生物化學(xué) Chapter 2 氨基酸

Chapter2

氨基酸（aminoacid）

C、H、O、N

等

地球生命的物質(zhì)基礎(chǔ)是蛋白質(zhì)和核酸氨基酸是蛋白質(zhì)的構(gòu)件分子成千上萬的不同蛋白質(zhì)實際上就是氨基酸的種類、數(shù)目及排列順序不同。氨基酸是地球生命多樣性的基礎(chǔ)！提綱蛋白質(zhì)水解氨基酸的結(jié)構(gòu)通式、特征與命名氨基酸分類氨基酸的重要理化性質(zhì)氨基酸的分析分離技術(shù)內(nèi)容提要、習(xí)題一、蛋白質(zhì)水解氨基酸是蛋白質(zhì)水解的最終產(chǎn)物；用酸、堿或酶將蛋白質(zhì)徹底水解，可得多種氨基酸的混合物。蛋白質(zhì)（Mr大于104）→蛋白胨（2×103）→多肽（1000-500）→二肽（200）→氨基酸（100）蛋白質(zhì)酸堿水解常用于蛋白質(zhì)的組成分析，而酶水解用于制備蛋白質(zhì)水解產(chǎn)物。從蛋白質(zhì)水解物中分離出來的氨基酸可知，組成蛋白質(zhì)的氨基酸常見的只有20種

。1、酸水解條件：5-10倍的20%的鹽酸煮沸回流16-24小時，或加壓于120℃水解2小時。優(yōu)點：可蒸發(fā)除去鹽酸，水解徹底，終產(chǎn)物為L-α-氨基酸，產(chǎn)物單一，無消旋現(xiàn)象。

缺點：色氨酸破壞，并產(chǎn)生一種黑色的物質(zhì)（腐黑質(zhì)），水解液呈黑色。2、堿水解條件：4mol/LBa(OH)2或6mol/LNaOH煮沸6小時。優(yōu)點：水解徹底，色氨酸不被破壞，水解液清亮。缺點：破壞的氨基酸多,產(chǎn)生D型和L型的消旋混合物，一般很少使用。3、蛋白酶水解條件：蛋白酶如胰蛋白酶、糜蛋白酶，常溫37-40℃，pH值5-8優(yōu)點：氨基酸不被破壞，不發(fā)生消旋現(xiàn)象。缺點：水解不完全，中間產(chǎn)物多。20種氨基酸的發(fā)現(xiàn)年代表天冬酰氨1806Vauquelin天門冬芽甘氨酸1820Braconnot明膠亮氨酸1820Braconnot羊毛、肌肉酪氨酸1849Bopp奶酪絲氨酸1865Cramer蠶絲谷氨酸1866Ritthausen面筋天冬氨酸1868Ritthausen蠶豆苯丙氨酸1881Schultze羽扇豆芽丙氨酸1881Weyl絲心蛋白

賴氨酸1889Drechsel珊瑚精氨酸1895Hedin牛角組氨酸1896Kossel,Hedin奶酪胱氨酸1899Morner牛角纈氨酸1901Fischer奶酪脯氨酸1901Fischer奶酪色氨酸1901Hopkins奶酪異亮氨酸1904Erhlich纖維蛋白甲硫氨酸1922Mueller奶酪蘇氨酸1935McCoyetal

奶酪二、氨基酸的結(jié)構(gòu)通式、特征與命名1、氨基酸的結(jié)構(gòu)

氨基酸（aminoacid

，簡寫aa）,具有D-型和L-型兩種立體異構(gòu)體,目前已知的天然蛋白質(zhì)中氨基酸都為L-型;氨基酸中羧基相鄰的α-碳原子上都有一個氨基，因而稱為α-氨基酸；殘基：肽鏈中每個氨基酸都脫去一個水分子，脫水后的殘余部分叫殘基（residue),因此蛋白質(zhì)肽鏈中的氨基酸統(tǒng)統(tǒng)是殘基形式。α生化：碳原子編號12化學(xué)：碳原子編號L-aminoacidD-aminoacidL型和D型的由來-甘油醛的旋光性

