瀉白散論文主題：HPLC;祛痰作用;抗炎作用;譜效關(guān)系

1瀉白散，來源于《小兒藥證直訣》,其具有清瀉肺熱、平喘止咳的功用，本研究主旨在探討瀉白散的譜效關(guān)系，確定其有效成分及部位。1、建立了瀉白散高效液相指紋圖譜分析方法，標定了色譜圖中的12個峰，并對其中11個峰進行了歸屬。結(jié)果表明11個色譜峰中，1、2、3、4、5、10號峰為桑白皮的峰，6、7、8、9、11號峰為甘草的峰，色譜圖中沒有歸屬到地骨皮的相關(guān)峰。同時，確定了樣品的貯存方式以保證樣品的穩(wěn)定性，試驗結(jié)果表明該樣品不能以溶液的形式貯存，而應該以粉末的形式貯存。以溶液方式貯存，樣品在6h內(nèi)迅速新生成了一個峰，并且記錄其11個峰的峰面積，其RSD值最大可到49.1%;以粉末形式貯存，樣品在72h內(nèi)穩(wěn)定，RSD值小于5%,因此決定采用以粉末形式貯存，實驗時即溶即用。2、采用相關(guān)分析和回歸分析對瀉白散的譜效關(guān)系進行了研究。本文采用正交試驗設(shè)計，共得9個處方。首先分別采用小鼠抗炎(二甲苯致小鼠耳腫脹法)和小鼠祛痰(小鼠氣管酚紅法)對其進行祛痰和抗炎的藥效實驗，同時進行HPLC圖譜研究，將所得藥理數(shù)據(jù)和各色譜峰面積相關(guān)聯(lián)，探討復方中藥瀉白散的譜效關(guān)系。相關(guān)性分析結(jié)果表明在12個色譜峰中有5個與藥理數(shù)據(jù)密切相關(guān)的色譜峰與祛痰和抗炎作用呈正相關(guān)，其均來自于桑白皮。回歸分析結(jié)果表明在12個色譜峰中有8個與藥理數(shù)據(jù)密切相關(guān)的色譜峰被引入回歸方程。它們依次為2、5、6、7、8、9、10、12號峰所代表的化學成分。其中2、5、10號峰來自于桑白皮，6、7、8、9號峰來自于甘草。綜合回歸分析和相關(guān)性分析結(jié)果，確定與瀉白散祛痰和抗炎作用密切相關(guān)的為2號峰和5號峰所代表的化學成分，其均來自于桑白皮。通過對其在紫外190-380nm下掃描可得其在290nm和325nm處有最大紫外吸收，通過對比文獻，判定其為二苯乙烯苷類成分。關(guān)鍵詞：瀉白散；HPLC;祛痰作用；抗炎作用；譜效關(guān)系2omXiaoErZhiZhfclearinglung,antitussiveandantiasthmatic.Inmyexperimentsthechrstoredinformofpowder.Storedinsolution,theh.andRSDvaluesof11peakswhichrecordedinHPLCweremaximumto49.13%;Thechromatographicpharmacodynamicsofxie-baipowdercorrelationanalysisandregressioactionandexpectorantactionwerestudiedbytheL?(3?)orthogonaldesign,arrange9combinations,3leversperformanceliquidchromatographswerealsostudiedbysameorthogoofCorrelationanalysisshowwithanti-inflammatoryanderegressionequation,whichwerepeak2,5,6,7,8,9,10,12.Amongofthem,PefromCortexMoriandpeak6,7,8,9,12werefromRadixetRh290nmand325nm.Bycomparingtheliterature,thetwochemica3t4中藥復方制劑是中醫(yī)藥的精髓和主流。中藥復方的功效已為幾千年的歷史和現(xiàn)代臨床療效所肯定。但如何采用現(xiàn)代科學技術(shù)手段來說明中藥作用的本質(zhì)、作用機理、中藥藥性理論等豐富內(nèi)涵，使中藥復方能為國際市場所能接受，目前尚有一段差距。從中醫(yī)的觀點來看，中藥的功效是物質(zhì)群的整體作用結(jié)果，而黃連素和黃連、甘草酸和甘草、人參皂苷和人參是不能等同的，因此對指標成分的控制難以真正控制中藥的藥效，要控制中藥藥效，不能只針對某一、二個化學成分，必須對方劑物質(zhì)整體予以控制?，F(xiàn)代物質(zhì)群指紋圖譜技術(shù)，展現(xiàn)了這種可能性。系統(tǒng)分析中藥復方的化學成分，闡明有效部位或有效成分的種類，建立全面反映其成分的指紋圖譜，將更加有效體現(xiàn)中藥復方成分的整體性和綜合作用，更好地評價中藥復方的質(zhì)量。因此，只有將標示物質(zhì)群特征峰的中藥指紋圖譜與功效結(jié)果相對應起來，將中藥指紋圖譜中化學成分的變化跟中和藥效評價標準提供規(guī)律性的科學依據(jù)，從而建立中藥產(chǎn)品與其療效基本一致的反映產(chǎn)品內(nèi)在質(zhì)量的質(zhì)量標準，真正對我國中醫(yī)藥現(xiàn)代化、國際化起到積極的促進作用。目前對中藥譜效關(guān)系的研究還停留在很初步的階段。傳統(tǒng)中藥名方“瀉白散”出自《小兒藥證直訣》,由桑白皮、地骨皮、甘草三味藥材組成，銼散后，入粳米一撮，水煎服。有瀉肺清熱，止咳平喘之功。瀉白散尚無質(zhì)量控制指標，也并無與復方配伍相關(guān)的化學研究及藥理藥效研究的報道，本文應用中藥指紋圖譜的方法來闡明瀉白散的藥效成分，試圖通過譜效關(guān)系的研究來確定有效部位或有效成分，為進一步進行瀉白散質(zhì)量控制研究奠定基礎(chǔ)。