三種病毒轉(zhuǎn)染的異同點(diǎn)

1、三種病毒轉(zhuǎn)染的異同點(diǎn)一、病毒表達(dá)系統(tǒng)簡介病毒載體是指以病毒為基礎(chǔ)的載體，也是目前最常用的基因?qū)敕绞街?。通過對病毒基因組的遺傳改造，使之能夠攜帶外源目的基因和相關(guān)的病毒元件，并被包裝成病毒顆粒。病毒進(jìn)而侵染宿主，使攜帶的外源基因在宿主體內(nèi)表達(dá)。病毒的基因組可分為編碼區(qū)和非編碼區(qū)。其中，編碼區(qū)包含病毒的必需基因和非必需基因，可分別表達(dá)產(chǎn)生病毒的結(jié)構(gòu)蛋白和非結(jié)構(gòu)蛋白；非編碼區(qū)則含有病毒復(fù)制和包裝所需的全部順式作用元件。由于野生型病毒常常具有致病性，為了避免實驗或治療中使用的病毒恢復(fù)成野生型，必須對病毒載體進(jìn)行一系列的遺傳改造。譬如刪除病毒基因組的非必需區(qū)，將順式作用元件和反式作用元件分開連接至不

2、同的載體上，或結(jié)合利用不同種病毒的必需蛋白等，最大程度地保證實驗的安全性。哺乳動物病毒表達(dá)系統(tǒng)常常包含一到多個載體，將所需的載體轉(zhuǎn)染包裝細(xì)胞后，在反式因子的作用下，病毒復(fù)制、包裝所需的順式作用元件和外源基因表達(dá)盒即可被包裝，最終產(chǎn)生帶有外源基因的病毒顆粒。經(jīng)濃縮和純化后的病毒液即可用于侵染目標(biāo)宿主細(xì)胞或動物體，實現(xiàn)外源目的基因在宿主體內(nèi)的表達(dá)。二、病毒表達(dá)系統(tǒng)的優(yōu)勢病毒的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率比常規(guī)真核表達(dá)載體高很多，因此特別適合于介導(dǎo)外源基因在難轉(zhuǎn)染甚至無法轉(zhuǎn)染的哺乳動物細(xì)胞中表達(dá)。三、輝駿生物病毒服務(wù)簡介輝駿生物的病毒產(chǎn)品包括慢病毒、腺病毒和逆轉(zhuǎn)錄病毒，服務(wù)項目包括：各類病毒載體的構(gòu)建和病毒包裝，以及慢

3、病毒介導(dǎo)的穩(wěn)定表達(dá)株建立等。慢病毒表達(dá)系統(tǒng)：一種很常用的哺乳動物病毒表達(dá)系統(tǒng)；慢病毒感染宿主細(xì)胞時，可將攜帶的外源基因隨機(jī)、穩(wěn)定地整合入宿主細(xì)胞基因組中，實現(xiàn)目的基因穩(wěn)定、長期的表達(dá)，非常適合于基因過表達(dá)穩(wěn)定細(xì)胞株的建立和RNAi研究。圖1 慢病毒感染宿主細(xì)胞原理圖腺病毒表達(dá)系統(tǒng)：一種很常用的哺乳動物病毒表達(dá)系統(tǒng)；但與慢病毒不同的是，腺病毒基因組及其攜帶的外源基因不會整合入宿主細(xì)胞的基因組中，而是游離于宿主基因組外獨(dú)立表達(dá)，因此可實現(xiàn)目的基因瞬時、高豐度的表達(dá)，同時還避免了因整合而引發(fā)的潛在的基因突變和隨機(jī)效應(yīng)，安全性和可控性高。圖2 腺病毒感染宿主細(xì)胞原理圖逆轉(zhuǎn)錄病毒表達(dá)系統(tǒng)：逆轉(zhuǎn)錄病毒將自

4、身基因組及其攜帶的外源基因隨機(jī)、穩(wěn)定地整合入宿主細(xì)胞基因組中，可實現(xiàn)目的基因穩(wěn)定、長期的表達(dá)。逆轉(zhuǎn)錄病毒表達(dá)系統(tǒng)根據(jù)不同的包裝細(xì)胞系可分為單嗜性、雙嗜性和泛嗜性，不同包裝細(xì)胞產(chǎn)生的逆轉(zhuǎn)錄病毒能夠特異性地感染某一個或某一類宿主細(xì)胞。輝駿生物采用的病毒包裝細(xì)胞系為plat E細(xì)胞系，該細(xì)胞系包含gag、pol和env基因，因此轉(zhuǎn)染單一表達(dá)質(zhì)粒就可以包裝出逆轉(zhuǎn)錄病毒，但是該病毒具有很強(qiáng)的針對性，只適用于大鼠、小鼠細(xì)胞穩(wěn)定株的建立。圖3 逆轉(zhuǎn)錄病毒感染宿主細(xì)胞原理圖四、輝駿生物三種病毒表達(dá)系統(tǒng)的特點(diǎn)表1三種病毒表達(dá)系統(tǒng)的特點(diǎn)慢病毒表達(dá)系統(tǒng)腺病毒表達(dá)系統(tǒng)逆轉(zhuǎn)錄病毒表達(dá)系統(tǒng)病毒基因組RNADNARNA病毒

