實驗項目槐米中蕓香苷的提取精制及檢識課件

實驗項目槐米中蕓香苷的提取精制及檢識1.槐米中蕓香苷的提?。?學時）2.蕓香苷的精制（2學時）3.水解蕓香苷得到槲皮素（4學時）4.蕓香苷和槲皮素的檢識（4學時）主要內容槐花槐米槐米系豆科植物槐SophorajaponicaL.的干燥花蕾。能涼血止血，清肝瀉火。用于便血，痔瘡出血，血痢，尿血，吐血，高血壓癥等。蕓香苷槲皮素（苷元）

槐米中有效成分為蕓香苷,又稱蘆丁(rutin)。含量可高達12～20％，藥理實驗證明蕓香苷有調節(jié)毛細血管滲透作用，臨床上可作為毛細血管脆弱引起的出血癥，常作為高血壓的輔助治療藥。實訓內容

1.槐米中蕓香苷的提取

實訓目的掌握黃酮及其苷類化合物的性質及提取分離方法。學會運用堿溶酸沉法對槐米中的蕓香苷進行提取分離。實訓原理蕓香苷分子中含具有酚羥基，顯弱酸性，能與堿成鹽而溶于堿液中，加酸酸化后又可沉淀析出，因此可用堿溶酸沉法提取蕓香苷。操作步驟加入0.4%硼砂水溶液200ml，攪拌下加入石灰乳調節(jié)pH8-9，加熱保持微沸20min（注意補充水分，保證pH值），趁熱用棉花過濾槐米（20g）合并濾液殘渣用濃鹽酸調pH3-4，蓋好，靜置加入150ml0.4%硼砂水溶液同法操作再提取15min，趁熱用棉花過濾殘渣（棄去不要）濾液提示1.提取時加入0.4%硼砂水溶液的目的：既能調節(jié)pH，又可以與蘆丁中的鄰二酚羥基絡合，保護鄰二酚羥基不被氧化。2.

加石灰乳既可達到調pH值的目的，還可以除去槐米中的多糖類、粘液質等雜質。注意1.加石灰乳時應嚴格控制在pH8～9，不得超過10，如堿性太強，鈣離子易與酚羥基、羰基形成難溶于水的鰲合物，降低收率。2.酸化時加鹽酸控制pH在3～4，如果pH＜2，容易使蕓香苷的醚鍵形成

鹽，不易析出沉淀，降低收率。實訓內容

2.蕓香苷的精制實訓目的掌握重結晶法的原理。學會運用重結晶法對蕓香苷粗品進行精制。實訓原理根據(jù)雜質難溶于水，而蕓香苷在冷、熱水中溶解度相差懸殊的性質采用重結晶法進行精制。蕓香苷性狀：淺黃色粉末或極細微淡黃色針狀結晶。溶解度：在冷水中1:10000，沸水中1:200；冷乙醇中1:200，沸乙醇中1:60。沸甲醇中1:7。第一次實驗所得液體濾液沉淀（粗品蘆?。┏闉V置300ml蒸餾水中，煮沸，至蕓香苷完全溶解，趁熱抽濾殘渣濾液蓋好，靜置操作步驟減壓抽濾裝置思考1.以熱水重結晶法精制蘆丁的依據(jù)是什么？2.重結晶的操作要點有哪些？實訓內容

3.蕓香苷的水解實訓目的掌握苷類的酸水解方法。能夠熟練操作蕓香苷的酸水解。實訓原理蕓香苷可被稀酸水解生成苷元槲皮素及葡萄糖、鼠李糖。蕓香苷槲皮素葡萄糖鼠李糖精制所得液體濾液沉淀抽濾操作步驟精制蕓香苷置60～70℃烘箱中烘干（稱重）提取率=所得重量（g）20g*100%精制蕓香苷（1g）置250ml圓底燒瓶中，加入2%硫酸80ml，加3粒沸石，加熱回流40min，放冷，抽濾。沉淀濾液水洗至中性，抽干水分，烘干槲皮素注意觀察現(xiàn)象：未加熱時，瓶內為混懸液（蘆丁不溶于冷水），加熱后，混懸液逐漸變?yōu)槌吻逡海ㄌJ丁易溶于熱水），繼續(xù)加熱，有鮮黃色沉淀析出（槲皮素不溶于水）實訓內容

4.蕓香苷和槲皮素的檢識實訓目的掌握黃酮類化合物、酚羥基、苷的化學檢識方法。掌握硅膠色譜和聚酰胺色譜的分離原理。能夠熟練進行薄層色譜操作。實訓原理硅膠薄層色譜分離黃酮類成分的原理為極性吸附，極性大的物質吸附強。聚酰胺薄層色譜是利用聚酰胺分子內存在的許多酰胺基，能與酚類的羥基、酸類的羧基及醌類的醌基形成氫鍵而產生吸附，能夠形成氫鍵的基團越多，吸附越強。黃酮類化合物的顯色反應；酚羥基的顯色反應；苷的鑒定。1.色譜檢識樣品溶液的制備：

蕓香苷樣品溶液：取精制蕓香苷少量，加10ml乙醇溶解，備用。

槲皮素樣品溶液：取槲皮素少量，加10ml乙醇溶解，備用。硅膠薄層色譜操作（1）點樣：取硅膠薄層板，在下端約1.5-2cm處用鉛筆畫一直線，作為起始線，點上下列樣品:

①自制蕓香苷乙醇液②蕓香苷對照品乙醇液③自制槲皮素乙醇液④槲皮素對照品乙醇液（2）展開：展開劑乙酸乙酯：甲醇：冰醋酸（15：1：0.5）；用量10ml；

展距

10cm（3）顯色：展開完→取出硅膠板→劃前沿線→晾干→可見光觀察→紫外光觀察→氨水熏→觀察記錄斑點顏色和位置（4）結果：計算Rf值，并比較。10cm①②

③④

聚酰胺薄層色譜（1）點樣：取聚酰胺薄膜，在下端約0.8cm處用鉛筆畫一直線，作為起始線，點上下列樣品:

①自制蕓香苷乙醇液②蕓香苷對照品乙醇液③自制槲皮素乙醇液④槲皮素對照品乙醇液自制樣品要求：澄清透明，完全溶解（2）展開展開劑乙醇：水：乙酸乙酯（3：1：0.5）用量4ml展距5cm（3）顯色：展開完→取出薄膜→劃前沿線→溶劑揮干→可見光觀察→紫外光觀察→氨水熏→記錄斑點顏色和位置聚酰胺色譜紫外燈下結果（4）結果：計算Rf值，并比較。2.化學檢識樣品：點樣后剩下的

自制蕓香苷乙醇液

自制槲皮素乙醇液試劑：鎂粉、濃鹽酸、10%α-萘酚溶液、濃硫酸、1%三氯化鐵乙醇溶液、1%三氯化鋁乙醇溶液試管8支（蕓香苷4支、槲皮素4支）將蕓香苷乙醇液和槲皮素乙醇液，分別平分到4支試管中，分別做以下實驗。樣品溶液+α-萘酚20d→振搖后傾斜45°→沿管壁加濃硫酸20d→靜置→觀察并記錄液面交界處顏色變化（不要搖動）黃酮鹽酸-鎂粉反應樣品溶液+Mg少許+濃HCl2-3d觀察顏色變化。黃酮三氯化鋁反應樣品溶液+AlCl32-3d→觀察顏色變化→1d于濾紙上→紫