藥理學動物實驗基本方法

1、藥理學動物實驗基本方法,藥學院藥理學科組,Contents,實驗動物的捉持與給藥,1,實驗動物的編號和分組,2,實驗動物的麻醉,3,4,實驗動物的采血,大鼠,豚鼠,家兔,犬,一、捉持與給藥,小鼠,小鼠的捉持,1、用右手拇指和食指捏住小鼠尾巴中部將小鼠提起，放在飼養(yǎng)合的面罩上。,用左手拇指和食指迅速、準確地捏住小鼠的兩耳后及頸背部的皮膚，將小鼠提起。,翻轉(zhuǎn)左手掌，以左手掌心和中指夾小鼠背部的皮膚，使小鼠整個呈一條直線。,用左手拇指和食指迅速、準確地捏住小鼠的兩耳后及頸背部的皮膚，將小鼠提起。,大鼠的捉持,首先戴好防護手套,用右手拇指和食指抓住大鼠尾巴中部將大鼠提起，放在大鼠飼養(yǎng)盒的面罩上。,左手

2、順勢按、卡在大鼠軀干 背部，稍加壓力向頭頸部滑行。,以左手拇指和食指捏住大鼠兩耳后部的頭頸皮膚，其余三指和手掌握住大鼠背部皮膚，完成抓取固定。,豚鼠的捉持,先用左手輕輕扣、按住豚鼠背部。,順勢抓緊其肩胛上方皮膚， 拇指和食指環(huán)箍其頸部。,用右手輕輕托住其臀部， 即可將豚鼠抓取固定。,兔的捉持,用右手抓住兔頸部的被毛和皮膚，輕輕把兔提起。,用左手托住兔的臀部,家兔的固定方式有腹臥式和仰臥式兩種,犬的捉持,實驗者先撫摩，逐步接近，勿使其驚恐或?qū)⑵浼づ?用粗棉繩兜住狗的下頜，并在上頜打結(jié)（勿太緊）。,如犬不合作，則先用一根特制長柄狗頭夾，從后面夾住犬頸，限制犬頭部活動，再按上述方法捆住犬嘴。,實驗

3、動物的捉拿.MPG,灌胃給藥大小鼠,1、將灌胃針連接在注射器上，吸入一定量的藥液。,左手捉持動物，使頭部向上。,右手持針，把灌胃針頭的前端放進動物的口腔，順著上腭部插入咽部，順咽后壁輕輕往下推。,用右手食指將針栓慢慢往下壓，將注射器中的藥液灌入動物的胃中。,劑量：小鼠約0.1-0.5ml10g體重。最大體積為1.0ml/只 大鼠約1-2 ml100g體重，最大體積為1.0ml/只,灌胃給藥兔,將兔放進固 定架內(nèi)，灌胃者用左手拇指和中指擠壓兔兩頰，將下頜擠開使兔被動張口。,右手將開口器從一側(cè)口角插入口腔并固定。,胃管經(jīng)開口器的孔插入，向前推進約15cm，可達胃內(nèi)。,在插管時應(yīng)將胃管另一端泡在水中

4、確認沒有冒氣泡，即可用注射器經(jīng) 胃管注入藥液。,豚鼠灌胃同家兔,皮下注射給藥大小鼠,頸背部、腋下、腹側(cè)和后肢的皮下,注射針頭取一銳角角度刺入皮下。,將針頭輕輕向左右 擺動，易擺動則表示已 刺入皮下。,再輕輕抽吸， 如無回血，可緩慢地將 藥物注入皮下,靜脈注射給藥大小鼠,將大小鼠放在金屬籠或小鼠固定器 中，通過金屬籠或大小鼠固定器的孔拉出鼠尾巴,用左手捏住鼠尾巴中下部，用75 酒精棉球反復擦拭尾部,注射時，以左手拇指和中指捏住鼠尾兩側(cè)，用食指從下面托起尾，,右手持4號針頭的注射器，使針頭與 靜脈平行（小于30度角）,大鼠亦可用舌下靜脈注射,靜脈注射給藥犬,前肢皮下頭靜脈或后肢小隱靜脈注射 。,先