1、瀉白散的HPLC圖譜的研究，并通過組方中單味藥物的HPLC圖譜研究對復方2、采用小鼠酚紅法和小鼠耳腫脹法對瀉白散祛痰作用和抗炎作用進行研究；采用相關(guān)性分析和回歸分析研究瀉白散的譜效關(guān)系，確定有效成分及有效部位。沈陽藥科大學碩士學位論文瀉白散譜效關(guān)系的研究5瀉白散，來源于《小兒藥證直訣》,由桑白皮15g、地骨皮15g、甘草3g三味藥材組成，銼散后，入粳米一撮，水煎服，其具有清瀉肺熱、平喘止咳的功用，主治肺有伏火郁熱之證。肺主西方，屬金，其色應白，“瀉白”,故瀉肺也。而仍云瀉者，有平肺之功”。方中桑白皮主入肺經(jīng)，傾瀉肺熱，平喘止咳，為君藥。地骨皮甘寒入肺，可助君藥瀉肺中伏火，且有養(yǎng)陰之功，君臣相合，清瀉肺火，以復肺氣之肅降。王子接《降雪園古方選注》卷中：“肺氣本辛，以辛瀉之，遂其欲也。遂其欲當謂之補，而仍云瀉者，有平肺之功焉。桑皮、甘草，其氣俱薄，不燥不剛，雖瀉而不傷于嬌臟?！督?jīng)》言：肺苦氣上逆，急食苦以泄之，故復以地骨皮之苦，泄陰火，退虛熱，而平肺氣。使以粳米、甘草，緩桑、骨二皮于上，以清肺定喘?！北痉街攸c是清中有潤、瀉中有補，既不是清透肺中實熱以治其標，也不是滋陰潤肺以治其本，而是清生理特點亦甚吻合。桑白皮為桑科植物桑(MorusalbaL.)的干燥根皮。甘、寒，歸肺經(jīng)，瀉肺平喘，利水消腫，可用于廢熱喘咳，水腫脹滿尿少，面目肌膚浮腫1]。主產(chǎn)于安徽、河南、浙“去肺中水氣，唾血，熱渴，水腫腹臚脹，利水道?！薄端幮哉摗分休d：“治肺氣喘中有水氣及肺火有余者宜之。”南北朝劉宋《雷公炮炙論》認為桑白皮在中藥中有獨特效用，“是它藥不替也”;《中國藥典》載：桑白皮性寒味甘，歸肺經(jīng)，用于肺熱咳喘、水腫脹滿鳥少及面目肌膚浮腫等癥。目前臨床上用于治療水腫、胸膜炎、百日咳、小兒流涎、糖尿病、氣管炎及鼻衄等。地骨皮為茄科植物枸杞LyciumchinenseMill和寧夏枸杞L.barbarumL.的根皮，性6寒，味甘、淡，歸肺、肝、腎經(jīng)，涼血除蒸，清肺降火。用于陰虛潮熱、骨蒸盜汗、肺熱咳嗽、咯血、衄血。分布于我國南北各地。其源于《本經(jīng)》,《本經(jīng)》中載“主五內(nèi)邪它列為上品。陶弘景云“此草最為眾藥之主，經(jīng)方少而不用者，猶如香中有沉香也，國藥中甘草為君，治療七十二種乳石毒，解一千二百余種草木毒，調(diào)和眾藥有功，故有國使之不爭，故熱藥得之緩其熱，寒藥得之緩其寒，寒熱相雜者，用之得其平”。甘草能稱，解百毒的作用。2瀉白散化學成分研究概況2.1桑白皮桑白皮主要含有黃酮類化合物、二苯乙烯類化合物、芳香苯駢呋喃衍生物，香豆素類化合物、N糖類、甾體類等多種成分。黃酮類化合物l2-2]桑酮(kuwanon)A-Z2-7、桑酮醇(kuwanol)A-EL2-8、桑根酮sangenon(A-T)?3、桑根酮醇sangen(A-0)091416、桑根呋喃sanggenofuranA?、芳香苯駢呋喃類化合物桑色呋喃mullberrofuran(A-Z)?,162324等.香豆素類化合物5,7-羥基香豆素(5,7-dihydroxycoumarin)、傘形花內(nèi)酯 (Umbelliferone)、東莨宕素(scopoletin)、skimming、東莨宕內(nèi)酯(6-甲氧基-7-羥基-聚糖[29]。此外還有N糖類27如1-deoxyno甾醇28、3β-[(m-methoxybenzoyloxy)Jurs-12-cn-28-oic-acid29、甾體及萜類如a-香樹7 脂醇、鞣質(zhì)和揮發(fā)油等。地骨皮主要含有有機酸類、二酰胺類、八肽、生物堿類以及酚類等化合物。有機酸類化合物[32-33]亞油酸、亞麻酸、蜂花酸以及肉桂酸等。二酰胺化合物3]地骨皮甲素(KukoamineA)以及枸杞酰胺(Lyciumamide)等。地骨皮甲素有明顯的降壓活性。八肽類化合物35-36]lyciuminA,lyciuminB,lyciumin在于第三個氨基酸是Trp而不是Tyr。它們均有抑制ACE活性和血管緊張肽原酶(renin)活性的作用。生物堿類化合物137-38]甜菜堿等。1990年Ymada等從地骨皮中分離出兩種生物堿，并命名為alkaloidA和alkaloidB,這兩種生物堿具有抑制葡萄糖苷酶，抗腫瘤、增強免疫力和抗病毒等作用。其他生物堿也包括阿托品(atropine)、東莨宕堿(scopolamine)從地骨皮中還分離出柳杉酚、色氨酸衍生糖苷(tryptophanderivativeglycoside)、β-谷甾醇(β-sitosterol)、東莨宕素(scopoletin)甘草中主要有三萜類化合物、黃酮類化合物等。三萜類化合物甘草甜素是甘草根及根莖中所含一種五環(huán)三萜皂苷；甘草次酸(Glycyrrhetinicacid)是甘草甜素的皂苷配基，也是甘草甜素的有效活性成分之一。黃酮類化合物甘草黃酮類物質(zhì)包括了甘草素(Liquiritigenin)、異甘草素(Isoliquirige甘草苷(Liquiritin)、異甘草苷(Neoliquiritin)、新甘草苷(Neoliquiritin)、新異甘草苷 近年來，并未見到對瀉白散復方的化學研究。藥物化學研究內(nèi)容的局限，缺乏對瀉白散復方方藥效物質(zhì)或藥效成分的研究，同時瀉白散各單味藥及復方的質(zhì)量評價標準尚未建立。