兩個或多個細胞連在一起時，繁殖后形成的還是一個菌落。恰當?shù)南♂尪?、涂布是否均勻是成功統(tǒng)計菌落數(shù)目的關鍵。（3）計算公式：M代表稀釋倍數(shù)C代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)V代表涂布平板時所用的稀釋液的體積(mL)每g樣品中的菌落數(shù)＝

(C÷V)×M例：某同學在稀釋倍數(shù)為106

的培養(yǎng)基中測得平板上菌落數(shù)的平均數(shù)為234，那么每g樣品中的菌落數(shù)是（涂布平板時所用稀釋液的體積為0.1mL)()A.2.34×108B.2.34×109C.234D.23.4B1.間接計數(shù)法——稀釋涂布平板法

思考：（1）為什么稀釋涂布平板法可以用于細菌的計數(shù)呢？當樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個單菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌。通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少活菌。為了保證結(jié)果準確，一般選擇菌落數(shù)為30-300的平板進行計數(shù)。（2）統(tǒng)計菌落數(shù)目時，要選擇菌落數(shù)范圍為多少的平板？（3）在同一稀釋度下，至少對3個平板進行重復計數(shù)求平均值的原因是什么？重復實驗,減少誤差。1.間接計數(shù)法——稀釋涂布平板法（4）通過此方法統(tǒng)計的細菌的數(shù)目與它的實際數(shù)目

相同嗎？往往比活菌的實際數(shù)目少，這是因為當兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落。（5）甲同學做此實驗在稀釋倍數(shù)105獲得3個平板，

菌落數(shù)分別是80、90、100，涂布平板時均使用0.1ml菌液，試計算每

克土壤中可以分離尿素的細菌數(shù)目？（80+90+100）/30.1×105=9×107個/克2.直接計數(shù)法——顯微鏡直接計數(shù)法（總菌數(shù)計數(shù)）不能區(qū)分死菌與活菌→導致結(jié)果偏大；個體小的細菌在顯微鏡下難以觀察；（1）原理：（2）缺點：血細胞計數(shù)板：細菌計數(shù)板：較厚，用于相對較大的酵母菌細胞、霉菌孢子等的計數(shù)。較薄，對細菌等較小的細胞進行觀察和計數(shù)。（“染色排除法”）（使用臺盼藍，死細胞會被染成藍色）（3）優(yōu)點：快速、直觀利用細菌計數(shù)板或血細胞計數(shù)板，在顯微鏡下計算一定容積里樣品中微生物的數(shù)量。細菌計數(shù)板計數(shù)室的高度是0.02mm2。