5、將注射部位毛剪去 。,在靜脈血管的近心端，用乳膠管扎緊肢體，使血管充盈，注射器針頭向靜脈血管的近心端方向穿刺 。,回抽注射器針栓，如有回血，則證明針尖在血管內(nèi)，即可推注藥液。,靜脈注射給藥兔,兔放在固定架內(nèi)，酒精消毒并揉搓血管，使兔的耳緣靜脈充盈。,用左手食指和中指夾住兔的耳緣靜脈的近端，拇指繃緊靜脈的遠端，無名指和小指放在耳郭下作墊。,右手拿注射器，針尖的斜面朝上，將針 頭從遠心端插入血管,回抽有血即可注射，拔針后用棉球止血,豚鼠可用足背靜脈注射,實驗動物的 給藥.MPG,二、實驗動物的采血,尾尖采血,眼眶靜脈叢采血,斷頭采血,腹主動脈采血,心臟采血,腹主動脈采血,靜脈采血,方法：固定動物并

6、露出鼠尾，將尾部在45的溫水中浸泡數(shù)分鐘（或以二甲苯棉球涂擦），使尾部血管擴張。將鼠尾擦干，用銳器切去尾尖0.30.5cm，讓血液滴入盛器或直接以血紅蛋白吸管吸取。 對象：大、小鼠 特點：小量采血，可以多次采血。,1,尾尖采血,方法：用左手捉鼠，拇指及中指抓住頭頸部皮膚，食指按于眼后，使眼球輕度突出，眼底球后靜脈叢淤血。右手持取內(nèi)徑為1.0-1.5mm的玻璃毛細管（臨用前折斷成1-1.5cm長的毛細管段，浸入1肝素溶液中，干燥后用）刺入深度小鼠23mm，大鼠45mm。當感到有阻力時再稍后退，得到所需要的血量后，拔出。 對象：大、小鼠等。 特點：中等血量（0.20.3ml，小鼠；0.51.0ml

7、，大白鼠），避免動物死亡。,2,眼眶靜脈叢采血,方法：左手以拇指和食指保持動物的頭頸部，使其頭略下傾，右手持剪刀猛力剪斷鼠頸，讓血液滴入盛器。 對象：大、小鼠等。 特點：需要血量較大（小白鼠可采血0.81.0ml，大白鼠可采血5.08.0ml） ，且不需要繼續(xù)保存動物生命時用本法。,3,斷頭采血,方法：動物要麻醉后進行，用針管在腹主動脈分叉處，與血管平行刺入。 對象：大、小鼠等。 特點：需要血量較大，且不需要繼續(xù)保存動物生命時用本法。,4,腹主動脈采血,方法：將動物背位固定，在左胸第2至第4肋間剪毛一塊，用碘酒和酒精消毒。然后用配有7號針頭的10ml注射器，在心跳最明顯處作穿刺。針頭刺入心臟后

8、即見血液流入注射器；或邊刺邊抽，直至血液流入注射器。取得所需血量后，迅速將針頭拔出，這樣心肌上的穿刺孔較易閉合。 對象：兔、豚鼠等。 特點：采血量較大，繼續(xù)保存動物生命。,5,心臟采血,方法：將家兔放在固定箱內(nèi)，剪去擬采血耳殼上的毛，用電燈照射加熱或用二甲苯棉球涂擦耳殼，使耳部血管擴張。用粗針頭刺破耳緣靜脈或以刀片在血管上切一小口，讓血液自然流出，滴入已放有抗凝劑的盛器中。采血完畢，用干棉球壓住出血口，以待止血。如一時不易止血，可用木夾夾住耳殼1020分鐘。 對象：犬在前肢靜脈、后肢小隱靜脈采血；小型豬為耳大靜脈、后肢靜脈 特點：采血量較大，繼續(xù)保存動物生命。,6,靜脈采血,三、實驗動物編號與

9、分組,（一）編號： 1、單色涂染法：在每組動物不超過l0只或一個實驗不超過40只的情況下適用。 實驗動物：大鼠、小鼠。 常用染色劑：3-5苦味酸溶液， 可染成黃色。,方法步驟： (1)涂染原則：從左到右、從上到下。 (2)左前肢為l號、左側(cè)腹部2號、 左后肢3號。 (3)兩耳后部4號、背中部5號、 后肢背部6號。 (4)右前肢7號、 右側(cè)腹部8號、 右后肢9號。 (5)尾巴根為10號。 （6）額部為20號,2、雙色涂染法： 在每組動物不超過100只的情況下用。 實驗動物：大鼠、小鼠。 常用染色劑： (1)3-5苦味酸溶液，可染成黃色。 作為“個”位數(shù)。 (2) 0.5%中性紅或品紅溶液，可染