天然氨基酸在結(jié)構(gòu)上的共同特點為：天然氨基酸都為L-型；除脯氨酸（Pro）外，都屬α-氨基酸，Pro為α-亞氨基酸；除甘氨酸（Gly）外,所有氨基酸分子中的α-碳原子都為不對稱碳原子,具有旋光性；為兩性電解質(zhì)；由于R基團(tuán)不同，各種氨基酸在性質(zhì)上的差異很大，如吸收光譜、等電點（pI）、解離常數(shù)（Ka）、顏色反應(yīng)、穩(wěn)定性、對金屬的絡(luò)合能力等。因此，不同氨基酸組成的蛋白質(zhì)，性質(zhì)和功能千差萬別。2、天然氨基酸的結(jié)構(gòu)特征構(gòu)成蛋白質(zhì)的20種氨基酸4、氨基酸的名稱與符號alanine 丙氨酸 Ala Aarginine 精氨酸 Arg Rasparagine 天冬酰氨 AsnAsx Nasparticacid 天冬氨酸 AspAsx Dcystine 半胱氨酸 Cys Cglutarmine 谷氨酰胺 GlnGlx Qglutarmicacid 谷氨酸 GluGlx Eglycine 甘氨酸 Gly Ghistidine 組氨酸 His Hisoleucine 異亮氨酸 Ile Ileucine 亮氨酸 Leu Llysine 賴氨酸 Lys Kmethionine 甲硫氨酸 Met Mphenylalanine 苯丙氨酸 Phe Fproline 脯氨酸 Pro Pserine 絲氨酸 Ser Sthreonine 蘇氨酸 Thr Ttryptophan 色氨酸 Trp Wtyrosine 酪氨酸 Tyr Yvaline 纈氨酸 Val V要求：能倒背不用的字母JUZBOX5、氨基酸命名來源1、甘氨酸glycine：1820年，H.

Braconnot

研究明膠水解時，分離出了甘氨酸，發(fā)現(xiàn)其甜度是蔗糖甜度的80%，稱之為glycine（希臘語glykys，意為甜的）。它是人類發(fā)現(xiàn)的第一個氨基酸，也是最簡單的、非極性的、不具有旋光性的氨基酸。2、纈氨酸Valine：Von

Group

Besanez于1856年從胰臟的浸提液中分離出來的，有人從纈草科中也分離到，英文名稱源于1906年Fisher分析出其結(jié)構(gòu)為2-氨基-3－甲基丁酸，中文名稱源于valerian(纈草）。3、亮氨酸Leucine：H.Braconnot于1820從肌肉與羊毛的酸水解物中得到其結(jié)晶折光度很高，非常閃亮，本身為白色粉末。英文名稱源于希臘語leuco（意思是白的），中文名稱源于其物理性狀。4、脯氨酸Proline：1901年Fischer在白明膠中首先發(fā)現(xiàn)，英文學(xué)名為Pyrrolidone

CarboxylicAcid（吡咯烷酮羧酸），簡化為Proline；中文名稱源于它是膠原蛋白重要構(gòu)成成分，“脯”就有肉干、果干之意。5、酪氨酸Tyrosine：德國化學(xué)家首先在乳酪中發(fā)現(xiàn)（Tyro希臘文意思是乳酪），故稱為酪氨酸。6、色氨酸Tryptophan：英國人Frederick

Hopkins

和Syndey

Cole于1901年用胰島素消化酪蛋白時分離得到的。英文名稱來源于Trypsin

(胰島素)和phane（希臘語“出現(xiàn)”),中文名稱源于它在可見光區(qū)顯色。7、組氨酸Histidine：

1896年由德國醫(yī)師艾布瑞契科塞爾(Albrecht

Kossel)