3.1桑白皮的藥理研究現(xiàn)代研究表明，桑白皮藥理活性比較廣泛，主要是有一定的降血壓、利尿及鎮(zhèn)靜作第一章瀉白散復方配伍的研究概況8桑白皮丙酮提取物能夠使豚鼠腸系毛細血管交叉數(shù)目明顯增加，改善血流狀態(tài)，增加血流速度；在離體條件下，顯著抑制苯腎上腺素引起的主動脈血管環(huán)的收縮，在預加優(yōu)降糖或普萘洛爾孵育下，其對苯腎上腺素引起的主動脈血管環(huán)的收縮作用仍然有舒張作用，并均具有量效關(guān)系，但引起去內(nèi)皮后大鼠胸主動脈環(huán)收縮；桑白皮非丙酮提取物能明顯增加血管內(nèi)NO含量，表明其擴張血管作用是通過促進血管CNOS的合成，增加血管NO含量，引起血管舒張。桑白皮乙醇提取物可以顯著延長大鼠的凝血時間，對大鼠體內(nèi)血栓形成時間以及對凝血酶原時間未見明顯影響。其作用機理可能是桑白皮所含桑根素、氧二氫桑根素 (oxydihydromorusin)及桑酮C能夠抑制血小板環(huán)氧化酶合成血栓素B?的形成。桑酮(G、H)、桑呋喃(C、F、G)、桑根酮(C、D)等成分具有較為顯著的降血壓作用。桑白皮的甲醇提取物對組胺、5-腔色胺，緩激肽和透明質(zhì)酸等誘發(fā)的皮膚浮腫有抑制作用，同時又能抑制炎癥引起的蛋白滲出及白細胞游走，對植物如棉球誘發(fā)的肉芽腫、甲醛及佐劑關(guān)節(jié)炎也有療效。小鼠口服甲醇提取物的水溶性成分，能抑制醋酸誘導的扭體反應，其提取物的水溶性部分和丁醇部分對壓迫刺激有鎮(zhèn)痛作用。桑白皮丙酮提取物高劑量組(3g/kg)對氨水引起的咳嗽有明顯的鎮(zhèn)咳作用，而低劑量(1.5g/kg)組則無明顯的鎮(zhèn)咳作用，但可以顯著性延長咳嗽潛伏期，無論高劑量和低劑量均可顯著性增加小鼠支氣管酚紅排出量，并呈劑量依賴關(guān)系。桑白皮丙酮提取物高劑量組對乙酰膽堿引起的豚鼠痙攣性哮喘有明顯的平喘作用，并指出其遠離可能是通過提高支氣管NO含量，松弛支氣管平滑肌來達到平喘作用。有研究表明，桑白皮60%乙醇提取液的丙酮萃取物通過劑量依賴對抗白三烯D4(LTD4)引起豚鼠氣管水腫(減少氣管組織重量和伊文思藍滲出量)以及LTD4和組胺引起豚鼠氣管痙攣收縮而產(chǎn)生平喘作3.1.4抗癌、抗病毒作用[41]桑根白皮素(morusin)、桑酮(kuwanonA、C、J、L)和桑根酮(sanggenonA、B、C、D)對金葡菌和枯草桿菌，糞鏈球菌，恥垢分支桿菌等有抗菌活性。羥二氫桑根皮沈陽藥科大學碩士學位論文瀉白散譜效關(guān)系的研究9素，chalcomoracin等衍生物對研究發(fā)現(xiàn)，桑根白皮素(morusin)、桑呋喃G、桑酮(kuwanonG、M)和桑根酮 (sanggenonD)均可抑制十四烷酰氟波醇乙酸酯(TPA)與細胞受體結(jié)合。桑酮(KuwanonH)、桑根酮(sanggertonA、D)對促癌因子殺魚菌素的蛋白激酶C有劑量依賴的抑制作用，對促癌因子鳥氨酸脫羧酶(ODC)活性的誘導有抑制作用。一種被稱為MoranA的糖蛋白可能是桑白皮降血糖活性成分，因為MoranA能明顯降桑白皮75%乙醇提取液能明顯抑制豬小腸蔗糖酶活性，從而使葡萄糖生成減少，同地骨皮中的酰胺類物質(zhì)如N-二氫咖啡酰酪氨、N一反咖啡酰酪胺、N一順咖啡酰酪地骨皮具有免疫調(diào)節(jié)作用，在不同的免疫狀態(tài)下具有不同的調(diào)節(jié)作用。其水煎劑對正常小鼠脾細胞產(chǎn)生白細胞介素-2(IL-2)有抑制作用，對環(huán)磷酰胺所致小鼠脾細胞IL-2是增強免疫功能的一條重要途徑。地骨皮的有效成分桂皮酸具有升高白細胞的作用，同時對受輻射損傷的白細胞減少、血小板減少都有明顯的提高作用地骨皮中所含的環(huán)戊烷并吡咯烷型生物堿是一中葡萄糖苷抑制劑，可用作免疫調(diào)節(jié)劑來殺死病毒和抑制腫瘤。藥理研究表明，地骨皮不僅能降低小鼠葡萄糖和腎上腺素性高血糖值，而且對四氧嘧啶(alloxan,ALX)致實驗性糖尿病小鼠的血糖也有降低作用，作用與苯乙雙胍降糖效果相似，并有一定量效關(guān)系及時間依賴性，時間越長或劑量越高，其作用越顯著。地骨皮解熱有效成分主要為甜菜堿。研究證明，地骨皮和枸杞對皮下注射角叉菜膠所致的大白鼠體溫升高均有明顯控制作用，解熱作用較強，藥效持久，強度可與解熱鎮(zhèn)通過扭體法、熱板法和齒髓致痛法等動物實驗模型表明地骨皮可明顯抑制小鼠扭體反應次數(shù)，提高小鼠熱致痛及家兔電刺激致痛痛閾值。從而表明其具有鎮(zhèn)痛作用。3.2.6降壓作用射、肌肉注射或灌胃均有明顯的降壓作用。其降壓作用的實現(xiàn)可能與地骨皮中含有眾多抑制血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(ACE)的成分有關(guān)。3.2.7抗生育作用5]地骨皮注射劑能顯著的興奮未孕大鼠與小鼠的離體子宮，可加強其收縮活動，而宮縮是孕娠終止的一個方面，由此可看出地骨皮有抗生育的潛在作用。殷軍S21發(fā)現(xiàn)，地骨皮極性成分處于在水、30%醇層時對成骨樣細胞UMR106的增殖有明顯促進作用，尤其實在水層中呈明顯量效關(guān)系，當生藥濃度為200×102mg/mL時，平均增殖率為187%,作用最強。由此可知其內(nèi)含有直接刺激成骨樣細胞增殖的成分。還有研究表明地骨皮里含有褪黑激素(MT),可通過改變生物節(jié)律來有效地促進生甘草甜素及甘草次酸等對健康人及多種動物都有促進鈉水潴留及鉀的排泄增加，長期應用可出現(xiàn)水腫及高血壓等癥狀。小劑量甘草素具有抗黃疸作用和免疫抑制作用，糖皮質(zhì)激素樣作用，大劑量時糖皮質(zhì)激素樣作用不明顯，只呈現(xiàn)鹽皮質(zhì)激素樣作用。甘草能提高機體的內(nèi)分泌調(diào)節(jié)能力，起到扶正固本的治療作用。