流式淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)技術(shù)原理PPT課件

1、.,1,淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè),.,2,目錄,1,淋巴細(xì)胞的分類,2,淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)方法,3,淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)原理,4,淋巴細(xì)胞亞群的免疫功能,5,淋巴細(xì)胞亞群的臨床意義,.,3,T淋巴細(xì)胞,細(xì)胞免疫,B淋巴細(xì)胞,體液免疫,NK細(xì)胞,固有免疫,淋巴細(xì)胞的分類,淋巴細(xì)胞占外周血白細(xì)胞總數(shù)的20%-40%,.,4,檢測(cè)方法,采用流式細(xì)胞術(shù)（FCM） 是以流式細(xì)胞儀為檢測(cè)手段的一項(xiàng)能快速、精確的對(duì)單個(gè)細(xì)胞(或生物學(xué)顆粒)的理化特性進(jìn)行多參數(shù)定量分析和分選的技術(shù),.,5,FCM,檢測(cè)對(duì)象：?jiǎn)渭?xì)胞懸液或生物顆粒； 檢測(cè)參數(shù)：多參數(shù)； 檢測(cè)特點(diǎn)：?jiǎn)渭?xì)胞水平分析； 檢測(cè)速度：高速，最高達(dá)上萬(wàn)個(gè)細(xì)胞/秒； 檢測(cè)結(jié)

2、果：精度高、準(zhǔn)確性好； 可對(duì)目標(biāo)細(xì)胞進(jìn)行分選；,.,6,熒光抗體,直接標(biāo)記,第一抗體,熒光二抗,間接標(biāo)記,免疫熒光染色主要有兩種方法。間接標(biāo)記的方法難以進(jìn)行多色標(biāo)記，而且操作復(fù)雜，所以一般首選直接熒光染色,檢測(cè)原理,.,7,常用熒光素,499nm 藍(lán)色熒光（Blue） 500-549nm，綠色熒光（Green） 550-584nm，黃色熒光（Yellow） 585-615nm，橙色熒光（Orange） 616-700nm，紅色熒光（Red） 700nm，遠(yuǎn)紅外熒光（Far-Red）,.,8,常用熒光素,.,9,免疫熒光染色,FCM可檢測(cè)下列細(xì)胞成分： 表面標(biāo)記物 胞漿標(biāo)記物 核內(nèi)標(biāo)記物 可溶性

3、成分,.,10,聯(lián)合CD45的四色方案,第一種是用CD45/CD3/CD4/CD8做四色標(biāo)記，主要可以檢測(cè)T3細(xì)胞、T4細(xì)胞、T8細(xì)胞這三種不同的亞群 CD45-FITC CD4-RD1 CD8-ECD CD3-PC5,.,11,聯(lián)合CD45的四色方案,第二種是用CD45/CD3/CD19/CD16和（或）CD56做第二管的標(biāo)記，用于檢測(cè)T3細(xì)胞、B細(xì)胞和NK細(xì)胞 CD45-FITC CD56-RD1 CD19-ECD CD3-PC5,.,12,檢測(cè)目的,相互協(xié)作共同參與,1,2,3,功能,比例,數(shù)量,.,13,T、B細(xì)胞相互作用,.,14,.,15,主要檢測(cè)項(xiàng)目,淋巴細(xì)胞,總T細(xì)胞,T4細(xì)胞