首次分離出來，組蛋白(histone)中含量較高，故而稱為組氨酸。8、絲氨酸Serine:1865年Cramer將絲膠蛋白在硫酸中水解得到，由于這種氮基酸是從絲膠(Sericine)蛋白中分離到，因此命名為“絲氨酸”(Serine)

。9、蘇氨酸Threonine:

Mccoy等于1935年從纖維蛋白切割產(chǎn)物中分離和鑒定出的，1936年Meyer對它的結(jié)構(gòu)進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)與蘇糖（threose）相似，故命名為蘇氨酸。10、天冬氨酸Asparatic

acid：天冬氨酸最早在天冬草(asparagus)中發(fā)現(xiàn)，故而稱為天冬氨酸，后從天門冬(asparagus)汁液、蜀葵根的分離物天冬酰胺中均分離到天冬氨酸，故如此命名。11、蛋氨酸Methionine：卵白蛋白中很多，故而稱為蛋氨酸。

12、谷氨酸Glutamic

acid：1861年，德國的一位教授從小麥的面筋當(dāng)中，第一次提取出味精的組成成分谷氨酸，由于主要從谷蛋白(glutelin)中提取而得，故稱為谷氨酸。

13、精氨酸Arginine：1895年Hedin發(fā)現(xiàn)精氨酸存在于哺乳動物的蛋白質(zhì)中，天然品大量存在于魚精蛋白(protamine)中,故稱為精氨酸。

14、賴氨酸Lysine：1889年Dreehsel從干酪素水解物分離賴氨酸與精氨酸的混合物，命名為Lytatine.后來Fisher從Lytatine將賴氨酸分離出來,并命名為Lysine.

15、胱氨酸cystinol：1810年由Wollaston從膀胱結(jié)石（cystolith）中發(fā)現(xiàn)的，1832年，Berzelius將其命名為胱氨酸。16、半胱氨酸Cysteine:

化學(xué)結(jié)構(gòu)為胱氨酸的一半，故名為半胱氨酸1、側(cè)鏈非極性氨基酸甘氨酸GlyG丙氨酸AlaA纈氨酸ValV亮氨酸LeuL異亮氨酸IleI甲硫氨酸MetM苯丙氨酸PheF色氨酸TrpW脯氨酸ProP三、氨基酸分類2、側(cè)鏈極性但不帶電荷氨基酸絲氨酸SerS蘇氨酸ThrT半胱氨酸CysC酪氨酸TyrY天冬酰胺AspN谷氨酰胺GlnQ半胱氨酸胱氨酸3、側(cè)鏈極性帶電荷的氨基酸帶正電荷的氨基酸：賴氨酸LysK精氨酸ArgA組氨酸His

HH4、側(cè)鏈極性帶電荷的氨基酸帶負(fù)電荷的氨基酸：天冬氨酸AspD谷氨酸GluE5、氨基酸分類總結(jié)A、按R基團(tuán)的化學(xué)結(jié)構(gòu)分中性aa(5種)：G、A、V、L、I

酸性aa及其酰胺（4種）：D、E、N、Q

堿性aa(4種)：K、R、H、P

含羥基或含硫氨基酸（4種）：S、T、C、M

芳香族aa（3種）：F、Y、W

雜環(huán)aa（2種）：H、P

B、按R基團(tuán)的極性分非極性aa（8種）：A、V、L、I、F、W、M、P極性不帶電荷aa（7種）：S、T、Y、N、Q、C、G極性帶正電荷aa(3種，K、R、H）極性帶負(fù)電荷aa（2種，D、E）

脂肪族aa4、人體所需的八種必需氨基酸（動物不能合成支鏈碳、芳香環(huán)和甲硫基）

賴氨酸(Lys)、纈氨酸(Val)、蛋氨酸(Met)、亮氨酸(Leu)、異亮氨酸(Ile)、蘇氨酸(Thr)、苯丙氨酸(Phe)、色氨酸(Try)5、生理比較重要的氨基酸嬰兒時期所需:精氨酸(Arg)、組氨酸(His)早產(chǎn)兒所需：色氨酸(Try)、半胱氨酸(Cys)6、幾種重要的不常見氨基酸