故細菌計數(shù)板計數(shù)細菌的計算是：0.02mm3=0.02×10-3cm3=2×10-5mL2.直接計數(shù)法——比濁法分光光度計將未知細胞數(shù)的菌懸液的光密度與已知細胞數(shù)的相比菌懸液中的細胞濃度與光密度成正比在一定波長下，測定菌懸液的光密度缺點：不能區(qū)分死菌和活菌兩種計數(shù)方法的比較內(nèi)容直接計數(shù)法間接計數(shù)法主要用具計數(shù)依據(jù)優(yōu)點計算公式缺點結(jié)果細菌計數(shù)板或血細胞計數(shù)板涂布器細菌個數(shù)培養(yǎng)基上菌落數(shù)計數(shù)方便、操作簡單計數(shù)的是活菌每毫升原液含菌株數(shù)＝每小格平均菌株數(shù)×400÷大格體積×稀釋倍數(shù)每克樣品中的菌株數(shù):(C÷V)×M不能區(qū)分死菌與活菌當兩個或多個菌體連在一起時,平板上觀察到的只是一個菌落比實際值偏大比實際值偏小甲、乙兩位同學用稀釋涂布平板法測定同一土壤樣品中的細菌數(shù)。在對應稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基中，得到以下兩種統(tǒng)計結(jié)果。(1)甲同學在該濃度下涂布了一個平板，統(tǒng)計的菌落數(shù)為230，該同學的統(tǒng)計結(jié)果_______(填“可靠”或“不可靠”)，若不可靠，應如何改進？(2)乙同學在該濃度下涂布了3個平板，統(tǒng)計的菌落數(shù)分別為21、212、256，該同學將21舍去，然后取平均值。該同學對實驗結(jié)果的處理_______(填“合理”或“不合理”)。不可靠為增加實驗的說服力與準確性，應設置重復實驗，在同一稀釋度下至少涂布3個平板，統(tǒng)計結(jié)果后計算平均值。不合理微生物計數(shù)時，如果實驗中出現(xiàn)重復實驗的結(jié)果差別很大的情況，應分析實驗過程中可能的影響因素，找出差異的原因，而不能簡單地將結(jié)果舍棄后進行計數(shù)。典例分析選擇培養(yǎng)基微生物的選擇培養(yǎng)微生物的數(shù)量測定土壤中分解尿素的細菌的分離與計數(shù)絕大多數(shù)微生物都能利用葡萄糖，但是只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素。利用以尿素作唯一氮源的選擇培養(yǎng)基，可以從土壤中分離出分解尿素的細菌。常見的分解尿素的微生物：芽孢桿菌、小球菌、棒狀桿菌等細菌，某些真菌和放線菌也能分解尿素。1.實驗目的：（1）從土壤中分離出能夠分解尿素的細菌（2）統(tǒng)計每克土壤樣品中究竟含有多少這樣的細菌2.實驗原理：3.提出問題:土壤中含有能分解尿素的細菌，我們?nèi)绾畏蛛x它們？每克土壤樣品究竟含有多少這樣的細菌？利用以“尿素作為唯一氮源”的選擇培養(yǎng)基，可以分離。4.做出假設：①取樣地點要求：（1）土壤取樣