10、成紅色。作為“十”位數(shù)。,方法步驟： (1) 用兩種顏色同時進行染色標記。 (2) 用苦味酸(黃色)染色標記作為個位數(shù)。 (3) 用品紅(紅色)染色標記作為十位數(shù)， （4）左前肢為10號、 左側(cè)腹部20號、 左后肢30號， 兩耳后部40號、 背部50號、 后肢背部60號， 右前肢70號、 右側(cè)腹部 80號、 右后肢90號 第100號不作染色標記。,3、穿耳孔法 用專用耳空器在動物耳朵不同部位打一小孔或缺口表示一定號碼的方法，原則是：左耳代表十位，右耳代表個位。實驗動物：兔、犬、豬 4、標牌法 一般掛在動物的頸部、耳朵、腳上或 實驗動物：犬、猴 5、烙印法 6、剪毛法,三、實驗動物編號與分組,（

11、二）分組： 1、組別的要求： 正常對照組 模型組 陽性藥組 藥物不同劑量組,（1）正常對照組 要求 不加任何處理，指在正常條件下進行觀察和對照，給藥組如是灌胃給藥，對照組應(yīng)用灌胃溶劑。 目的 對比觀察模型是否成功；觀察被試藥能否使病理改變恢復正常。（2）陽性藥對照組 要求 所選藥必須是藥典所有的或國家批準的藥，如用西藥，則采用公認的，療效可靠的。 目的 說明所用方法的可靠性；對比新藥的優(yōu)劣和特點。 （3）模型對照組 要求 除不用藥外，其他處理同給藥組，模型要符合中醫(yī)證或病的模型。 目的 對比觀察受試藥的藥理作用。,（4）藥物組 一般應(yīng)設(shè)三個劑量組，大動物，操作特殊困難者可設(shè)兩個劑量組； 能夠測

12、出LD50的受試藥物，動物試驗給藥劑量一般為1/101/5 LD50； 很多中藥制劑毒性甚小，無法測出LD50者，一般常用人用劑量（g或mg生藥/kg體重）來折算動物用量； 正式實驗時常以等效劑量作為中劑量或小劑量，大、中、小劑量差以23的等比級數(shù)為宜；,完全隨機分組 完全隨機分組時將試驗對象完全按隨機原則分組。它的設(shè)計、分組、和統(tǒng)計處理都比較簡單，但試驗效率較低。 例：將30只SD 大鼠隨機分配到甲、乙、丙3組。 使用excel對試驗對象完全隨機分組的操作步驟如下:,（二）分組的方法,1.在單元格A1、B1、C1中分別鍵入編號、隨機號、分組號，隨后在A2、A3中分別鍵入1、2，然后拖動鼠標利

13、用excel的自動填充功能完成130的編號。 2.在B2單元格鍵入“=RAND()”后回車產(chǎn)生一個隨機數(shù)字，然后同樣利用其自動填充功能在B2B31生成一列隨機數(shù)。需注意的是這里產(chǎn)生的隨機數(shù)是會隨著單元格的操作而變化的。故需選中“B2”至“B31”單元格區(qū)域,復制所選中的區(qū)域,并以數(shù)據(jù)格式進行選擇性粘貼。,3.選中A 列、B 列,單擊菜單欄“數(shù)據(jù)”“排序”,在彈出的對話框中,選擇以隨機數(shù)”為排序的“主要關(guān)鍵字”,按“確定”按扭,則按B 列隨機數(shù)字的大小完成A 列、B 列的排序。 4.分別在C2C11、C12C21 和C22C31 單元格中,依次鍵入“1”、“2”、“3”;用鼠標同時選中A、B、C

14、 列,單擊菜單欄“數(shù)據(jù)”“排序”命令,在彈出的“排序”對話框中,選擇以“編號”為排序的“主要關(guān)鍵字”,這樣就可以得到各個實驗對象的分組編號。（見表1）,隨機區(qū)組分組 隨機區(qū)組分組是按照一定條件，將幾個條件相同的試驗對象分為一個區(qū)組，然后在每個區(qū)組內(nèi)部按隨機化原則，將每個對象分配到各組。 例：將SD大鼠32只，體重180g220g,按體重大小配成8 個單位組,每個單位組中的4 只大鼠隨機分配接受A、B、C、D 4 種處理,試給出隨機化分組的結(jié)果 1.在單元格A1、B1、C1中分別鍵入編號、區(qū)組號、隨機號，隨后在A2A3中分別鍵入1、2，然后拖動鼠標利用excel的自動填充功能完成132的編號。

