金黃色葡萄球菌GBppt課件

1、1、金黃色葡萄球菌檢查、黃色葡萄球菌相關事件、金黃色葡萄球菌在思念、三全、灣仔碼頭事件引起標準爭論，在2011年1.2月2.1實施的速凍食品新國標中，金黃色葡萄球菌原本由“檢測使不得”變?yōu)椤皺z測限定”，這個檢測標準的變化是金黃色葡萄球菌的、3、金黃色葡萄球菌Staphylococcus aureus、金黃色葡萄球菌：屬于微球菌科、葡萄球菌屬的“金葡萄菌”等有異稱的金葡萄菌是化膿性感染的常見致病菌，肺炎、心包炎、毛囊炎、敗血癥、燙傷樣皮膚病等傳播途徑：水、食物等超細菌：甲氧芐啶耐受力金葡萄有無鞭毛、無芽胞、莢膜(一般不發(fā)生體外培養(yǎng))。 在老化的培養(yǎng)物中，老化的菌體常常呈克陰性。 培養(yǎng)特性：最適溫

2、度： 37(6.546)ph:7.4(4.29.3 )耐鹽性： 10%-15% NaCl，能在40%膽汁中產(chǎn)生色素、血漿凝固酶、接觸酶、腸毒素等，5，金黃色葡萄球菌的檢測方法GB4789.10-2016iso6888FDA(bam ) onlinechapter12化妝品衛(wèi)生規(guī)范USP/BP/EP，6，GB4789.10-2016的主要變化是：1.去掉了英文名稱2 .修改了操作程序的分離培養(yǎng)基血塊3 .去掉了增菌液的10%氯化納金屬釷胰干酪素大豆肉汁(與國際聯(lián)系，F(xiàn)DA，ISO 并且使用7.5%氯化納金屬釷肉湯)4.可修改葡萄球菌腸毒素檢測，7 .定性檢測選擇性增菌，步驟：將25g樣品放入22

3、5ml的7.5%氯化納金屬釷肉湯或10%氯化納金屬釷胰干酪素大豆肉湯容器，并均勻。 液體試料測量25mL。 作用： 1、復蘇細菌2、選擇性增殖操作要點： 1、準確(量)取2、按標準要求時間溫度培養(yǎng)、8、定性檢測平板劃線分離，工序：分別在接種環(huán)取培養(yǎng)液1環(huán)，劃線接種一個Baird-Parker平板和一個血液平板， 用361分別培養(yǎng)18-24h (血液平板)或40-48h(Baird-Parker平板)，用劃線方式在瓊脂平板上分離單一菌落，從單一菌落形態(tài)中判別具有典型形態(tài)的可疑菌落，通過下面的生化和血清實驗確定。 關操作點： 1、保持平板表面干燥2，劃線時要在平板上畫單個菌落。 為劃線的平板需要現(xiàn)

4、在的作用，9、定性地檢測平板的劃線分離，蟻群的形態(tài)：從灰色到黑色，邊緣總是淺色，周圍是混濁的帶，其外緣有透明的環(huán)。 主要成分：卵黃亞碲酸鉀元素、注音字酸、甘氨酸、氯化鋰，注意點：一、卵黃亞碲酸鉀元素在5.0前后預熱，加入5.0培養(yǎng)基進行蒸發(fā)制冷二、長期保存的速凍食品或干燥食品中，菌落顏色淺、外觀粗糙干燥。1.0、定性檢測平板劃線分離，菌落形態(tài)：白色或黃色菌落，周圍有透明溶血環(huán)(-溶血)。 主要成分：蛋白胨、牛肉粉、去纖維羊血，注意點： 1、使用前觀察平皿是否有干裂或感染菌2、開封后未使用的培養(yǎng)基應立即放入冰箱保存。 定性測定1.1、血漿凝固酶催化劑鑒定試驗，程序：可疑菌落5mLBHI 36 1

