CHO細(xì)胞大規(guī)模懸浮培養(yǎng)流程簡(jiǎn)介PPT課件

1、.,1,CHO細(xì)胞培養(yǎng)流程簡(jiǎn)介,.,2,一 懸浮培養(yǎng)特點(diǎn) （suspension culture),非貼壁依賴型細(xì)胞的一種培養(yǎng)方式 細(xì)胞懸浮于培養(yǎng)基中生長(zhǎng)或者維持 某些貼壁依賴型細(xì)胞經(jīng)過(guò)適應(yīng)和選擇后也可用此方法培養(yǎng) 使用振蕩或者轉(zhuǎn)動(dòng)裝置使細(xì)胞始終處于懸浮狀態(tài),.,3,二 CHO細(xì)胞大規(guī)模懸浮培養(yǎng)工藝流程,細(xì)胞株 搖瓶 WAVE或者種子罐 收貨細(xì)胞液 反應(yīng)器培養(yǎng),.,4,1 細(xì)胞復(fù)蘇,將水浴鍋溫度調(diào)至37 從液氮罐中取出凍存管，用鑷子夾住迅速放入水浴鍋中晃動(dòng)，直至完全溶解后將凍存管表面消毒轉(zhuǎn)移至超凈工作臺(tái)內(nèi)進(jìn)行操作 將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管內(nèi)，加入約10ml培養(yǎng)液，輕輕吹打混勻 將細(xì)胞懸液

2、經(jīng)800-1000rpm離心5分鐘，棄去上清液 向細(xì)胞沉淀加入10ml培養(yǎng)液，吹打均勻后將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至搖瓶?jī)?nèi)，加入適量培養(yǎng)液，開始培養(yǎng),.,5,細(xì)胞復(fù)蘇注意事項(xiàng),注意全程無(wú)菌操作 溶解凍存細(xì)胞時(shí)速度一定要快，避免緩慢升溫細(xì)胞內(nèi)形成冰晶，對(duì)細(xì)胞造成損傷 計(jì)算合適的接種密度，一般CHO細(xì)胞培養(yǎng)的接種密度范圍在3.0-6.0*10E5個(gè)/ml 注意安全：取出凍存管時(shí)防止凍傷，同時(shí)注意有無(wú)液氮滲透進(jìn)入凍存管，防止液氮迅速氣化導(dǎo)致凍存管爆炸造成人員危險(xiǎn),.,6,2 搖瓶細(xì)胞傳代,搖瓶細(xì)胞培養(yǎng)2-3天后，細(xì)胞密度增高，營(yíng)養(yǎng)物逐漸耗盡，需要對(duì)細(xì)胞進(jìn)行擴(kuò)培 根據(jù)細(xì)胞密度計(jì)算擴(kuò)培體積 當(dāng)達(dá)到反應(yīng)器擴(kuò)培接種細(xì)胞

3、數(shù)量要求后，停止搖瓶培養(yǎng)，接種至反應(yīng)器進(jìn)行擴(kuò)培,.,7,3 反應(yīng)器擴(kuò)培,在超凈臺(tái)內(nèi)將搖瓶細(xì)胞合并至接種瓶?jī)?nèi) 用無(wú)菌焊接機(jī)將接種瓶管路與反應(yīng)器管路無(wú)菌焊接，將細(xì)胞液打入反應(yīng)器進(jìn)行擴(kuò)培 當(dāng)反應(yīng)器內(nèi)細(xì)胞密度達(dá)到要求后，接種至下一級(jí)反應(yīng)器開始生產(chǎn)階段培養(yǎng),.,8,4 反應(yīng)器生產(chǎn)階段培養(yǎng),取樣 補(bǔ)堿 補(bǔ)料 補(bǔ)糖 收獲,.,9,取樣,取樣瓶滅菌 將取樣瓶連接至反應(yīng)器取樣口，開始管路滅菌 滅菌完成后等待管路冷卻 開始取樣 取樣完成后用純蒸汽沖洗取樣管路 將所取細(xì)胞液測(cè)定細(xì)胞密度、活力、pH值等參數(shù),.,10,補(bǔ)堿、補(bǔ)糖、補(bǔ)料,當(dāng)反應(yīng)器內(nèi)pH值低于6.8左右時(shí)，需要進(jìn)行補(bǔ)堿 當(dāng)反應(yīng)器內(nèi)糖含量低于2g/L時(shí)，需要進(jìn)行補(bǔ)糖 當(dāng)反應(yīng)器內(nèi)營(yíng)養(yǎng)物逐漸耗盡，需要根據(jù)工藝進(jìn)行補(bǔ)料,.,11,收獲細(xì)胞液,在培養(yǎng)末期，細(xì)胞密度及活力都開始下降，此時(shí)應(yīng)該進(jìn)行細(xì)胞液的收獲，收獲時(shí)保證細(xì)胞活力高于60% 預(yù)先準(zhǔn)備好深層過(guò)濾膜包及管路的安裝和保壓 將反應(yīng)器降溫至18左右