在少數(shù)蛋白質(zhì)中分離出一些不常見的氨基酸，這些氨基酸都是由相應(yīng)的基本氨基酸衍生而來的。其中重要的有4-羥基脯氨酸、5-羥基賴氨酸、N-甲基賴氨酸和3,5-二碘酪氨酸等。7、說明人體不能合成氨基酸，是由于人體染色體沒有編碼這些合成代謝途徑中關(guān)鍵酶的序列，故而即使有前體也沒法合成那些氨基酸。

甲硫氨酸(MET)含中性硫，能對ATP親核進(jìn)攻產(chǎn)生腺苷蛋氨酸；脯氨酸（P）和羥基脯氨酸只有亞氨基，用于抑制膠原蛋白α-螺旋形成，產(chǎn)生無彈性三股繩;唯一含羥基脯氨酸的是膠原蛋白；絲氨酸(S)和蘇氨酸（T）兩種氨基酸均含羥基，生理條件下不解離解，使纖維蛋白具有延展性；精氨酸（R）的胍基具有平面對稱結(jié)構(gòu)，每個鍵具有1/3雙鍵性質(zhì)，易質(zhì)子化形成穩(wěn)定陽離子，有很強(qiáng)的堿性（與氨水相當(dāng)）；組氨酸（H）是唯一PI接近生理pH的氨基酸（7.59），其中的吡咯基團(tuán)是一個質(zhì)子傳遞體系；

四、氨基酸的重要理化性質(zhì)1.一般物理性質(zhì)

常見氨基酸均為無色結(jié)晶,其形狀因構(gòu)型而異溶解性：各種氨基酸在水中的溶解度差別很大，并能溶解于稀酸或稀堿中，但不能溶解于有機(jī)溶劑。通常酒精能把氨基酸從其溶液中沉淀析出。(2)熔點：氨基酸的熔點極高，一般在200℃以上。(3)味感：有的無味、有的為甜、有的味苦，谷氨酸的單鈉鹽有鮮味，是味精主要成分。(4）旋光性：除甘氨酸外，氨基酸都具有旋光性，能使偏振光平面向左或右旋轉(zhuǎn)，左旋者用（-）表示，右旋用（+）表示。(5)光吸收：20種氨基酸在可見光區(qū)都沒有光吸收，但在遠(yuǎn)紫外區(qū)(<220nm)均有光吸收。在近紫外區(qū)(220-300nm)只有酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸有吸收光的能力。

酪氨酸的

max＝275nm，275=1.4x103;苯丙氨酸的max＝257nm，257=2.0x102;色氨酸的max＝280nm，280=5.6x103;分光光度計測定原理（Lanbert-beer定律）

A=lgI。/

I=lgL/T=εCLA—

吸光度（OD,absorbance）ε

—

摩爾吸收系數(shù)（1/cmM）C—

濃度（mol/L）L

—

吸收杯內(nèi)徑（cm）,即光徑長度I?！?/p>

入射光強(qiáng)度I—

透射光強(qiáng)度T—

透光率（tranmittance）例題1:用分光光度計測定蛋白溶液的透射率。已知肌紅蛋白在580nm下的吸收系數(shù)為150001/cmM，蛋白溶液濃度為1mg/ml，經(jīng)歷的光徑長度為1cm，肌紅蛋白的相對分子量為17.8KD，lg6.96=0.84,求多少入射光被吸收?