5、培養(yǎng)18-24h； 0.5mL兔血漿0.2-0.3mL BHI培養(yǎng)物36 1培養(yǎng)6小時； 在每個3.0部分觀察到的云同步中陽性(例如ATCC 6538 )、陰性(例如表葡萄ATCC 12228 )陽性現(xiàn)象：試管傾斜或傾倒時，會出現(xiàn)凝塊即凝聚現(xiàn)象，或者凝聚體積達到原來體積的一半以上。 注意： 1、每份3.0均要觀察2、舊培養(yǎng)物(培養(yǎng)超過18-24h時間)或生長不良，可能導致假陰性3、甘露醇氯化納金屬釷瓊脂上的菌落不能使用，高鹽可能造成假陰性。1.2，GB 4789.10-2010，第一種方法：定性檢查，第二種方法：平板計數(shù)法，第三種方法： MPN計數(shù)法，1.3， 平板計數(shù)法，1.4，平板計數(shù)法平

6、板接種，步驟： 1.0倍序列梯度稀釋，然后選擇2-3個適當梯度每1mL，以0.3、0.3、0.4ml分別接種3個BP平板進行涂布，完全吸收樣品液后， 倒置培養(yǎng)的3個平板菌落數(shù)總計選擇2.0為20-200cfu的梯度平板，計算典型菌落數(shù)選擇5個典型菌落(5個全不同)，進行了血漿凝固酶催化劑實驗。 注意點： 1、涂布用平板必須干燥2、涂布采用1.5、平板計數(shù)法計算，使涂布棒不接觸平板邊緣，選擇總菌落數(shù)為20-200的平板，計算典型菌落數(shù)。 如果： a )稀釋度平板的菌落數(shù)在20-200CFU之間，有典型的菌落，則計數(shù)該稀釋度平板上的典型的菌落；b )最低稀釋度平板的菌落數(shù)小于2.0，計數(shù)該稀釋度平

7、板上的典型的菌落。 c )某稀釋度平板的菌落大于200，有典型的菌落，但下一個稀釋度平板沒有典型的菌落，計數(shù)該稀釋度平板上的典型菌落。 在1.6、平板計數(shù)法的計算中，d )某稀釋度平板的菌落大于200，有典型的菌落，下一個稀釋度平板有典型的菌落，該平板上的菌落數(shù)不在20200之間，按照下式計算該稀釋度平板上的典型菌落。 T=AB/Cd中，T-樣品中金黃色葡萄球菌菌落數(shù)A-某稀釋度的典型菌落總數(shù)B-某稀釋度的凝固酶催化劑陽性菌落數(shù)C-某稀釋度的凝固酶催化劑試驗中所用的菌落數(shù)d-稀釋因子、1.7、平板計數(shù)法計算、e ) 兩個連續(xù)稀釋度平板菌落數(shù)均通過20 CFU-200 CFU之間的下式計算A1B

8、1/C1A2B2/C2 1.1d式中： t-樣本中的金黃色葡萄球菌菌落數(shù)A1-第一稀釋度(低稀釋倍數(shù))代表菌落總數(shù)A2-第二稀釋度(低稀釋倍數(shù)) 代表集群總數(shù)B1-第一稀釋度(低稀釋倍數(shù))血漿凝固酶催化劑陽性集群總數(shù)B2-第二稀釋度(高稀釋倍數(shù))血漿凝固酶催化劑陽性集群總數(shù)c1-用于第一稀釋度(低稀釋倍數(shù))血漿凝固酶催化劑試驗的集群總數(shù)C2-第二稀釋度(高稀釋倍數(shù)) 用在血漿凝固酶催化劑試驗中的菌落總數(shù)1.1-計算系數(shù)d-稀釋因子(第一稀釋度)、T=，1.8，平板計數(shù)法計算，例3:t=ab/cd=(6954)4)/5.1=1480例4 :T=，A1B1/C1A2B2/C2 1.1d，(3934 ) 1.1.0.1，3.0，1650，1480，655，1.9，GB 4789.10-2010，第一法：定性檢查，第二法：平板計數(shù)法，第三法： MPN計數(shù)法，2.0，MPN計數(shù)法、2.1、適用性：平板計數(shù)法：金葡萄菌含量高的食品中金葡萄菌計數(shù)MPN法：適用于金葡萄菌含量低、雜菌含量高的食品中金葡萄菌的計數(shù)，報告方式：定性： or未檢出/25g(mL )平板計數(shù)法：計算結果報告CFU/g(mL ) 如果