3.3.2對消化系統(tǒng)的作用甘草次酸和總黃銅(FM100),有抑制胃酸分泌的作用，并可促進潰瘍的愈合。臨床應用甘草粉、甘草浸膏、甘草流浸膏、甘草次酸和FM100治療胃潰瘍均有較好的療效作用。甘草次酸藥(生胃酮)被西歐列為對上消化道潰瘍的治療藥物。其抗?jié)冏饔门c促進纖維細胞合成纖維及基質(zhì)有關(guān)。FM100是甘草有效的解痙成分，甘草煎劑、甘草流浸膏、FM100及甘草素、異甘草素對離體腸管有明顯的抑制作用。其中以黃酮中類成分 沈陽藥科大學碩士學位論文瀉白散譜效關(guān)系的研究的異甘草素作用最強?？寡壮煞譃楦什菟?、甘草次酸及甘草黃酮類成分，具有糖皮質(zhì)激素樣作用，保太松或氫化可的松樣的抗氧作用。實驗研究表明，甘草酸對大鼠腹腔巨噬細胞有選擇作用，甘草能抑制PGE2作用及減少內(nèi)源性PGE2的產(chǎn)生，并能明顯降低酵母糖及PGE2引起的cAMP升高，并可減少由酵母糖刺激巨噬細胞釋放的PGE2,。甘草次酸對大鼠棉球肉芽腫，甲醛性腳腫均有抑制作用，其抗炎效價為可的松或氫化可的松的1/10。甘草黃酮有抑制小鼠角叉菜膠腫和抑制敏感細胞釋放化學介質(zhì)的作用。甘草酸類化合物通過對多種病毒顆粒的直接作用和誘生干擾素，增強天然殺傷細胞和巨噬細胞的活性等活化宿主免疫功能的間接作用，而發(fā)揮廣譜的抗病毒作用。甘草酸能抑制體外HIV的增殖作用，給艾滋病毒患者連續(xù)注射甘草甜素1個月，可使部分患者血清中病毒抗原濃度降至未能測出的水平。甘草甜素能抑制肝中單純皰疹I(lǐng)型病毒糖蛋白的合成，從而抑制病毒的復制。甘草多糖具有明顯的抗水泡病毒、單純皰疹I(lǐng)型病毒和牛痘病毒的活性。甘草次酸還具有干擾素誘導作用。甘草酸胺能提高小鼠NK細胞甘草的醇提物及甘草酸鈉在體外對金黃色葡萄球菌、結(jié)核桿菌、大腸桿菌、阿米巴原蟲均有抑制作用。3.3.6抗腫瘤作用實驗研究表明β-甘草次酸較α-異構(gòu)體更有效的抑制強致癌物質(zhì)(苯并芘，黃曲霉素等)的致癌作用。甘草甜素和甘草次酸均有對人學中干擾誘導作用能力，生成γ一干擾素，能防止化學致癌物質(zhì)氨基偶氮苯引起的肝損害，還可預防肝癌的發(fā)生和由化學物質(zhì)引起的肝病變。甘草次酸及其衍生物3-0-18-α一甘草次酸對骨髓瘤有抑制作用，對小鼠移植性腫瘤也有良好的抑制作用。實驗研究表明，甘草能增強細胞的解毒作用和抵抗力，也有抗白血病的作用。甘草甜素能抑制組胺釋解劑48/80引起的肥大細胞脫顆粒反應，從而阻止了過敏介質(zhì)的釋放，還能抑制被動皮膚過敏反映，并能拮抗組胺、乙酰膽堿及過敏慢性反應物質(zhì) (SRS-A)對兔離體回腸和豚鼠離體氣管的收縮作用。甘草提取物LX對小鼠過敏具有保護作用，并可明顯降低青霉噻唑致敏豚鼠的休克發(fā)生率和死亡率。甘草多糖具有激活小鼠脾臟淋巴細胞增殖效應，是一種很有希望得免疫調(diào)節(jié)劑。甘草酸給小鼠腹腔注射，能使抗體產(chǎn)生顯著增加；甘草多糖有激活小鼠淋巴細胞增殖作用。3.3.8解毒作用甘草流浸膏及甘草甜素對某些藥物中毒、食物中毒、細菌毒素、農(nóng)藥中毒、體內(nèi)代謝產(chǎn)物中毒都有一定的解毒作用。解毒機理為甘草甜素對毒物有吸收作用，甘草酸水解產(chǎn)生1個分子的甘草次酸和2個分子葡糖糖醛酸，而葡萄糖醛酸具有解毒作用，以及甘草甜素有腎上腺皮質(zhì)激素樣作用。甘草流浸膏及甘草酸對水合氯醛、士的寧、烏拉坦、可卡因、苯砷、升汞等毒性有較明顯的解毒作用；對印防己毒素、咖啡因、乙酰膽堿、毛果云香堿、煙堿、巴比妥等解毒作用次之；對阿托品、索佛拿、毒扁豆堿、嗎啡、銻劑則無效；對腎上腺素及麻黃堿反而有輕度增加其毒性的作用。甘草酸對河豚毒、蛇毒有解毒作用；還能解除白喉毒素、破傷風毒素的致死作用。甘草制劑配合喜樹堿、農(nóng)吉利堿治療腫瘤可降低毒性并有增加療效作用。甘草酸銨與喜樹堿和環(huán)磷酰胺合用，可增加療效，并降低喜樹堿的毒性；甘草酸鈣對鏈霉素具有明顯的解毒作用。甘草酸及甘草次酸還能抑制四氯化碳生成游離基及過氧化脂質(zhì)。3.3.9鎮(zhèn)咳祛痰作用甘草黃酮、甘草次酸及其衍生物有鎮(zhèn)咳作用，其鎮(zhèn)咳作用是通過神經(jīng)中樞產(chǎn)生的，甘草次酸膽堿鹽是鎮(zhèn)咳作用最強的成分。甘草次酸氫化琥珀酸雙膽鹽的鎮(zhèn)咳作用與可待因接近。甘草能促進咽喉支氣管的腺體分泌，具有祛痰作用。3.3.10降脂作用及抗動脈粥樣硬化作用甘草甜素能促進膽固醇含量降低、磷脂質(zhì)明顯下降，中性脂肪β-脂蛋白、游離脂肪酸亦有下降。甘草甜素可抑制機體和血管壁的炎癥反應，可防止動脈粥樣硬化的發(fā)生及發(fā)展。 甘草酸有明顯的降脂作用，能阻止大動脈及冠狀動脈粥樣硬化的發(fā)展，如甘草單胺 (MAG)對家兔和大鼠實驗性動脈粥樣硬化有明顯的降低血膽固醇、β-脂蛋白即三酸甘油脂作用；甘草酸鹽有抑制磷脂酶A?活性作用，也可以抑制血小板的凝集作用。3.3.11抗腦缺血作用甘草酸預先給藥20mg/mg,并連續(xù)給藥4mg/mg,1天2次，能明顯提高再灌注大犬3.3.12抗利尿作用甘草酸對大鼠有抗利尿作用，鈉排除量減少，鉀排除量也輕度減少；甘草增加腎小管對鈉和氯的重吸收，而呈現(xiàn)利尿作用，其作用方式與去氧皮質(zhì)酮不同，可能是對其腎小管的直接作用有關(guān)。3.3.13解痙鎮(zhèn)痛作用甘草對眼瞼肌痙攣、腸肌痙攣及血液透析出現(xiàn)的肌痙攣有效；FM100和異甘草素等黃酮類化合物，對動物離體腸管有抑制作用，并能解除乙酰膽堿、氯化鋇、組胺所致的腸痙攣，具有罌粟堿樣特異性的解痙能力。