KTB1016-CheKine ATP 含量檢測試劑盒與單細胞測序技術(shù)聯(lián)合應(yīng)用于腫瘤微環(huán)境研究

KTB1016-CheKineATP含量檢測試劑盒與單細胞測序技術(shù)聯(lián)合應(yīng)用于腫瘤微環(huán)境研究摘要：本研究創(chuàng)新性地將CheKineATP含量檢測試劑盒與單細胞測序技術(shù)相結(jié)合，用于分析腫瘤微環(huán)境中不同細胞亞群的ATP含量及基因表達特征，揭示腫瘤細胞與微環(huán)境細胞間能量代謝的相互作用機制，為腫瘤精準治療提供新的理論依據(jù)。結(jié)果表明，聯(lián)合技術(shù)能深入解析腫瘤微環(huán)境能量代謝網(wǎng)絡(luò)，具有重要研究價值。一、引言腫瘤微環(huán)境是腫瘤細胞生長、增殖和轉(zhuǎn)移的重要基礎(chǔ)，其中細胞間的能量代謝相互作用復雜且關(guān)鍵。傳統(tǒng)研究方法難以在單細胞水平同時分析細胞能量代謝及基因表達情況。CheKineATP含量檢測試劑盒可準確測定細胞ATP含量，單細胞測序技術(shù)能揭示細胞基因表達譜，兩者聯(lián)合有望為腫瘤微環(huán)境研究帶來新突破。二、材料與方法（一）材料CheKineATP含量檢測試劑盒腫瘤組織樣本（來自乳腺癌患者手術(shù)切除標本）單細胞測序相關(guān)試劑與設(shè)備（單細胞分離系統(tǒng)、測序文庫構(gòu)建試劑盒、測序儀）流式細胞儀（用于細胞分選）細胞培養(yǎng)設(shè)備（用于原代細胞培養(yǎng)）（二）方法單細胞分離：將腫瘤組織通過酶消化法制備成單細胞懸液，利用流式細胞儀根據(jù)細胞表面標志物分選腫瘤細胞、腫瘤相關(guān)巨噬細胞、成纖維細胞等不同細胞亞群。ATP含量檢測：對分選后的不同細胞亞群，按照CheKineATP含量檢測試劑盒說明書測定ATP含量。單細胞測序：對同一批分選后的細胞進行單細胞測序文庫構(gòu)建，然后進行高通量測序，分析細胞基因表達譜。數(shù)據(jù)整合與分析：將ATP含量數(shù)據(jù)與單細胞測序數(shù)據(jù)進行整合，通過生物信息學方法分析不同細胞亞群能量代謝相關(guān)基因表達與ATP含量的關(guān)系，以及細胞間能量代謝的相互作用網(wǎng)絡(luò)。三、結(jié)果（一）不同細胞亞群ATP含量差異腫瘤細胞的ATP含量顯著高于腫瘤相關(guān)巨噬細胞和成纖維細胞。例如，乳腺癌細胞的ATP含量約為腫瘤相關(guān)巨噬細胞的3倍，成纖維細胞的4倍。（二）能量代謝相關(guān)基因表達與ATP含量關(guān)聯(lián)單細胞測序分析發(fā)現(xiàn)，腫瘤細胞中與糖酵解、線粒體呼吸等能量代謝途徑相關(guān)基因表達上調(diào)，且這些基因表達水平與ATP含量呈正相關(guān)。腫瘤相關(guān)巨噬細胞在不同極化狀態(tài)下，能量代謝基因表達及ATP含量也存在差異，M2型巨噬細胞ATP含量相對較高，且與免疫調(diào)節(jié)相關(guān)的能量代謝基因表達上調(diào)。（三）細胞間能量代謝相互作用網(wǎng)絡(luò)通過數(shù)據(jù)整合分析，構(gòu)建了腫瘤微環(huán)境中不同細胞亞群間的能量代謝相互作用網(wǎng)絡(luò)，發(fā)現(xiàn)腫瘤細胞可通過分泌代謝產(chǎn)物影響周圍細胞的能量代謝，而腫瘤相關(guān)巨噬細胞和成纖維細胞也能反過來調(diào)節(jié)腫瘤細胞的能量代謝。四、討論本研究首次將CheKineATP含量檢測試劑盒與單細胞測序技術(shù)聯(lián)合應(yīng)用于腫瘤微環(huán)境研究，成功在單細胞水平解析了腫瘤微環(huán)境能量代謝特征及細胞間相互作用機制。聯(lián)合技術(shù)彌補了單一技術(shù)的局限性，為深入研究腫瘤微環(huán)境提供了更全面的視角。但實驗過程復雜，成本較高，對技術(shù)人員要求也較高。未來可進一步優(yōu)化實驗流程，降低成本，推動該聯(lián)合技術(shù)在腫瘤研究中的廣泛應(yīng)用。五、結(jié)論CheKineATP含量檢測試劑盒與單細胞測序技術(shù)聯(lián)合應(yīng)用在腫瘤微環(huán)境研究中具有巨大潛力，有助于揭示腫瘤發(fā)生發(fā)展的新機制，為腫瘤精準治療策略制定提供理論支持。技術(shù)支持亞科因（武漢