微生物生物學(xué)-李穎 09實(shí)驗(yàn)九 學(xué)習(xí)資料

常用培養(yǎng)基的配制

高壓蒸汽滅菌和干熱滅菌實(shí)驗(yàn)九實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶W(xué)習(xí)掌握常用培養(yǎng)基的制備方法學(xué)習(xí)掌握高壓蒸汽滅菌和干熱滅菌的原理和方法實(shí)驗(yàn)原理培養(yǎng)基是人工配制的適合于微生物生長繁殖或積累代謝產(chǎn)物的營養(yǎng)基質(zhì)營養(yǎng)成分：碳源、氮源、能源、無機(jī)鹽、生長因子、水不同微生物的生長對于培養(yǎng)基有不同的要求（細(xì)菌、放線菌最適pH值中性至偏堿性；霉菌喜好酸性）實(shí)驗(yàn)原理培養(yǎng)基種類：一、按成分的不同天然培養(yǎng)基、合成培養(yǎng)基、半合成培養(yǎng)基

（牛肉膏蛋白胨）（高氏一號）（PDA）二、按培養(yǎng)基的物理狀態(tài)固體培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基三、按培養(yǎng)基用途基礎(chǔ)培養(yǎng)基、選擇培養(yǎng)基加富培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基高壓蒸汽滅菌法

滅菌：殺滅一切微生物的營養(yǎng)體，芽胞和孢子

消毒：消滅病原菌和有害微生物的營養(yǎng)體原理：濕熱中菌體吸水，蛋白質(zhì)容易凝固，因蛋白質(zhì)含水量增加，所需凝固溫度降低；濕熱的蒸氣有潛熱存在。蒸汽進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)凝結(jié)成水，能放出潛在熱量而提高溫度，更增強(qiáng)了殺菌力

設(shè)備：高壓滅菌鍋時間長短根據(jù)滅菌物品的種類和數(shù)量不同有所變化適用于培養(yǎng)基、緩沖液、橡膠物品、工作服等的滅菌，也可用于玻璃器皿的滅菌注意事項(xiàng)：

1）冷空氣徹底排除；2）加水；3）壓力降為“0”時方可打開。

蒸汽壓力與蒸汽溫度的關(guān)系

壓力溫度壓力溫度壓力溫度磅/英寸2Kg/cm2(℃)磅/英寸2Kg/cm2(℃)磅/英寸2Kg/cm2(℃)10.070102.390.633

114.3

17

1.195123.320.141104.2100.703115.618

1.266

124.330.211105.7110.774116.820

1.406

127.240.281107.3120.844

118.0

22

1.547128.150.352

108.8130.914119.124

1.687

129.360.422

109.3140.984

120.226

1.696131.570.492111.7151.055

121.3

28

1.82

133.180.563

113.0161.12

122.430

2.109

134.6滅菌的蒸汽溫度隨蒸汽壓力增加而升高高壓滅菌所采用的蒸汽壓力與滅菌時間，應(yīng)根據(jù)具體滅菌物質(zhì)而定。

干熱滅菌法原理：加熱使蛋白質(zhì)變性，與水的含量有關(guān)，當(dāng)環(huán)境和細(xì)胞含水量越大，凝固越快利用高溫干燥空氣（160－170℃）加熱滅菌1－2h，適用于玻璃器皿和培養(yǎng)皿等注意事項(xiàng)：

1）培養(yǎng)基、橡膠制品、塑料制品不能用此法；

2）溫度控制在<180℃

；

3）物品不能太擠；

4）溫度降至70℃

時才開箱門。干熱滅菌火焰滅菌法通過火焰高溫灼燒進(jìn)行滅菌的方法

干熱滅菌法

其它滅菌方法過濾除菌：

原理：利用細(xì)菌不能通過致密具孔濾材的原理

介質(zhì)在有壓力時阻隔微生物氨基酸抗生素輻射滅菌：

原理：紫外線波長在200－300nm，具有殺菌作用，以265-266nm殺菌力強(qiáng)。此段波長易被細(xì)胞中核酸吸收；可產(chǎn)生臭氧和過氧化氫。殺菌效力與強(qiáng)度和時間的乘積成正比?；瘜W(xué)藥品滅菌：

原理：應(yīng)用化學(xué)制劑破壞細(xì)菌代謝機(jī)能培養(yǎng)基制備實(shí)驗(yàn)步驟1.按照配方稱量各藥品（牛肉膏蛋白胨、PDA、高氏一號）溶解2.補(bǔ)水定容至1000ml3.加入瓊脂粉4.調(diào)pH值（用1mol/LNaOH

或1mol/LHCl)5.分裝至三角瓶或試管6.加塞、包扎、做好標(biāo)記7.滅菌1.按照配方稱量各藥品（牛肉膏蛋白胨、PDA、高氏一號）3.

加熱熔化;補(bǔ)水定容至1000ml2.溶解4.調(diào)pH值（用1mol/LNaOH

或1mol/LHCl)

5.分裝至三角瓶150ml/瓶

加入1.6%瓊脂粉2.4g/瓶6.加塞、包扎、做好標(biāo)記7.滅菌將蒸餾水分裝于300ml三角瓶，內(nèi)含20-30粒玻璃珠，每瓶90ml

每組5瓶18×180mm試管裝9ml蒸餾水每組28支

7支包成一捆滅菌條件121.3℃1.05kg/cm2

高壓蒸汽滅菌20分鐘無菌水制備對吸管的干熱滅菌滅菌前對吸管進(jìn)行包裝：1ml每組20支裁紙：5cm寬的長紙條：包裝加熱，使滅菌鍋夾層的水加熱、沸騰，不斷產(chǎn)生蒸汽，以排除冷空氣，排氣15-20min后，鍋內(nèi)的空氣排凈，關(guān)閉放氣閥使得滅菌鍋密封蒸汽壓不斷上升，鍋內(nèi)的溫度也上升，當(dāng)壓力升到一定時，溫度也會達(dá)到相應(yīng)值（121.3℃1.05kg/cm2）在該溫度下保持20-30min，可以將微生物和芽孢殺死有關(guān)高壓蒸汽滅菌的時間滅菌步驟

高壓蒸汽滅菌1、加水至刻度線；2、裝料（不要緊貼內(nèi)壁）

3、加蓋；4、排氣、滅菌；5、降壓；