T-CAZG 16.4-2022 動(dòng)物園獸醫(yī)化驗(yàn)室常規(guī)檢測(cè)操作指南 第4部分：寄生蟲常規(guī)檢測(cè)

團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)Part4：parasitologicalr中國動(dòng)物園協(xié)會(huì)發(fā)布I 1 1 1 1 1 2 2 2 2 3 5 5 5 7 8 9 本文件起草單位：北京動(dòng)物園管理處、杭州動(dòng)物園（杭州少年兒童公園杭州西湖風(fēng)景名勝區(qū)動(dòng)物參考了GB/T18448.1、GB/T18448.5、GB/T18441動(dòng)物園獸醫(yī)化驗(yàn)室常規(guī)檢測(cè)操作指南第4部分：寄生蟲常規(guī)檢測(cè)本文件適用于動(dòng)物園、野生動(dòng)物飼養(yǎng)場等機(jī)構(gòu)開展動(dòng)物寄生蟲常規(guī)檢SN/T3592實(shí)驗(yàn)室化學(xué)藥品和樣品廢棄物處T/CAZG018動(dòng)物園動(dòng)物樣本采集和保存操作CJJ/T240和T/CAZG016.1中生蟲和其他寄生蟲進(jìn)行的形態(tài)學(xué)鑒別、蟲卵計(jì)數(shù)注：其他寄生蟲指寄生在動(dòng)物尿路、鼻腔、氣管、眼部、耳道等其他部位的寄生蟲，含寄生在肺臟、肝臟、膽管、4.1準(zhǔn)確性24.2.2化學(xué)品安全防護(hù)按GB18218規(guī)定辨別危險(xiǎn)化學(xué)品危險(xiǎn)源。檢5.1通則5.1.1寄生蟲常規(guī)檢測(cè)包括多個(gè)檢測(cè)項(xiàng)目的多種檢測(cè)方法，每種方法需要的器材、試劑和標(biāo)本不盡相5.1.2一份標(biāo)本可以用于多個(gè)檢測(cè)項(xiàng)目。增加標(biāo)本采集、檢測(cè)次數(shù)可有效提高寄生蟲檢出率。有些不5.2器材和試劑5.2.1器材）：普通低速離心機(jī)及離心管。常用器皿：三角燒瓶、錐形量杯、量筒、容量瓶、試劑瓶、燒杯、玻皿、研缽等。）：30載玻片、蓋玻片、推玻片(可將邊緣光滑載玻片一端的兩個(gè)角分別用鑷4計(jì)數(shù)器（加法計(jì)數(shù)器）、計(jì)時(shí)器。5放大鏡。5.2.2試劑），飽和鹽水：沸水中加入氯化鈉，不斷攪動(dòng)至不再溶解，放置至室溫后有結(jié)晶析出時(shí)的溶液。％～瑞氏-姬姆薩染色液：防止進(jìn)水，密封保存；配套試劑為磷酸鹽緩沖液。香柏油：密封陰涼避光保存；作為體表寄0無水甲醇：陰涼、通風(fēng)處密封保1二甲苯：陰涼、通風(fēng)處密封保存，遠(yuǎn)離火源、熱源。5.3標(biāo)本可多至50g；動(dòng)物服驅(qū)蟲藥后檢查有無寄生蟲e）標(biāo)本記錄清楚，包括動(dòng)物種類、動(dòng)物個(gè)體單位編號(hào)、呼名或識(shí)別號(hào)、性別、標(biāo)本編號(hào)、采集g）不能立即檢測(cè)的標(biāo)本，密封后保貯于2℃~8℃,避免卵的孵化。若標(biāo)本需保存時(shí)間較長，血液寄生蟲常規(guī)檢測(cè)所用標(biāo)本為被檢動(dòng)物血液或臟器組織，準(zhǔn)備時(shí)注意4b)若不能在采血時(shí)制作血涂片，則用保存的抗凝血皮膚螨類檢測(cè)所用標(biāo)本是被檢動(dòng)物皮屑、被毛和毛囊等，準(zhǔn)備標(biāo)本時(shí)注意以下事項(xiàng)。