15、2.在C2單元格鍵入“=RAND()”后回車產(chǎn)生一個隨機數(shù)字，然后同樣利用其自動填充功能在C2C33生成一列隨機數(shù)。需注意的是這里產(chǎn)生的隨機數(shù)是會隨著單元格的操作而變化的。故需選中“C2”至“C33”單元格區(qū)域,復制所選中的區(qū)域,并以數(shù)據(jù)格式進行選擇性粘貼。,3.選中A、B、C 列,單擊菜單欄“數(shù)據(jù)”“排序”,在彈出的“排序”對話框中,選擇以“區(qū)組”為“主要關(guān)鍵字”排序“, 隨機數(shù)”為“次要關(guān)鍵字”排序,然后,單擊“確定”按鈕,即完成以區(qū)組單位的隨機數(shù)字排序 4.分別在C2C11、C12C21 和C22C31 單元格中,依次鍵入“1”、“2”、“3”;用鼠標同時選中A、B、C 列,單擊菜單欄“

16、數(shù)據(jù)”“排序”命令,在彈出的“排序”對話框中,選擇以“編號”為排序的“主要關(guān)鍵字”,這樣就可以得到各個實驗對象的分組編號。 5. 在“D1”中鍵入“分組號”,在“D2”、“D3”、“D4”和“D5”中分別依次鍵入“1”、“2”、“3”和“4”,對余下的各個區(qū)組,同樣依次輸入“1”、“2”、“3”和“4”,作為同一區(qū)組內(nèi)4 對象的分組號。,6. 單擊菜單欄“數(shù)據(jù)”“排序”,在彈出的對話框中,選擇“編號”為排序的“主要關(guān)鍵字”,單擊“確定”按鈕,這樣就可以得到各個實驗對象的分組編號。（見表2）,分層分組法： 將動物先按雌雄分層，然后分別稱體重，將體重相同的放在一起，不同體重的動物放在不同的動物盒中

17、，按實驗設(shè)計要求分別放在各組動物盒中，使每只動物都有相同的機會分配到各組，如此分組的結(jié)果，各實驗組動物平均體重基本一致。,抽簽法： 如有小鼠40只，要隨機分為四組，可將小鼠從1-40編號，將準備的號簽也編1-40號，然后將號簽充分混合后，隨機各抽10個號，然后對號將小鼠分配到各個組去；,摸球法： 如實驗所需設(shè)四組，即可用40只雌雄各半的小鼠，將小鼠按體重大小排列，雄性鼠編為1-20號，雌性鼠編為21-40號，然后用紅、黃、藍、綠四種彩球表示甲、乙、丙、丁四組，將數(shù)量相等四種顏色的球放入一個口袋里，充分混合后，每次摸取都要徹底混合，每次摸出一個，然后放回袋中，若第一次摸出是紅球，就將第一鼠放入甲

18、組，第二次摸出的綠球，就將第二號放入丁組，第三次摸出的又是紅球，因已出現(xiàn)過紅球，可不計再放回口袋，重新摸取，第四次摸出的籃球，將第三號鼠放入丙組，第四號鼠不必再摸球決定，剩下的乙組就是第四號鼠，如此類推，將鼠分配完畢。,四、實驗動物的麻醉,動物麻醉是消除動物手術(shù)疼痛，便于實驗操作，保證動物安全，為手術(shù)創(chuàng)造良好的條件。 動物全身麻醉分四期： 1.第一期：隨意興奮期，出現(xiàn)運動與運動失調(diào)； 2.第二期：不隨意興奮期，由意識完全喪失至規(guī)則的自動呼吸開始時止。 3.第三期：外科麻醉期， 4.第四期：延髓麻醉期，進入此期，麻醉已嚴重過量。,麻醉方法與麻醉藥,麻醉方法：全身麻醉和局部麻醉，通過吸入、注射（靜脈、皮下、肌肉、腹腔）、口服、灌胃等方法使動物麻醉。 常用麻醉藥物：乙