5、原型人類免疫缺陷I型病毒(HIV)人5型腺病毒(Ad5)莫洛尼鼠白血病病毒(MMLV)載體系統(tǒng)1個表達(dá)質(zhì)粒和3個包裝質(zhì)粒1個穿梭質(zhì)粒和1個輔助質(zhì)粒1個表達(dá)質(zhì)粒包裝細(xì)胞293T細(xì)胞293細(xì)胞plat E細(xì)胞包裝方式表達(dá)質(zhì)粒與輔助質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染包裝細(xì)胞獲得重組慢病毒顆粒；包裝細(xì)胞不裂解，病毒被分泌至上清中表達(dá)質(zhì)粒與輔助質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染包裝細(xì)胞獲得重組腺病毒顆粒；病毒感染后包裝細(xì)胞發(fā)生裂解。表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染含所有必需蛋白的包裝細(xì)胞即可獲得重組病毒顆粒；包裝細(xì)胞不裂解，病毒被分泌至上清中宿主細(xì)胞分裂和非分裂的哺乳動物細(xì)胞分裂和非分裂的哺乳動物細(xì)胞分裂的大鼠、小鼠細(xì)胞動物模型可獲得轉(zhuǎn)基因動物，效果好不能得到轉(zhuǎn)基因動物

6、可以實現(xiàn)，但較有難度是否整合整合型非整合型整合型表達(dá)豐度高水平表達(dá)高水平表達(dá)高水平表達(dá)表達(dá)時間慢(24天)快(12天)快(12天)病毒滴度110811010TU/mL1101111013vp11061107TU/mL克隆容量最高可達(dá)6kb的外源片段高達(dá)8kb的外源片段不超過6kb的外源片段免疫原性低高低過表達(dá)microRNA特別適合適合不適合RNAi特別適合適合適合五、輝駿生物病毒包裝和穩(wěn)定株構(gòu)建流程輝駿生物提供的病毒服務(wù)可分為三部分：A.病毒載體的構(gòu)建：將目的基因片段連接至病毒載體；B. 病毒包裝：重組病毒質(zhì)粒（或與包裝質(zhì)粒一起）轉(zhuǎn)染包裝細(xì)胞；收集病毒顆粒，濃縮后進(jìn)行滴度測試；C. 穩(wěn)定細(xì)胞

7、株的建立（僅針對慢病毒）：分別使用實驗組和對照組慢病毒感染細(xì)胞，建立實驗組和對照組的穩(wěn)定細(xì)胞株。圖4病毒包裝和穩(wěn)定株構(gòu)建流程六、輝駿生物病毒服務(wù)項目輝駿生物的病毒服務(wù)項目包括了基因釣取、RNAi設(shè)計、載體構(gòu)建、病毒包裝、穩(wěn)定細(xì)胞株建立和表達(dá)/干擾檢測等全套服務(wù)內(nèi)容。除此之外，我們還可以提供個性化的定制服務(wù)，您只需要將實驗?zāi)康母嬖V我們，即可享受高品質(zhì)的實驗服務(wù)體驗。表2輝駿生物病毒服務(wù)項目列表 分類服務(wù)項目 項目內(nèi)容 慢病毒服務(wù)RNAi慢病毒服務(wù)RNA干擾序列設(shè)計；載體構(gòu)建；慢病毒包裝；穩(wěn)定株構(gòu)建基因過表達(dá)慢病毒服務(wù)基因釣??；載體構(gòu)建；慢病毒包裝；穩(wěn)定株構(gòu)建microRNA慢病毒服務(wù)Pri-microRNA或pre-microRNA釣取；載體構(gòu)建；慢病毒包裝；穩(wěn)定株構(gòu)建 腺病毒服務(wù)RNAi腺病毒服務(wù)RNA干擾序列設(shè)計；載體構(gòu)建；腺病毒包裝基因過表達(dá)腺病毒服務(wù)基因釣取；載體構(gòu)建；腺病毒包裝microRNA腺病毒服務(wù)Pri-microRNA或pre-microRNA釣?。惠d體構(gòu)建；腺病毒包裝逆轉(zhuǎn)錄病毒服務(wù)基因過表