層皮屑，若有膿瘡則擠破膿瘡取其內(nèi)容物；若采集部位毛長，宜先將毛剪短至1cm左右，采），c)對(duì)于難以通過揉壓蓋玻片散開的硬結(jié)痂標(biāo)本，不宜用香柏油作透明介質(zhì)，而是用2.5mol/L氫提高檢出率，并可使活蟲能夠維持較長時(shí)間的活力；不能立即檢測(cè)的標(biāo)本，宜在2℃~8℃保蚤、虱、蜱等體形較大的體表寄生蟲檢測(cè)標(biāo)本：可用肉眼直接察看動(dòng)物的皮膚、被毛等部位被咬部位，待蜱麻醉后取下，以防將蜱的頭部留在皮引起皮下組織結(jié)節(jié)的寄生蟲檢測(cè)標(biāo)本：包括用手指壓迫結(jié)節(jié)擠壓出的血液、注射器穿刺抽取引起皮下囊腫的寄生蟲檢測(cè)標(biāo)本：包括動(dòng)物患部皮膚破潰或囊腫破裂后流出的液體、用注射寄生于動(dòng)物尿路、鼻腔、氣管、眼部、a)尿液標(biāo)本：用1000mL大燒杯c)標(biāo)本宜新鮮、無污染、2h內(nèi)完成檢測(cè)；不能立即檢測(cè)的標(biāo)本可在2℃~8℃保存1d；標(biāo)本記寄生在肺臟、肝臟、膽管、胰臟等部位但蟲卵或蟲體可以在糞便中檢出的寄生蟲，檢測(cè)標(biāo)本56.1.1與寄生蟲常規(guī)檢測(cè)方法有關(guān)達(dá)到確診目的，必要時(shí)可借助其他非常規(guī)檢測(cè)方法進(jìn)行寄生蟲鑒別6.1.3標(biāo)本送檢人員填寫檢驗(yàn)申請(qǐng)單，其格式見T/CAZG016.1。檢測(cè)人員宜及時(shí)完成檢測(cè)，正確分析判定，檢測(cè)結(jié)束后填寫檢驗(yàn)報(bào)告單，其格式見T/CAZG016.1。6.1.4實(shí)驗(yàn)室對(duì)檢測(cè)數(shù)據(jù)進(jìn)行記錄，留存圖直接涂片法用于檢測(cè)蠕蟲卵及其幼蟲、球蟲卵囊、結(jié)腸小袋纖毛蟲滋養(yǎng)體及其包囊、阿米巴e)結(jié)果報(bào)告：宜用陰性（-）和陽性（+）表示檢測(cè)結(jié)果，寫明所用方法，陽性結(jié)果時(shí)寫明檢出寄生蟲或卵的種類，可用每個(gè)視野中發(fā)現(xiàn)的目標(biāo)數(shù)量表示感染的嚴(yán)重程度，亦可用其他形式描述感染情況。特殊標(biāo)本的處理：對(duì)一些野生動(dòng)物糞便標(biāo)本的處理方法宜適當(dāng)改進(jìn)，如大熊貓糞便常以大塊飽和鹽水漂浮法適用于檢測(cè)線蟲卵、絳蟲卵和球蟲卵囊，按以下步驟進(jìn)a)用鑷子從標(biāo)本不同部位取一定量的糞便放入大試管或燒杯；糞便量與飽和鹽水的比例宜為6c)靜置20min，用載玻片接觸液面，然后垂直向上提起，迅速翻轉(zhuǎn)，加蓋玻片；亦可先用蓋玻幾次，直到上層液澄清為止，最后棄上層液，c)1500r/min離心3min～5min，然后棄上層液，沉渣再加水、攪拌、離心，重復(fù)沉淀3離心沉淀法將蟲卵沉下去，取沉渣涂片鏡檢，以獲得斯陶爾氏法（Stoll′s斯陶爾氏法適用于大部分蟲卵、卵囊的計(jì)數(shù)，按以下步驟進(jìn)7研缽，加入約10mL氫氧化鈉溶液進(jìn)行研磨、攪拌，同時(shí)避免研杵與研缽之間磨擦破壞蟲卵，待糞便麥克馬斯特氏法（McMaster′s麥克馬斯特氏法適用于可被飽和鹽水漂浮的各種蟲卵、卵囊的計(jì)數(shù)，按以下步驟進(jìn)d)顯微鏡計(jì)數(shù)：不同蟲卵分別計(jì)數(shù)，計(jì)數(shù)兩個(gè)f)結(jié)果報(bào)告：可用陰性（-）和陽性（+）表示，陽性結(jié)果時(shí)寫明檢出寄生蟲的種類，亦可用其他形式描述感染情況。水各1滴，置于載玻片上混勻，加蓋玻片鏡檢。為提高檢出率，可制作厚血膜涂片，即滴28暗一些，便于觀察活動(dòng)的蟲體。結(jié)果報(bào)告可用陰性（-沿推玻片觸端散成一條均勻的粗線后，使推玻片與載玻片夾角保持在30o~45o,均勻地推向載外傷時(shí)的出血，取一小滴即可制作涂血片。宜連續(xù)制作血涂片2張以上備用。