3.3.14其他甘草酸能減輕鏈霉素對前庭神經(jīng)的損害，甘草酸與鏈霉素堿基結(jié)合生成甘草酸鏈霉素后，不影響其體外抗菌活性外，但能減輕鏈霉素對耳前庭神經(jīng)的損害；甘草次酸有提高豚鼠內(nèi)耳聽覺功能的作用。甘草次酸能引起假醛固酮增多，引起高血壓、水腫、低血鉀、低腎素、高醛固酮活性等。甘草能治療老年骨質(zhì)疏松癥。甘草附子湯對老年性腰背痛、胸椎腰椎壓迫性及疲勞性骨折的疼痛，或臥床翻身、排便困難者都有良好的止痛作用。近年來，并未見到對瀉白散復方的藥理學研究。4中藥譜效關(guān)系的研究概況[54中藥成分極其復雜，尤其是復方，測定少數(shù)幾種有效成分或指標成分，不足以保證復方即制劑質(zhì)量[SS]。從中醫(yī)的觀點看，對指標成分的控制，難以真正控制中藥藥效。黃連素與黃連、甘草酸與甘草、人參皂甙與人參等在中醫(yī)看來是兩回事。中藥的“補氣”、的整體作用結(jié)果。這些物質(zhì)群的整體情況，包括其所含的物質(zhì)數(shù)、物質(zhì)量和組成比例差異，都會對藥效發(fā)生影響。所以要控制中藥藥效，不能只針對某一、二個化學成分，必有效部位或有效成分的種類，建立全面反映其成分方成分的整體性和綜合作用，更好地評價中藥復方計量學的理論與方法，進行數(shù)據(jù)解析和特征信息的立多模式多柱色譜、多元檢測、多水平評價的系統(tǒng)制劑的質(zhì)量，更具有實際應用價值。中藥復方指紋的中藥指紋圖譜與功效結(jié)果相對應起來，將中藥指評價標準提供規(guī)律性的科學依據(jù)，從而建立中藥產(chǎn)E質(zhì)量的質(zhì)量標準，真正對我國中醫(yī)藥現(xiàn)代化、國際沈陽藥科大學碩士學位論文瀉白散譜效關(guān)系的研究第二章瀉白散高效液相色譜分析方法的建立島津LC-ATvp高效液相色譜儀，包括：島津LC-Atvp泵系統(tǒng)，SPD-M10Avp二極管陣列檢測器(190～800nm),Class-VP色譜工作站；天平(北京光學儀器廠);ModelC3860超聲振蕩儀(天津開發(fā)區(qū)色譜分析儀器有限公司);微量進樣器(美國HAMILTON公司);ZFQ85A型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海醫(yī)械專機廠);1.2試劑與藥材色譜醇乙腈(天津市康科德科技有限公司);色譜甲醇(天津市康科德科技有限公司)娃哈哈純凈水(杭州娃哈哈集團有限公司);冰醋酸(分析純，沈陽化學試劑廠)桑白皮、地骨皮、甘草藥材購自沈陽成大方圓藥店，經(jīng)劉曉秋教授鑒定為正品。桑白皮為?？浦参锷orusalbaL.的干燥根皮，地骨皮為茄科植物枸杞Lyciumchinense粉碎，過60目篩。色譜柱：AngilentTC-Ci?(150mm×4.6mm,5μm),安捷倫科技公司檢測波長：274nm;分析時間：45min;0001.4樣品制備取處方量藥材，加10倍量水，加熱至沸，并保持微沸30分鐘，過程中隨時補水至足量。紗布過濾后，濾液濃縮至近干，加入95%乙醇，使含醇量達50%,靜置冷藏12h,過濾后回收乙醇并減壓低溫濃縮成浸膏粉末，用時配成10mg/mL濃度，離心并微孔濾膜過濾后進樣。2條件選擇及方法考察2.1提取方式的選擇考慮到古方以水為提取溶媒，同時兼顧液相測定的具體條件，本試驗選擇了3種提取方式：(1)取1/10處方量藥材，用10倍量50%乙醇回流提取30min,回收乙醇并定容至(2)取1/10處方量藥材，加10倍量水，加熱至沸，并保持微沸30分鐘，過程中隨時補水至足量。紗布過濾后，濾液濃縮至近干，加入95%乙醇，使含醇量達50%,靜置冷藏12h,過濾后回收乙醇并定容至25mL,立即進樣。(3)取1/10處方量藥材，加10倍量水，加熱至沸，并保持微沸30分鐘，過程中隨時補水至足量。紗布過濾后，濾液濃縮至近干，加入95%乙醇，使含醇量達50%,靜置冷藏12h,過濾后回收乙醇，濃縮至近干，加入95%乙醇，使含醇量達85%,靜置冷藏12h,過濾后回收乙醇并定容至25mL,立即進樣。試驗結(jié)果表明50%乙醇提取物與水提醇沉相比水溶性成分減少且脂溶性成分干擾較大，因此選擇水提醇沉為提取方法；并且先醇沉至含醇量50%再沉至含醇量85%對樣品的峰數(shù)量及峰面積影響不大，因此選擇醇沉至含醇量50%即可。所以，本實驗選擇(2)法為提取方法。2.2樣品貯存方式的選擇在本實驗過程中，HPLC研究和藥效學研究須為同一份樣品，考慮到藥效學實驗的周期較長，因此樣品需要有較長時間的穩(wěn)定性，因此本文考察了兩種樣品的貯存方式：(1)樣品以水溶液形式貯存。如項2.4.1所述提取樣品，于0、1、2、3、4、5、6h 進樣20μL,記錄色譜圖。如圖2-1、2-2所示，在6個小時內(nèi)，新生成了9號峰。選擇圖2-x所示的11個峰為對象，讀取其峰面積，并計算上述峰的峰面積的RSD值如表2-2所示，結(jié)果顯示峰面積相差較大，樣品水溶液在6h內(nèi)不穩(wěn)定。1234567890(2)樣品以浸膏粉末形式貯存。于0、2、4、8、24、72h稱取樣品浸膏粉末0.1g,用水溶解并定容至25mL,進樣20μL,記錄色譜圖如圖2-3。選取其中11個峰，以相對峰面積為對象，考察其72h內(nèi)的峰面積變化，其RSD值如表2-4所示。實驗結(jié)果表明，以浸膏粉末形式保存，樣品穩(wěn)定性好，所以選擇以浸膏粉末形式保2.3流動相的選擇分別考察了如下流動相：甲醇-0.5%三乙胺水溶液；甲醇-1%冰醋酸水溶液；1%冰醋酸甲醇溶液一水溶液；乙腈-1%冰醋酸水溶液；乙腈-0.5%冰醋酸水溶液；乙腈-0.1%冰醋酸水溶液；實驗結(jié)果表明，乙腈作為有機相能夠達到較好的分離效果，水相中加入冰醋酸能夠改善峰分離，但是與乙腈-水系統(tǒng)并無實質(zhì)改變，且水相中冰醋酸的濃度對分離的影響不大，考慮到酸對色譜柱有損害，因此選擇乙腈-水系統(tǒng)。