酸堿度接近中性的潮濕土壤。細菌適宜在該環(huán)境中生長。②取樣過程：鏟去表層土（一般3cm左右）。細菌絕大部分分布在距地表3～8cm的土壤層。將樣品裝入事先準備好的信封中。注意事項：取土樣時用的鐵鏟和取樣袋在使用前都需要滅菌。操作完成后，一定要洗手。5.實驗設計：①選擇培養(yǎng)基：以尿素為唯一氮源②牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基：作為對照組，來判斷選擇培養(yǎng)基是否具有選擇作用配方：葡萄糖10.0g尿素1.0gKH2PO41.4gNa2HPO42.1gMgSO4·7H2O0.2g瓊脂15.0g蒸餾水1000ml①碳源②提供能量氮源①提供無機鹽；②調(diào)節(jié)pH。凝固劑（2）制備培養(yǎng)基5.實驗設計：①樣品梯度稀釋將10g土樣加入盛有90mL無菌水的錐形瓶中，充分搖勻。取1mL上清液加入盛有9mL無菌水的試管中，依次等比稀釋。10g1×1090mL無菌水1mL1mL1mL1mL1mL1mL1×1021×1031×1041×1051×1061×1076只試管分別加入9mL無菌水（3）樣品的稀釋與涂布5.實驗設計②涂布平板a.取0.1mL菌液，滴加到培養(yǎng)基表面。微量移液器b.將涂布器浸在盛有酒精（體積分數(shù)70％）的燒杯中。c.將涂布器放在火焰上灼燒，待酒精燃盡、涂布器冷卻后，再進行涂布。d.用涂布器將菌液均勻地涂布在培養(yǎng)基表面。涂布時可轉(zhuǎn)動培養(yǎng)皿，使涂布均勻。待涂布的菌液被培養(yǎng)基吸收后，將平板倒置，放入恒溫箱培養(yǎng)。（3）樣品的稀釋與涂布平板不同微生物在土壤中含量不同，分離不同的微生物采用不同的稀釋度，以保證獲得菌落數(shù)在30～300之間，適于計數(shù)的平板。測細菌數(shù)：一般用104、105、106稀釋液測放線菌：一般用103、104、105稀釋液測真菌數(shù)：一般用102、103、104稀釋液思考：在初次實驗中，對于稀釋的范圍沒有把握，怎樣做才能保證從中選擇出菌落數(shù)在30～300的平板進行計數(shù)？選擇一個比較寬的范圍，1×103～1×107倍稀釋的稀釋液分別涂布到平板上培養(yǎng)，以保證能從中選擇出菌落數(shù)在30～300的平板進行計數(shù)。稀釋103倍稀釋104倍稀釋105倍空白對照不涂布稀釋液的選擇培養(yǎng)基和牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，以驗證培養(yǎng)基中是否含有雜菌。①每個濃度至少設置4個平板選擇培養(yǎng)基（平行重復）牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（用以判斷選擇培養(yǎng)基是否具有選擇作用）。②如何驗證培養(yǎng)基中是否含有雜菌？（3）樣品的稀釋與涂布平板為了避免混淆，最好在使用前做好標記。例如：注明組別、培養(yǎng)日期和稀釋度。5.實驗設計培養(yǎng)條件：不同種類的微生物，往往需要不同的培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時間。（細菌一般在30-37℃的溫度下培養(yǎng)1-2d）觀察：每隔24h統(tǒng)計一次菌落數(shù)目，選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時的記錄作為結(jié)果。以防止因培養(yǎng)時間不足而導致遺漏菌落的數(shù)目。結(jié)果：一般來說，在相同的培養(yǎng)條件下，同種微生物表現(xiàn)出穩(wěn)定的菌落特征，如形狀、大小和顏色等。稀釋度104105106107123平均值123平均值123平均值123平均值菌落數(shù)/平板（4）微生物的培養(yǎng)和觀察5.實驗設計內(nèi)容現(xiàn)象結(jié)論有無雜菌污染的判斷對照的培養(yǎng)皿中無菌落生長對照組的培養(yǎng)皿中有菌落菌落形態(tài)多樣，菌落數(shù)偏高選擇培養(yǎng)基的篩選作用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上的菌落數(shù)目大于選擇培養(yǎng)基上的數(shù)目樣品的稀釋操作得到3個或3個以上菌落數(shù)目在30~300的平板重復組的結(jié)果若選取同一土樣，統(tǒng)計結(jié)果應接近未被雜菌污染被雜菌污染培養(yǎng)基中混入其他雜菌選擇培養(yǎng)基具有篩選作用操作成功6.結(jié)果分析與評價（1）結(jié)合對照組，分析培養(yǎng)物中是否有雜菌污染以及選擇培養(yǎng)基是否篩選出一些菌落。如果沒有接種的培養(yǎng)基上沒有菌落生長，說明培養(yǎng)基沒有被雜菌污染。如果接種后的完全培養(yǎng)基上的菌落數(shù)明顯多于選擇培養(yǎng)基上的菌落數(shù)，說明選擇培養(yǎng)基篩選出了一些尿素分解菌。（2）你是否獲得了某一稀釋度下菌落數(shù)為30～300的平板？