【解】

已知:ε=150001/cmM,C=1/17800M/L,L=1cm

則:lgI。/I=lg1/T=εCL=15000*(1/17800)*1=0.84

因:lg6.96=0.84

所以:1/T=6.96,T=14.4%

故:85.6%被吸收

2.氨基酸的兩性解離性質(zhì)氨基酸在結(jié)晶形態(tài)或在水溶液中，并不是以游離的羧基或氨基形式存在，而是離解成兼性離子。在兼性離子中，氨基是以質(zhì)子化(-NH3+)形式存在，羧基是以離解狀態(tài)(-COO-)存在。在不同的pH條件下，兼性離子的狀態(tài)也隨之發(fā)生變化凈電荷+10-1

正離子兼性離子(等電點PI)負(fù)離子

pH<pIpH=pIpH>pI

氨基酸既含有氨基，能像堿一樣接受H+;又含有羧基，像酸一樣可電離出H+，所以氨基酸具有酸堿兩性性質(zhì)，是一類兩性電解質(zhì)。

Asanacid（protondonor）：

Asabase（protonacceptor）：3.氨基酸的等電點(isoelectricpoint）

當(dāng)溶液濃度為某一pH值時，氨基酸分子中所含的-NH3+和-COO-數(shù)目正好相等，凈電荷為零,這一pH值即為氨基酸的等電點pI.

在等電點時，氨基酸既不向正極也不向負(fù)極移動，即氨基酸處于兼性離子狀態(tài)。

當(dāng)溶液的pH=pI時，氨基酸主要以兼性離子形式存在，不帶電荷;pH<pI時，氨基酸主要以正離子形式存在，帶正電荷；

pH>pI時，氨基酸主要以負(fù)離子形式存在，帶負(fù)電荷;（例如pH=6.0的混合溶液中,Ala為兼性離子,Lys帶正電荷,Glu帶負(fù)電荷）實驗證明在等電點時，氨基酸主要以兼性離子形式存在，但也有少量數(shù)量相等的正、負(fù)離子形式，還有極少量的中性分子。

Ka1Ka2

（1）pI的計算側(cè)鏈不含離解基團(tuán)的中性氨基酸，其等電點是它的pKa1和pKa2的算術(shù)平均值。

【推導(dǎo)】Ka1=（[Ao][H+]）/[A+]，Ka2=（[A-][H+]）/[Ao]Ka1

×Ka2=[H+]2[A-]/[A+]

等電點時：[A-]=[A+]，I=[H+]=（Ka1

×Ka2）1/2

故：pI=(Ka1

+Ka2)2側(cè)鏈含有可解離基團(tuán)的氨基酸，其pI值也決定于兼性離子兩邊的pKa值的算術(shù)平均值。酸性氨基酸：pI=(pKa1+pKaR-COO-)/2

=(pKa1+pKa2)/2

堿性氨基酸：pI=(pKa2+pKaR-NH2)/2

=(pKa2+pKa3)/2【解】(1)Gly

pI=5.97，pH<pI,主要存在Ao

、A+(2)AsppI=2.97，pKa2=3.86，pKa2<pH>pI,主要存在Ao

、A-(3)LyspI=9.74,pKa1=2.18,pKa2=8.95,pKa1<pH<pKa2<pI

主要存在A2+、A+

（2）AA溶液pH的計算：

pH=pKa+lg[質(zhì)子受體]/[質(zhì)子供體]

對于中性aa，加酸pKa取pKa1，加堿pKa取pKa2；知道了溶液的pH，即可計算出在任一pH條件下，一種aa中各種離子的比例。

例題2:求pH=5的水溶液中，甘氨酸、天冬氨酸、賴氨酸的主要存在形式;

例題3:向1L1mol/L處于等電點的甘氨酸溶液加入0.3mol的鹽酸，求所得溶液的pH？若0.3molNaOH代替鹽酸，則所得溶液的pH是多少？已知甘氨酸pKa1=2.34，pKa2=9.60

【解】pH=pKa+lg[質(zhì)子受體]/[質(zhì)子供體]

