T-SVEFA 02011-2024 蔬菜中啶蟲(chóng)脒等7種農(nóng)藥殘留的膠體金免疫層析法檢測(cè)規(guī)范

T/SVEFA02011-2024ICS67.050CCSX04T/SVEFA02011-2024蔬菜中啶蟲(chóng)脒等7種農(nóng)藥殘留的膠體金免疫層析法檢測(cè)規(guī)范Standardforthedeterminationof7pesticideresiduessuchasacetcolloidalgoldimmunochrT/SVEFA02011-2024前言 2 32規(guī)范性引用文件 33術(shù)語(yǔ)和定義 34檢測(cè)原理 35試劑與材料 36儀器和測(cè)試條件 47分析步驟 58結(jié)果判定 59性能指標(biāo) 6 81T/SVEFA02011-2024前言本文件按照GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任。本文件由上海市農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣服務(wù)中心提出。本文件由上海蔬菜食用菌行業(yè)協(xié)會(huì)歸口并組織實(shí)施。本文件起草單位：上海市農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣服務(wù)中心、浙江大學(xué)、上海瑞鑫科技儀器有限公司、上海市青浦區(qū)農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全中心、松江區(qū)農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣中心、上海蔬菜食用菌行業(yè)協(xié)會(huì)。首批承諾執(zhí)行單位：閔行區(qū)農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全中心、松江區(qū)新浜鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)農(nóng)村服務(wù)中心、松江區(qū)泖港鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)農(nóng)村服務(wù)中心、金山區(qū)呂巷鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)農(nóng)村服務(wù)中心、浦東區(qū)唐鎮(zhèn)經(jīng)濟(jì)發(fā)展服務(wù)中心、青浦區(qū)練塘鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)農(nóng)村服務(wù)中心。本文件主要起草人：占繡萍、李建勇、郭逸蓉、朱衛(wèi)芳、張東鶴、顧芹芹、王齊旭、高宇、孔令娟、張恒鋮、宋佳、袁圣斐、陳旭、張大銘。2T/SVEFA02011-2024本文件所述藥品、試劑、檢測(cè)卡信息及操作步驟是為給文件使用者提供方便，在使用本文件時(shí)不做限定，檢出陽(yáng)性樣品時(shí)，可根據(jù)檢測(cè)卡說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。文件使用者應(yīng)使用經(jīng)過(guò)驗(yàn)證的滿足本文件規(guī)定的各項(xiàng)性能指標(biāo)的試劑、試劑盒，并根據(jù)膠體金檢測(cè)卡使用說(shuō)明書(shū)進(jìn)行保存。本文件參比實(shí)驗(yàn)室儀器標(biāo)準(zhǔn)為《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)植物源性食品中331種農(nóng)藥及其代謝物殘留量的測(cè)定液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法》（GB23200.121）、《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)水果和蔬菜中500種農(nóng)藥及相關(guān)化學(xué)品殘留量的測(cè)定氣相色譜-質(zhì)譜法》（GB23200.8當(dāng)結(jié)果陽(yáng)性時(shí)，可采用儀器方法進(jìn)行確證。3T/SVEFA02011-2024蔬菜中啶蟲(chóng)脒等7種農(nóng)藥殘留的快速檢測(cè)膠體金免疫層析法本文件規(guī)定了蔬菜中啶蟲(chóng)脒、吡蟲(chóng)啉、噻蟲(chóng)嗪、多菌靈、百菌清、烯酰嗎啉、氯蟲(chóng)苯甲酰胺等7種農(nóng)藥殘留的膠體金免疫層析快速檢測(cè)方法。本文件適用于蔬菜中啶蟲(chóng)脒等7種農(nóng)藥的快速定性測(cè)定。