在這一稀釋度下，是否至少有2個平板的菌落數(shù)接近？如果得到了兩個或多個菌落數(shù)為30~300的平板，說明稀釋度合適，操作比較成功，能夠進行菌落的計數(shù)。（3）你統(tǒng)計的每克土樣中能分解尿素的細菌的菌落數(shù)是多少？與其他同學統(tǒng)計的結(jié)果接近嗎？如果差異很大，可能是什么原因引起的？如果是用同一土樣進行的操作，數(shù)據(jù)應該比較接近。如果差異很大，就需要從操作是否規(guī)范、培養(yǎng)基配制是否合理等方面查找原因。得到的菌落一定是分解尿素的細菌嗎？不一定，還需要進一步的鑒定進一步探究——分解尿素細菌的進一步鑒定

本活動只是初步篩選了能分解尿素的細菌,對分離的菌種進行鑒定還需要借助生物化學的方法。你可以查閱相關資料,進一步設計實驗來鑒定自己分離的菌種。需要用“鑒別培養(yǎng)基”在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑。培養(yǎng)某種細菌后，如果PH升高，指示劑將變紅，說明該細菌能夠分解尿素。CO（NH2）2+H2O CO2+2NH3

脲酶原理：脲酶催化尿素分解成氨→培養(yǎng)基堿性增強→酚紅變紅→脲酶陽性①液體培養(yǎng)基可以直接看液體的變色情況；②固體培養(yǎng)基上可以觀察菌落周圍是否出現(xiàn)紅色環(huán)帶，紅色環(huán)帶直徑與菌落直徑比值越大，說明分解能力越強。7.鑒別培養(yǎng)基pH升高，酚紅指示劑變紅拓展：鑒別培養(yǎng)基名稱主要用途主要化學物質(zhì)特征性變化伊紅—亞甲藍瓊脂培養(yǎng)基

剛果紅培養(yǎng)基油脂培養(yǎng)基淀粉培養(yǎng)基H2S試驗培養(yǎng)基鑒別大腸桿菌鑒別纖維素分解菌鑒別產(chǎn)脂肪酶菌株鑒別產(chǎn)淀粉酶菌株鑒別產(chǎn)H2S菌株伊紅、亞甲藍剛果紅、纖維素食用油、吐溫、中性紅指示劑可溶性淀粉醋酸鉛出現(xiàn)金屬光澤的深紫色菌落纖維素被分解后出現(xiàn)透明圈由淡紅色變成深紅色淀粉被分解后出現(xiàn)淀粉水解圈產(chǎn)生黑色沉淀例題：金黃色葡萄球菌是一種具有高度耐鹽性的微生物，可引起人類肺炎、腸炎等疾病。金黃色葡萄球菌在血平板（培養(yǎng)基中添加適量血液）上生長時，可破壞菌落周圍的紅細胞，使其褪色。下圖為定性檢測鮮牛奶中是否存在金黃色葡萄球菌的操作流程，請回答相關問題。碳源、氮源、水和無機鹽增加金黃色葡萄球菌的數(shù)量（1）7.5%NaCl肉湯培養(yǎng)基為微生物提供的營養(yǎng)成分包括

，用7.5%NaCl肉湯培養(yǎng)基進行選擇培養(yǎng)的主要目的是

。（2）操作中在血平板上的接種方法是

，接種操作前后需要對接種工具進行

滅菌。平板劃線法灼燒例題：金黃色葡萄球菌是一種具有高度耐鹽性的微生物，可引起人類肺炎、腸炎等疾病。金黃色葡萄球菌在血平板（培養(yǎng)基中添加適量血液）上生長時，可破壞菌落周圍的紅細胞，使其褪色。下圖為定性檢測鮮牛奶中是否存在金黃色葡萄球菌的操作流程，請回答相關問題。（3）在制備血平板時，待培養(yǎng)基

后，再加入適量血液．按培養(yǎng)基功能分類，血平板屬于

培養(yǎng)基．（4）經(jīng)多次規(guī)范操作、重復實驗，血平板上均出現(xiàn)

的菌落，初步證明鮮牛奶中存在金黃色葡萄球菌，但鮮牛奶供應商仍認為此菌并非鮮牛奶所攜帶，因此，要對本操作進行完善，完善的方案是

。設置不加鮮牛奶但其他操作均相同的對照組冷卻鑒別周圍存在透明圈微生物的數(shù)量測定選擇培養(yǎng)基的作用微生物選擇培養(yǎng)獲取純培養(yǎng)物的方法-稀釋涂布平板法微生物的選擇培養(yǎng)和計數(shù)選擇培養(yǎng)基微生物的選擇培養(yǎng)科學實例篩選原則選擇培養(yǎng)基的概念及舉例稀釋涂布平板法的操作過程間接計數(shù)—稀釋涂布平板法直接計數(shù)—計數(shù)板計數(shù)法土壤中分解尿素的細菌的分離與計數(shù)培養(yǎng)基的制備實驗設計（