320nm檢測波長下瀉白散樣品溶液的指紋圖譜，結(jié)果在274nm下圖譜峰形好、信息多，分離效果好，因此選擇274nm波長記錄保留時間和峰面積。2.5色譜柱的選擇本實驗曾選用三種反相C18色譜柱：(1)DiamondC18(200mm×4.6mm,5μm),迪馬公司；(2)KromaisilC18(200mm×4.6mm,5μm),天津開發(fā)區(qū)色譜分析儀器有限公司；(3)AngilentTC-C18(150mm×4.6mm,5μm),安捷倫科技公司。試驗結(jié)果表明，AngilentTC-C18(150mm×4.6mm,5μm)色譜柱的分離較好，保留時間適宜，因此選擇此色譜柱為本實驗檢測色譜柱。2.6進樣量的選擇取同一樣品，分別進樣10μL和20μL,比較色譜圖，實驗結(jié)果表明，進樣量對指紋圖譜的結(jié)果影響不大，但加大進樣量可以減弱梯度洗脫時的基線漂移程度。進樣量為本實驗為了取得較好的分離度，曾選擇了0.6mL/min、0.8mL/min、1.0mL/min,實驗結(jié)果表明0.8mL/min的流速分離效果最好，因此選擇0.8mL/min為本實驗的流速。2.8穩(wěn)定性試驗分別于0、2、4、8、72小時精密稱取1號樣品浸膏0.1g,溶解并定容至25mL,吸取20μL進樣，記錄保留時間(RT)和峰面積(A),結(jié)果保留時間、峰面積的RSD均小于5%,結(jié)果見表2-3、2-4。1234沈陽藥科大學碩士學位論文瀉白散譜效關(guān)系的研究56789Tab.2-4Stabilityofdetermination(powder,peakarea)精密吸取5批1號樣品供試液，按上述色譜條件時間(RT)和峰面積(A)的RSD均小于5%,結(jié)果,分別進樣，記錄色譜圖。見表2-5、2-6。12345678912345123456789實驗表明，該色譜條件穩(wěn)定，能夠作為瀉白散HPLC圖譜的色譜條件。3高效液相色譜圖中峰的歸屬高效液相色譜圖共標定12個峰，圖譜總分析時間為45分鐘。以2.1、2.2所述的樣品制備貯存方式制備各單味藥的樣品，對照各單味藥的色譜圖，對12個峰進行歸屬，如圖2-4所示。結(jié)果表明，1、2、3、4、5、10號峰為桑白皮的峰，6、7、8、9、11號峰為甘草的峰。色譜圖中沒有歸屬到地骨皮的相關(guān)峰。記錄各峰的紫外掃描圖(190-380nm)如圖2-5所示。4小結(jié)與討論(1)由于樣品以溶液形式存在非常不穩(wěn)定，所以通過試驗決定采用粉末形式保存，在進樣前溶解測定。(2)通過試驗建立了高效液相的色譜分析方法。(3)高效液相色譜中共標定了12峰，并對其進行了歸屬，1、2、3、4、5、10號峰為桑白皮的峰，6、7、8、9、11號峰為甘草的峰。色譜圖中沒有歸屬到地骨皮的相關(guān)峰，這可能是因為樣品以水溶液形式存在，多種成分互相作用下，影響了某些成分的穩(wěn)定性。。缺9號峰158526.4835.31Fig.2-1HPLCofsample'ssolution(Oh)Fig.2-2HPLCofsampl沈陽藥科大學碩士學位論文瀉白散譜效關(guān)系的研究Fig.2-3HPLCofsample'spowder(0-7第二章瀉白散高效液相色譜條件的建立Fig.2-4AssignmentofXiebaiPowder'sHPLC(A:Recipe;B:CortexMori;C:Radixet瀉白散譜效關(guān)系的研究沈陽藥科大學碩士學位論文瀉白散譜效關(guān)系的研究152637spectrumofpeaks48ContinuedFig.2-5UVscanningspectrum算機技術(shù)將化學數(shù)據(jù)與藥效學數(shù)據(jù)相關(guān)聯(lián)，得到該復方1藥效學試驗昆明種小白鼠，體重20±2g,子性，由沈陽藥科大學動物實驗中心提供。生理鹽水(自制);二甲苯(分析純，沈陽試劑一廠);酚紅(天津博迪化工有限公司);桑白皮、地骨皮、甘草藥材購自沈陽成大方圓藥店，經(jīng)劉曉秋教授鑒定為正品。桑白皮為?？浦参锷orusalbaL.的干燥根皮，地骨皮為茄科植物枸杞Lyciumchinense粉碎，過60目篩。小鼠灌胃器(自制);6mm打空器(自制);電子分析天平(北京光學儀器廠);微量移液器(美國HAMILTON公司);1ml注射器(常州醫(yī)療器材總廠);紫外可見分光光度計(UV9100,北京瑞利分析儀器有限公司);島津LC-ATvp高效液相色譜儀，包括：島津LC-Atvp泵系統(tǒng)，SPD-M10Avp二極管陣列檢測器(190～800nm),Class-VP色譜工作站；1.2藥理指標的選擇方劑的藥理學研究是揭示中藥方劑組成原則和配伍變化的中藥方法，也是開發(fā)研究新的中藥制劑不可缺少的手段。瀉白散，具有清瀉肺熱、平喘止咳的功用，方中桑白皮主入肺經(jīng)，傾瀉肺熱，平喘止咳，為君藥。地骨皮甘寒入肺，可助君藥瀉肺中伏火，且有養(yǎng)陰之功，君臣相合，清瀉肺火，以復肺氣之肅降。呼吸系統(tǒng)藥物研究主要采用鎮(zhèn)咳、祛痰、平喘等藥理實驗方法，本文選擇了祛痰實驗方法，同時，由于咳嗽普遍伴隨炎癥反應，本文還選擇了抗炎實驗方法對瀉白散進行藥效研究。祛痰實驗常用如下3種方法：(1)氣管酚紅法。