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB2763食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中農(nóng)藥最大殘留限量GB2763.1食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中2,4-滴丁酸鈉鹽等112種農(nóng)藥最大殘留限量GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法3術(shù)語(yǔ)和定義膠體金：又稱金溶膠，是金鹽被還原成金單質(zhì)后形成的穩(wěn)定、均勻、呈單一分散狀態(tài)懸浮在液體中的金顆粒懸浮液。金溶膠顆粒由一個(gè)金原子及包圍在外的雙離子層構(gòu)成。4檢測(cè)原理采用競(jìng)爭(zhēng)型免疫反應(yīng)原理，樣品中目標(biāo)農(nóng)藥經(jīng)提取后，與膠體金標(biāo)記的特異性抗體相結(jié)合，抑制抗體和檢測(cè)線（T線）上抗原的結(jié)合，從而導(dǎo)致T線顏色變化。通過(guò)目視（或借助膠體金讀數(shù)儀）識(shí)別并比較試紙檢測(cè)區(qū)域T線與控制線（C線）顏色深淺，從而判定樣品中的農(nóng)藥殘留情況。5試劑與材料除另有規(guī)定外，本方法使用試劑均為分析純，水為GB/T6682規(guī)定的二級(jí)水。5.1.1磷酸二氫鉀（KH2PO4）。5.1.2磷酸氫二鈉（Na2HPO4）。4T/SVEFA02011-20245.1.3氯化鈉（NaCl）。5.1.4氯化鉀（KCl）。5.1.5氫氧化鈉（NaOH）。5.1.6甲醇（CH3OH，色譜純）。5.1.7磷酸鹽緩沖液（PBS，0.01mol/L分別稱取磷酸二氫鉀（5.1.1）0.27g，磷酸氫二鈉（5.1.2）1.14g，氯化鈉（5.1.3）8.0g，氯化鉀（5.1.4）0.2g，用水溶解后定容至1L，用氫氧化鈉（5.1.5）溶液pH值調(diào)至7.4，現(xiàn)配現(xiàn)用。5.1.7通用提取液：分別量取甲醇（5.1.6）200mL和磷酸鹽緩沖液（5.1.7）800mL混合均勻。5.2參考物質(zhì)啶蟲(chóng)脒等7種農(nóng)藥參考物質(zhì)的中文名稱、英文名稱、CAS號(hào)、分子式、相對(duì)分子質(zhì)量見(jiàn)附錄A1。5.3標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制5.3.1農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（1000μg/mL分別準(zhǔn)確稱取目標(biāo)農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品10mg（精確到0.1mg用甲醇（5.1.5）完全溶解并定容至10mL，配制成農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，-18℃條件下避光、密閉保存，有效期十二個(gè)月。5.3.2農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)中間液（100μg/mL準(zhǔn)確移取7種農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（5.3.1）各1mL，分別置于10mL容量瓶中，用甲醇（5.1.5）定容，搖勻，分別配制成濃度為100μg/mL的7種農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)中間液，-18℃條件下避光、密閉保存，有效期三個(gè)月。5.3.3農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)工作液（1μg/mL準(zhǔn)確移取農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)中間液（5.3.2）各1mL，分別置于100mL容量瓶中，用緩沖溶液（5.1.6）定容，搖勻，分別配制成濃度為1μg/mL的7種農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)工作液，現(xiàn)用現(xiàn)配。5.3.4標(biāo)準(zhǔn)溶液為外部獲取時(shí)，管理及使用應(yīng)符合相關(guān)規(guī)定。5.4材料5.4.1固化有膠體金免疫層析試劑條的紙片（速測(cè)卡）。5.4.2不銹鋼研磨珠（可選）。6儀器和測(cè)試條件6.1電子天平：感量為0.01g和0.1mg（選用）。6.2pH計(jì)。6.3移液器：最大量程為100μL、1000μL、10mL。5T/SVEFA02011-20246.4渦旋儀（可選）。6.5超聲儀（可選）。6.6食品加工器（可選）。6.7膠體金讀數(shù)儀（可選）。6.8環(huán)境條件：溫度為15℃~35℃,濕度≤80%。