亦可制作厚血膜涂片，按照6.3.1a）涂厚血膜，風(fēng)干，浸入水中，血膜成乳白色時(shí)取出，再干燥備b)組織印片制作：某些寄生蟲（如禽類血液體，再觸及載玻片，制成印片，手持載玻片在空氣中揮動(dòng)，使組織薄膜迅速干燥。c)固定：在血涂片或組織印片上滴加無水甲醇數(shù)滴，固定1min～3min，待甲醇完全揮發(fā)、干燥。d)染色：按每1.5mL磷酸鹽緩沖液（或蒸餾水）中，加入5滴～10滴瑞氏-姬姆薩染色液，配成應(yīng)用液，蓋滿血涂片或組織印片。染色10min～20min；用清水沖去染色液，沖洗時(shí)避免傾斜載玻片，將載玻片平放，用流水緩緩沖洗掉染料沉淀物。沖洗后晾干?？赏ㄟ^預(yù)染試驗(yàn)確定緩沖液和染色液的比例以及染色時(shí)長。e)鏡檢：通過觀察寄生蟲的形態(tài)結(jié)構(gòu)和染色特征進(jìn)行識(shí)別；用顯微鏡觀察時(shí)，先從低倍鏡開始觀察，接著滴加香柏油1滴，用油鏡查找寄生蟲，觀察細(xì)微特征。必要時(shí)可進(jìn)行寄生蟲計(jì)數(shù)：根據(jù)寄生蟲的多少，選擇有代表性的視野若干個(gè)，計(jì)數(shù)視野內(nèi)寄生蟲、紅細(xì)胞、白細(xì)胞或被感染細(xì)胞的數(shù)量，避免重復(fù)或遺漏，計(jì)算平均每個(gè)視野中的寄生蟲數(shù)，或者計(jì)算寄生蟲與某種血細(xì)胞之間的比例，如計(jì)算被血孢子蟲感染的紅細(xì)胞與正常紅細(xì)胞之間的比例。鏡檢后擦試油鏡頭。若有必要，可將血涂片或組織印片用二甲苯和擦鏡紙擦拭干凈后保存。f)結(jié)果報(bào)告：宜用陰性（-）和陽性（+）表示；陽性結(jié)果時(shí)寫明檢出寄生蟲的種類，可用每個(gè)視野中的寄生蟲數(shù)或寄生蟲與細(xì)胞之間的比例表示感染的嚴(yán)重程度，亦可用其他方式描述感染情況。9c)在低倍鏡下觀察，當(dāng)視野透明時(shí)查找蟲體或蟲卵，若發(fā)現(xiàn)并d)換高倍鏡觀察蟲體或蟲卵的細(xì)微結(jié)構(gòu)，必要時(shí)測(cè)量大小，并拍照或錄e)結(jié)果報(bào)告：宜用陰性（-）和陽性（+）表示檢測(cè)結(jié)果，陽性結(jié)果時(shí)寫明檢出寄生蟲的種類，可用每個(gè)視野中的寄生蟲數(shù)表示感染的嚴(yán)重程度。氫氧化鈉溶液的透明效果比香柏油差，主要用于硬結(jié)痂等需要軟化的引起皮下組織結(jié)節(jié)和囊腫寄生蟲的皮膚上的小孔內(nèi)擠出幼蟲，用肉眼觀察或意動(dòng)物易感染部位，如耳根、頸后、眼周、背可用梳子梳理動(dòng)物被毛，以便觀察。找到的寄生蟲可收集起來，必要時(shí)用顯微鏡觀察細(xì)微——尿路寄生蟲檢測(cè)：將尿液倒入錐形量杯中靜置30min，傾去上層尿液，保留下層有沉淀物的行離心沉淀，傾去上層尿液，吸取沉淀物置于載玻片上，加檢測(cè)原理A.1消化道寄生蟲檢測(cè)原理A.1.1直接涂片法：動(dòng)物糞便中的蠕蟲卵及其幼蟲、球蟲卵囊、結(jié)腸小袋纖毛蟲滋養(yǎng)體及其包囊、阿米巴滋養(yǎng)體以及活動(dòng)的鞭毛蟲等，可用糞便涂片，在顯微鏡下直蟲體細(xì)胞質(zhì)呈淡黃色，核較透明，蟲體內(nèi)含有的肝糖呈暗褐色，可A.1.3飽和鹽水漂浮法：動(dòng)物糞便中的線蟲卵、絳蟲卵和球蟲卵囊等比重小于飽和鹽水的寄生蟲病原體，可用飽和鹽水漂浮，將較多糞便中的病原體集中漂浮于液面，以提高A.1.5蟲卵計(jì)數(shù)：按照一定比例，將糞便跟配制好的溶液充分混勻成混懸液，在顯微鏡下計(jì)數(shù)一定體積混懸液中的蟲卵總數(shù)，再經(jīng)換算求出每克糞便中的蟲卵數(shù)A.1.6蟲體檢查：體形較大的消化道寄生蟲，如蛔蟲、蟯蟲、絳蟲節(jié)片等蟲體可直接用肉眼觀察