0.3mol/L的鹽酸中，

pH=pKa1+lg[Ro]/[R+]=2.34+lg(1-0.3)/0.3=2.710.3mol/L的NaOH溶液中，

pH=pKa2+lg[R-]/[Ro]=9.60+lg0.3/（1-0.3）=9.234.氨基酸的化學(xué)性質(zhì)

(1)與茚三酮的反應(yīng)氨基酸與水合茚三酮共熱，發(fā)生氧化脫氨反應(yīng)，生成NH3與酮酸；同時，酮酸裂解放出CO2，自身變?yōu)樯僖粋€碳的醛；水合茚三酮變?yōu)檫€原型茚三酮；NH3與水合茚三酮及還原型茚三酮脫水縮合，生成藍(lán)紫色化合物。+NH3+反應(yīng)特點A.反應(yīng)由NH2與COOH共同參與B.茚三酮是強(qiáng)氧化劑C.反應(yīng)非常靈敏，可在570nm測定吸光值D.測定范圍：0.5-50μg/ml

E.Pro、和羥脯氨酸與茚三酮直接生成黃色物質(zhì)（不產(chǎn)生NH3），Asn則生成棕色物。應(yīng)用A.氨基酸定量分析（先用層析法分離）B.氨基酸自動分析儀：用陽離子交換樹脂，將樣品中的氨基酸分離，自動定性定量，記錄結(jié)果。(2)與甲醛反應(yīng)反應(yīng)特點：為α-NH2的反應(yīng)；常溫中性條件，甲醛與α-NH2很快反應(yīng)，生成羥甲基衍生物，釋放氫離子；應(yīng)用：氨基酸定量分析—甲醛滴定法（間接滴定）

A.直接滴定，終點pH過高（12），沒有適當(dāng)指示劑；

B.與甲醛反應(yīng)，滴定終點在9左右，可用酚酞作指示劑；

C.釋放一個氫離子，相當(dāng)于一個氨基（摩爾比1：1）；

D.簡單快速，一般用于測定蛋白質(zhì)的水解速度。氨基酸的酸堿滴定(3)與2,4-二硝基氟苯（DNFB）反應(yīng)

反應(yīng)特點A.為α-NH2的反應(yīng),氨基酸α-NH2的一個H原子可被烴基取代(鹵代烴)；B.在弱堿性條件下，與DNFB發(fā)生芳環(huán)取代，生成二硝基苯氨基酸。應(yīng)用A、鑒定多肽或蛋白質(zhì)的N-末端氨基酸；B、雖然多肽側(cè)鏈上的ε-NH2、酚羥基也能與DNFB反應(yīng)，但其生成物不同，容易與α-DNP氨基酸區(qū)分和分離。Sanger應(yīng)用此法確定了胰島素的一級結(jié)構(gòu)

A、肽分子與DNFB反應(yīng)，得DNP-肽；

B、水解DNP-肽，得DNP-N端氨基酸及其他游離氨基酸；

C、分離DNP-氨基酸，層析法定性分析DNP-氨基酸，得出N端氨基酸的種類、數(shù)目；(4)與異硫氰酸苯酯（PITC）的反應(yīng)反應(yīng)特點

A、用于N末端分析，為α-NH2的反應(yīng)；

B、肽鏈（N端氨基酸）與PITC偶聯(lián)，生成PTC-肽；C環(huán)化斷裂：最靠近PTC基的肽鍵斷裂，生成PTC-氨基酸和少一殘基的肽鏈，同時PTC-氨基酸環(huán)化生成PTH-氨基酸D、分離PTH-氨基酸，層析法鑒定+