4、,T8細(xì)胞,NK細(xì)胞,B細(xì)胞,.,16,總T淋巴細(xì)胞,CD3+,T4細(xì)胞,CD3+CD4+CD8-,T8細(xì)胞,CD3+CD8+CD4-,B細(xì)胞,CD3-CD19+,NK細(xì)胞,CD3-CD（16+56）+,淋巴細(xì)胞的免疫標(biāo)志,.,17,總T細(xì)胞增高,提示體內(nèi)的T細(xì)胞免疫功能增強(qiáng) 見(jiàn)于臨床某些自身免疫性疾病（如SLE）、重癥肌無(wú)力、慢性活動(dòng)性肝炎、甲狀腺功能亢進(jìn)、淋巴細(xì)胞性甲狀腺炎、器官移植排斥反應(yīng)、T細(xì)胞性白血病等,.,18,總T細(xì)胞降低,提示體內(nèi)的T細(xì)胞免疫功能減弱 見(jiàn)于某些白血病、應(yīng)用免疫抑制劑藥、放療過(guò)程中、先天性細(xì)胞免疫缺陷、艾滋病、多發(fā)性骨髓瘤、傳染性單核細(xì)胞增多癥，以及過(guò)勞等造成機(jī)體

5、免疫功能處于相對(duì)較低的其他一些情況,.,19,.,20,.,21,T4細(xì)胞增高,提示體內(nèi)存在細(xì)菌等病原微生物感染，主要見(jiàn)于臨床各種細(xì)菌性感染性疾病。 器官移植發(fā)生排斥反應(yīng) 支氣管哮喘 SLE活動(dòng)期 某些免疫增強(qiáng)藥物的有效結(jié)果 注意:晝夜變化（傍晚的峰值可為上午的兩倍）,.,22,T4細(xì)胞降低,提示體內(nèi)存在病毒等病原微生物，主要見(jiàn)于臨床各種病毒感染性疾病，以HIV感染時(shí)減少最為明顯 T4細(xì)胞減少也可見(jiàn)于免疫球蛋白缺乏癥、胸腺發(fā)育不良、嚴(yán)重聯(lián)合免疫缺陷病、嚴(yán)重創(chuàng)傷、大手術(shù)等,.,23,T8細(xì)胞,主要功能：特異性直接殺傷靶細(xì)胞 兩條途徑：一是分泌穿孔素、顆粒酶及淋巴毒素 等直接殺傷靶細(xì)胞 二是通過(guò)F

6、as/FasL途徑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。,.,24,.,25,殺傷特點(diǎn)： 連續(xù)性殺傷 特異性殺傷 MHC限制性,.,26,T8細(xì)胞增高,提示體內(nèi)存在病毒或胞內(nèi)寄生菌等病原微生物感染 主要見(jiàn)于HIV、HBV、CMV、EB等病毒感染 也可見(jiàn)于結(jié)核桿菌感染等,.,27,T8細(xì)胞降低,移植排斥反應(yīng) 可見(jiàn)于免疫球蛋白缺乏癥 胸腺發(fā)育不良 嚴(yán)重聯(lián)合免疫缺陷病 糖尿病等,.,28,T4/T8細(xì)胞比值增高,是T4淋巴細(xì)胞增高或T8淋巴細(xì)胞減少所致 見(jiàn)于某些自身免疫性疾病，如SLE、多發(fā)性硬化、器官移植排斥反應(yīng)、自身免疫性溶血性貧血等,.,29,T4/T8細(xì)胞比值降低,是T4細(xì)胞減少或T8細(xì)胞增高所致 見(jiàn)于艾滋病、再生

7、障礙性貧血、某些白血病、傳染性單核細(xì)胞增多癥、免疫缺陷綜合征、某些病毒感染、惡性腫瘤、結(jié)核病等 一般來(lái)說(shuō)，導(dǎo)致T4/T8比值倒置，以全身性、侵襲和破壞機(jī)體免疫系統(tǒng)的感染引起的倒置變化幅度最大 臨床抗感染治療有效時(shí)，可以觀察T4/T8細(xì)胞比值的逐步恢復(fù),.,30,T4/T8細(xì)胞比值臨床意義,器官移植受者免疫功能監(jiān)測(cè) 個(gè)體化免疫治療療效判斷 受者需要的是一種恰當(dāng)?shù)拿庖咭种?，將免疫功能控制在較低的一個(gè)范圍內(nèi)。 需要經(jīng)常性監(jiān)測(cè)受者的免疫功能，T4/T8細(xì)胞比值是非常好的一個(gè)監(jiān)測(cè)指標(biāo) 當(dāng)受者T4/T8細(xì)胞比值出現(xiàn)小于0.2的情況時(shí)，必須立即停用免疫抑制藥，等待免疫功能的適當(dāng)恢復(fù),.,31,T4/T8細(xì)胞