6.9測(cè)試要求：請(qǐng)按照操作步驟進(jìn)行測(cè)試，盡量不要觸摸速測(cè)卡中央的白色膜面，檢測(cè)時(shí)避免陽(yáng)光直射。6.10注意事項(xiàng)：本速測(cè)卡為一次性產(chǎn)品，請(qǐng)勿重復(fù)使用。6.11儲(chǔ)存條件：速測(cè)卡儲(chǔ)存于4℃~30℃陰涼避光干燥環(huán)境中。6.12速測(cè)卡的有效期：十二個(gè)月。7分析步驟7.1前處理方法7.1.1樣品制備：蔬菜樣品取樣部位按照GB2763的規(guī)定執(zhí)行，樣品切碎后混勻，按四分法縮分后直接裝入樣品袋或經(jīng)食品加工器攪碎勻漿后備用，樣品量不少于100g。7.1.2提取方法：稱取已制備的蔬菜樣品2.0g（精確到0.01g）于15mL離心管中，加入10mL通用提取液（5.1.7并添加5～8粒研磨珠，振蕩提取1min，或超聲、渦旋提取1min。7.1.3靜置：樣品提取完成后靜置10min，取上清液待測(cè)。7.2上樣測(cè)定7.2.1加樣液：將速測(cè)卡盒恢復(fù)至室溫，打開(kāi)包裝后將7種農(nóng)藥速測(cè)卡平放，用滴管吸取待測(cè)液，每種農(nóng)藥速測(cè)卡分別滴加3～4滴（100～120μL）于加樣孔中，加樣在15s～30s內(nèi)完成。7.2.2反應(yīng)計(jì)時(shí)：液體流動(dòng)時(shí)開(kāi)始計(jì)時(shí)，反應(yīng)5min，根據(jù)示意圖判定結(jié)果。7.3質(zhì)量控制：每批樣品應(yīng)同時(shí)進(jìn)行空白和加標(biāo)質(zhì)控實(shí)驗(yàn)，驗(yàn)證方法和速測(cè)卡的準(zhǔn)確性，降低假陰性和假陽(yáng)性出現(xiàn)的概率?？瞻讟悠窇?yīng)經(jīng)參比方法檢測(cè)且未檢出待測(cè)的農(nóng)藥。8結(jié)果判定8.1判定原則采用目視法對(duì)結(jié)果進(jìn)行判讀，通過(guò)對(duì)比控制線（C線）和檢測(cè)線（T線）的顏色深淺進(jìn)行結(jié)果判定。目視判定示意圖如圖1所示。有條件時(shí)也可使用膠體金讀數(shù)儀判讀，讀數(shù)儀的具體操作與判讀原則參照讀數(shù)儀的使用說(shuō)明書(shū)。6T/SVEFA02011-2024陰性T線顯色比C線顯色深或顯色一致，均表明樣品中不含待測(cè)農(nóng)藥或其殘留低于方法檢出限。陽(yáng)性T線顯色比C線顯色淺或T線不顯色，均表明樣品中待測(cè)農(nóng)藥殘留等于或高于方法檢出限。無(wú)效：未出現(xiàn)C線，表明不正確的操作過(guò)程或速測(cè)卡已失效。8.2質(zhì)量控制要求空白試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果應(yīng)為陰性，加標(biāo)質(zhì)控試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果應(yīng)為陽(yáng)性。否則表示不滿足質(zhì)控試驗(yàn)要求，此批樣品結(jié)果無(wú)效。9性能指標(biāo)9.1檢出限速測(cè)卡對(duì)啶蟲(chóng)脒等7種農(nóng)藥的檢出限見(jiàn)表1。表1啶蟲(chóng)脒等7種農(nóng)藥的檢出限農(nóng)藥名稱檢出限（mg/kg）農(nóng)藥名稱檢出限（mg/kg）農(nóng)藥名稱檢出限（mg/kg）啶蟲(chóng)脒0.05吡蟲(chóng)啉0.05噻蟲(chóng)嗪0.01多菌靈0.5烯酰嗎啉1百菌清0.1氯蟲(chóng)苯甲酰胺19.2特異性：≥95%。9.3靈敏度：≥95%。7T/SVEFA02011-20249.4假陰性率：≤5%。9.5假陽(yáng)性率：≤5%。（注：性能指標(biāo)計(jì)算方法參見(jiàn)附錄A2快速檢測(cè)方法性能指標(biāo)計(jì)算表。）8T/SVEFA02011-2024資料性附錄附錄A1.參考物質(zhì)中文名稱、英文名稱、CAS號(hào)、分子式、相對(duì)分子質(zhì)量1C9H10ClN5O22AcetamipridC10H11ClN43C8H10ClN5O3S4C9H9N3O25C8Cl4N26C21H22ClNO47C18H14BrCl2N5O2定性方法各個(gè)性能指標(biāo)計(jì)算方法見(jiàn)表A2。表A2.定性方法性能指標(biāo)計(jì)算表樣品情況a檢測(cè)結(jié)果b總數(shù)N11N12N1.=N11+N12N21N22N2.=N21+N22總數(shù)N.1=N11+N21N.2=N12+N22N=N1.+N2.或N.1+N.2顯著性差異(χ2）χ2=（|N12-N21|-1）2/（N12+N21自由度（df）=1靈敏度（p+，%）p+=N11/N1.特異性（p-，%）p-=N22/N2.假陰性率（pf-，%）pf-=N12/N1.=100-靈敏度假陽(yáng)性率（pf+，%）pf+=N21/N2