常用小鼠或家兔，通過給動物腹腔或靜脈注入一定量的酚紅，可部分的從氣管分泌排除，從動物氣管中排泌酚紅的量，來確以一定時間內(nèi)吸取痰液量的多少，來判斷藥物的排痰效果。(3)氣管纖毛黏液流運動法：常用家鴿、家兔，以墨汁為標記(也可用染料、炭粉、軟木粒等),觀察一定時間內(nèi)墨汁在氣管黏膜表面運動距離的長短，判斷藥物的排痰效果。急性非特異性炎癥模型包括如下3種方法：(1)大鼠足跖腫脹法，實驗常采用的致炎劑有角叉菜膠、酵母、瓊酯、右旋糖酐、甲醛、雞蛋清等致炎劑。此法形成的炎癥模型可靠。(2)鼠耳腫脹法，實驗常采用二甲苯或混合致炎液致炎，本法復制成功率高，適用于新抗炎藥常規(guī)篩選。(3)白細胞游走法，以明膠引起小鼠腹腔中嗜中性白細胞數(shù)升高，觀察藥物的抗炎作用?？紤]到標本兼治、中西醫(yī)結(jié)合等原則，結(jié)合藥效選擇了2個藥理指標：抗炎(小鼠耳腫脹法)、祛痰(小鼠氣管酚紅法)。試驗設(shè)計是試驗過程的依據(jù)，也是試驗研究質(zhì)量的一個重要保證。正交試驗設(shè)計是研究處理多因素試驗的一種科學方法，它利用正交表(Orthogonallayout)安排試驗，沈陽藥科大學碩士學位論文瀉白散譜效關(guān)系的研究齊可比”的特點，“均勻分散”使被挑選的點具有代表性，“整齊可比”使結(jié)果便于分析。瀉白散由桑白皮30g,地骨皮30g,甘草6g組成。選擇處方中3味藥物構(gòu)成3個因試驗，共進行9次試驗。各因素水平見表3-1,試驗安排見表3-2C1623391234567891123312231A:CortexMori;B:Cortex取處方量藥材，加10倍量水，加熱至沸，并保持微足量。紗布過濾后，濾液濃縮至近干，加入95%乙醇，使含醇量達50%,靜置冷藏12h,1.5小鼠的抗炎試驗(二甲苯致小鼠耳腫脹法)選取小鼠，體重20±2g,子性，隨機分組，每組10只，苦味酸標記，累計給藥3天 稱量，計算腫脹度，抗炎抑制率(R),實驗結(jié)果如表3-3所示。 1234567891.6小鼠的祛痰試驗(小鼠氣管酚紅法) 用721型分光光度計在546nm下測定OD值，計算祛痰指數(shù)，實驗結(jié)果如表3-4所示。123456789**—p<0.01(和空白對照組比較)2樣品的制備及高效液相色譜分析采用反相高效液相色譜法對第二章中9個不同配比提取液在色譜系統(tǒng)條件下繪制指紋圖譜，獲得盡可能多的化學信息。樣品制備如3.1.4所述；儀器、試劑及色譜條件第二章1.3所述。對各處方色譜圖進行分析，得到12個色譜峰，依次記為X1~X12,代表個色譜峰的峰面積。將此化學數(shù)據(jù)和表3-3、3-4的藥理數(shù)據(jù)組成原始數(shù)據(jù)矩陣，見表3-5。采用化學統(tǒng)計學和計算機技術(shù)記性數(shù)據(jù)處理，確定該復方中藥的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)。數(shù)據(jù)處理時將抗炎抑制率記為Y,將祛痰指數(shù)記為Y?。Tab.3-5Originalchemicalof9different1234567891234567893瀉白散譜效關(guān)系分析3.1相關(guān)分析第三章瀉白散藥效物質(zhì)基礎(chǔ)的確定相關(guān)分析是研究變量之間密切程度的一種常用統(tǒng)計方法。它包含雙變量相關(guān)分析、偏相關(guān)分析和距離相關(guān)分析。當分析多個事物之間的關(guān)系，而這種關(guān)系又往往是變量之間的數(shù)量關(guān)系時，可以用雙變量相關(guān)分析方法，并做出統(tǒng)計學推斷。利用社會科學軟件包SPSS中的雙變量相關(guān)分析可以輸出變量兩兩間的皮爾遜相關(guān)系數(shù)(PearsonCorrelationCoefficients),肯德爾相關(guān)系數(shù)(KendallCorrelationCoefficients)和斯皮爾曼Window98/NT的雙變量相關(guān)分析方法處理所得Pearson相關(guān)系數(shù)，見表3-6、3-7。CTab.3-7PearsoncorrelC由表3-6、3-7可以看出：與祛痰藥理指標密切相關(guān)的變量有：1、2、3、4、5號峰，均來自于桑白皮，它們與祛痰效應呈正相關(guān)，有增強作用。與抗炎藥理指標密切相關(guān)的變量有：1、2、3、4、5號峰，均來自于桑白皮，它們與抗炎效應呈正相關(guān)，有增強作用。回歸分析(Regression)是研究一個或多個自變量(Independents)與一個因變量 (Dependent)之間是否存在某種線性或非線性關(guān)系的一種統(tǒng)計學分析方法。根據(jù)多元回歸自變量選擇的不同，多元回歸可以有多種不同的計算方法，SPSSforWindows98/NT的多重線性回歸分析中提供了5種建立回歸方程的方法：強迫引入法(Enter)、逐步回歸法(Stepwise)、強迫剔除法(Remove)、后向逐步法(Backward)、前向逐步法(Forward)。沈陽藥科大學碩士學位論文瀉白散譜效關(guān)系的研究利用強迫引入法(Enter)處理所得結(jié)果如表3-8所示。256789采用回歸分析一次分析化學數(shù)據(jù)和上述二項藥理指標的關(guān)系，結(jié)果表明在12個色譜峰中有8個與藥理數(shù)據(jù)密切相關(guān)的色譜峰被引入回歸方程。它們依次為2、5、6、7、8、9、10、12號峰所代表的化學成分。其中2、5、10號峰來自于桑白皮，6、7、8、9號峰來自于甘草。