8、比值與腫瘤,惡性腫瘤患者術(shù)前T4/T8細(xì)胞比值低，手術(shù)后比值恢復(fù)正常 當(dāng)發(fā)生癌轉(zhuǎn)移時(shí),T3、T4細(xì)胞數(shù)明顯減少的同時(shí)T8細(xì)胞數(shù)明顯增多 T4/T8比值明顯降低,提示惡性腫瘤患者晚期細(xì)胞免疫功能更低,預(yù)后更差,.,32,產(chǎn)生抗體,提呈抗原,免疫調(diào)節(jié),B細(xì)胞的功能,.,33,B細(xì)胞增高,提示機(jī)體體液免疫功能被增強(qiáng) 此時(shí)體內(nèi)高親和力抗體的產(chǎn)生也增加 見(jiàn)于臨床各種細(xì)菌性感染 B細(xì)胞增高也見(jiàn)于B細(xì)胞白血病,.,34,B細(xì)胞減少,見(jiàn)于原發(fā)及繼發(fā)性免疫功能低下，臨床可出現(xiàn)反復(fù)發(fā)作的呼吸道及消化道感染 見(jiàn)于嚴(yán)重病毒性感染、使用免疫抑制劑制藥等情況 見(jiàn)于原發(fā)性B細(xì)胞缺陷?。ㄈ缧月?lián)無(wú)丙種球蛋白血癥）和重癥聯(lián)合免疫

9、缺陷（T細(xì)胞同時(shí)缺如） 體液免疫功能不良者則減少 在生命垂危時(shí)可呈現(xiàn)極度減少,.,35,自然殺傷細(xì)胞,表面標(biāo)記 CD3-、CD56+、CD16+ 表面受體 （1）殺傷細(xì)胞活化受體（KAR） 結(jié)合靶細(xì)胞表面糖類配體，促使NK發(fā)揮殺傷作用。 （2）殺傷細(xì)胞抑制受體（KIR） 識(shí)別自身細(xì)胞表面MHC-I類分子，產(chǎn)生抑制信號(hào) 無(wú)須致敏即直接殺傷靶細(xì)胞,抗感染與抗腫瘤,免疫調(diào)節(jié),.,36,NK細(xì)胞作用及效應(yīng)機(jī)制,抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用（ADCC） 天然細(xì)胞毒性 NK細(xì)胞介導(dǎo)的凋亡 NK細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子 NK細(xì)胞受體,.,37,NK細(xì)胞通過(guò)ADCC作用殺傷病毒感染的靶細(xì)胞,.,38,NK細(xì)胞殺傷靶細(xì)胞電鏡圖,.,39,NK細(xì)胞,NK細(xì)胞是機(jī)體抗某些病毒、細(xì)菌、寄生蟲、真菌感染的重要免疫因素，NK細(xì)胞異常在病毒感染時(shí)尤其突出。 NK細(xì)胞減少見(jiàn)于薩科奇病毒、腦心肌炎病毒、流感病毒、EB病毒、HSV-型等感染。 NK細(xì)胞也參與型超敏反應(yīng)和移植物抗宿主反應(yīng)，IL-2治療后外周血NK細(xì)胞數(shù)量增加。,.,40,NK細(xì)胞,NK細(xì)胞與腫瘤性疾病的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)歸密切相關(guān) 一般而言，腫瘤患者NK細(xì)胞數(shù)量較正常人減少，且減少的程度與腫瘤病情的嚴(yán)重程度密切相關(guān)，病情好轉(zhuǎn)，NK細(xì)胞數(shù)量回升 因此，NK細(xì)胞數(shù)