+

（4）Edman降解法（苯異硫氰酸酯氨基酸順序分析法）A、Edman于1950年首先提出，又稱Edman降解法，也是一種N-端分析法；B、特點是能夠不斷重復(fù)循環(huán)，提供逐次減少一個殘基的肽鏈，將肽鏈N-端氨基酸殘基逐一進(jìn)行標(biāo)記和解離，用于aa連續(xù)測定；C、Edman降解法構(gòu)建的多肽順序自動分析儀，Edman降解法的改進(jìn)方法-DNS-Edman降解法A、用DNS(二甲基萘磺酰氯)測定N端氨基酸，原理DNFB法相同；B、水解后的DNS-氨基酸不需分離，可直接用電泳或?qū)游龇ㄨb定；C、DNS有強(qiáng)烈熒光，靈敏度比DNFB法高100倍，比Edman法高幾到十幾倍，可用于微量氨基酸的定量（樣品最低用量為5pmol）；（5）巰基的反應(yīng)與金屬離子的螯合性質(zhì)可用于體內(nèi)解毒，-SH的反應(yīng)可以測定細(xì)胞游離-SH的含量；（6）咪唑基的性質(zhì)組氨酸含有咪唑基，它的pK值為6.0，在生理條件下具有緩沖作用；組氨酸中的咪唑基能夠發(fā)生多種化學(xué)反應(yīng)，可以與ATP發(fā)生磷酰化反應(yīng)，形成磷酸組氨酸，從而使酶活化；組氨酸的咪唑基也能發(fā)生烷基化反應(yīng)，生成烷基咪唑衍生物，并引起酶活性的降低或喪失。1、氨基酸的分析分離常用方法濾紙層析法(filter-paperchromatography，F(xiàn)PC)薄層層析法(thin-layerchromatography，TLC)離子交換層析法(Ion-exchangecolumnchromatography，IEC)氣液色譜法(gas-liquidchromatography，GLC)高效液相色譜法（highperformanceliquidchromatography，HPLC)電泳技術(shù)五、氨基酸的分析分離技術(shù)2、濾紙層析法（FPC)（1）濾紙層析由濾紙（支撐物）、固定相（濾紙吸附的水，S)、動相（用水飽和的有機(jī)溶劑，展層劑L)組成,由于溶劑對各物質(zhì)的分配系數(shù)不同，展開后各物質(zhì)分布在濾紙的不同位置上。展開后用茚三酮將斑點顯色，剪下，定量測定。（2）分配系數(shù)法：在互不相溶的兩相溶劑中，根據(jù)分配系數(shù)不同而分離物質(zhì)的方法稱為分配系數(shù)法（Ka），Ka主取決于物質(zhì)極性；

Ka=溶劑在流動相中的濃度/溶劑在固定相中的濃度（3）遷移率：各物質(zhì)在特定層析系統(tǒng)中圖譜上的位置用遷移率Rf表示，即被分離物質(zhì)在紙上移動的距離與溶劑移動的距離之比。

Rf=原點到層析中心點的距離/原點到層析前沿的距離（4）遷移率影響因素在一定條件下，某種aa的Rf值是一定的，不同aa的Rf值是不同的，因此可利用兩種不同的展層劑進(jìn)行雙相層析。極性氨基酸易溶于固相，非極性氨基酸易溶于動相，所以氨基酸側(cè)鏈極性越大，Rf越??；側(cè)鏈結(jié)構(gòu)相似，分子量越大，Rf越大。對同樣的氨基酸，Rf隨溶劑極性增大而降低。溶劑pH值影響極性基團(tuán)的解離方式，如酸性氨基酸在酸性溶劑中所帶的電荷比在堿性溶劑中少，Rf就比在堿性溶劑為動相的層析系統(tǒng)中大紙層析、薄層層析-鑒定、分離純化2、離子交換層析（IEC)

離子交換劑是一種不溶于水、有機(jī)溶劑、酸堿的高分子化合物；根據(jù)所帶基團(tuán)又可分為陽離子交換劑和陰離子交換劑。陽離子交換劑，分為H型（含-SO3H強(qiáng)酸型、-COOH弱酸型）與Na型（含-SO3Na、-COONa）陰離子交換劑，分為OH型（含-N+(CH3)3OH強(qiáng)堿型、-N+H3OH弱堿型）與Cl型（-含N+(