綜合相關(guān)分析和回歸分析結(jié)果，12個色譜峰中的2、5號色譜峰所代表的化學成分(化學成分群)與藥理密切相關(guān)。通過對2號峰和5號峰的紫外掃描圖，如圖3-1所示。2號峰和5號峰所對應化學成分均在290nm和325nm左右有紫外吸收。通過與文獻2對比，判斷其可能為二苯乙烯苷類成分。4小結(jié)與討論(1)通過實驗得出了9組配方的高效液相色譜圖并與相對應的處方進行了祛痰作用和抗(2)相關(guān)性分析結(jié)果表明在12個色譜峰中有5個與藥理數(shù)據(jù)密切相關(guān)的色譜峰與祛痰和抗炎作用呈正相關(guān)，其均來自于桑白皮。(3)回歸分析結(jié)果表明在12個色譜峰中有8個與藥理數(shù)據(jù)密切相關(guān)的色譜峰被引入回歸方程。它們依次為2、5、6、7、8、9、10、12號峰所代表的化學成分。其中2、5、10號峰來自于桑白皮，6、7、8、9號峰來自于甘草。(4)綜合回歸分析和相關(guān)性分析結(jié)果，確定與瀉白散祛痰和抗炎作用密切相關(guān)的為2號峰和5號峰所代表的化學成分，其均來自于桑白皮。通過對其在紫外190-380nm下掃描可得其在290nm和325nm處有最大紫外吸收，通過對比文獻，判定其為二苯乙烯苷類成分。第三章瀉白散藥效物質(zhì)基礎(chǔ)的確定與法，標定了其中12個色譜峰，并對其中11個峰進:號峰為桑白皮的峰，6、7、8、9、11號峰為甘草的關(guān)峰，這可能是在樣品制備的過程中地骨皮成分損〔樣品制備方式所得的成分在紫外下沒有吸收所致；名的穩(wěn)定性。通過試驗決定采用粉末形式保存，在進在6個小時內(nèi)，色譜峰面積迅速發(fā)生變化，并且出舌以粉末形式保存，色譜峰面積在3天內(nèi)保持穩(wěn)定。:多種成分相互作用下，影響了某些成分的穩(wěn)定性。寫白散進行祛痰作用和抗炎作用的研究，實驗表明正炎、祛痰作用，并采用相關(guān)分析和回歸分析對瀉白果表明有5個與色譜峰與祛痰和抗炎作用呈正相關(guān)，乏明有8個與藥理數(shù)據(jù)密切相關(guān)的色譜峰被引入回歸3、10、12號峰所代表的化學成分。其中2、5、10號E自于甘草。綜合回歸分析和相關(guān)性分析結(jié)果，確定勻為2號峰和5號峰所代表的化學成分，其均來自于桑掃描可得其在290nm和325nm處有最大紫外吸收，通關(guān)成分?？?、祛痰、平喘等藥理實驗方法，本文選擇了祛痰炎癥反應，本文還選擇了抗炎實驗方法對瀉白散進對瀉白散譜效關(guān)系的報道，也無對瀉白散血漿移行[苯乙烯苷類成分進行譜效關(guān)系的進一步研究，確定[2]KazuhiroHirakura,ToshioFukai,YoshioHanonand,etal.ANatualDiel-AlderTypeRootBarkofMoursIhou[J].Phytochemistry,1985,24(1):159[3]JunkoIkuta,TohioFukai.ConsituentsofMorusalbaL.cellCultures[J].Chemical&PharmaceutBulletin,1986,34(6):2471-2478.[4]YoshioHano,Kazuhra.CompomentsofRootBarkofMorusIhou[J].PlantaMedica,1984,50(2):127-133.[5]ToshioFukai,YoshioHano.StructuresofaNovelDerivativefromtheCultivateBulletin,1985,33(10):428[6]KazuhiroHirakura,YoshioHano.StrucuresofthreeNewNaturalDiels-AlderPandX,andMulberrofuranJ,fromthPharmaceuticalBulletin,1985,33(3):1088-1096.[7]YoshioHano,HiromiTsubura,StruCultivatedMuberryTree(MorusalbaL.)[J].Heterocycles,1986BarkofaMulberryTree[J].Heterocycles,1989,29(4):807-813.[12]JinYinSun,YoshiMorusmonglicaSchneider[J].Heterocycles,1989,29(1):1[14]Ya-Qinshi,ToshioFukai.CytotoxicFlavonoidswithIsmonlica[J].JournalofNaturalProducts,2001,64(2):181-188.[15]ToshioFukai,Yue-Hupei.ComponentsoftheRootBarkofMorusHeterocycles,1996,43(2):425-436.[16]Shi,Ya-Qin,Fukai,Toshio.PhenolicConstituentsoftheRootBarkofChineseMorusaustrslis[J].NaturalMedicines(Tokyo,Japan),2001,55(3):143-146.[17]YoshioHano,TsuyoshiOkamoto.ComponetsoftheRootBarkofMorusinsignisBur[J].Heterocycles,1993,36(6):1359-1366.[18]YoshioHano,TsuyoshiOkamoto.ComponetsoftheRootBarkofMorusinsignisBur[J]