實(shí)驗(yàn)七 干旱和鹽度對植物體內(nèi)游離脯氨酸積累的影響.ppt

1、實(shí)驗(yàn)七 干旱和鹽度對植物體內(nèi)游離脯氨酸積累的影響,植物生物學(xué)實(shí)驗(yàn)-植物生理部分,【實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮鸵饬x】,生長在干旱和鹽度環(huán)境中的植物，體內(nèi)常積累游離的氨基酸，而游離氨基酸積累的量又往往與環(huán)境干旱的程度、鹽度和植物對干旱和鹽度的抵抗力（即抗逆性）有關(guān)。因而，測定植物體內(nèi)游離脯氨酸的含量，在一定程度上可從生理上了解植物受環(huán)境水分和鹽度脅迫的情況，了解植物對水分和鹽分脅迫的耐受性和抵抗能力，在生產(chǎn)上和育種學(xué)上有一定的意義。,【實(shí)驗(yàn)原理】,磺基水楊酸對脯氨酸有特定反應(yīng)，當(dāng)用磺基水楊酸提取植物樣品時(shí)，脯氨酸便游離于磺基水楊酸溶液中。然后用酸性茚三酮加熱處理后，茚三酮與脯氨酸反應(yīng)，生成穩(wěn)定的紅色化合物，再用甲

2、苯處理，則色素全部轉(zhuǎn)移至甲苯中，色素的深淺即表示脯氨酸含量的高低。在520nm波長下測定吸光度，即可從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出脯氨酸的含量。,【實(shí)驗(yàn)材料】,充足供水的小麥幼苗 干旱處理7天的小麥幼苗 經(jīng)100mmol/L NaCl處理5天的小麥幼苗 經(jīng)200mmol/L NaCl處理5天的小麥幼苗,【實(shí)驗(yàn)器材和試劑】,分光光度計(jì)；電子分析天平；離心機(jī)；小燒杯；普通試管；移液管；注射器；恒溫水浴鍋；漏斗；漏斗架；濾紙；剪刀；洗耳球。 2.5酸性茚三酮溶液配制：將1.25g茚三酮溶于30ml冰醋酸和20mL 6mol/L磷酸中，攪拌加熱（70）溶解，貯于冰箱中。 3磺基水楊酸配配制：3g磺基水楊酸加蒸餾水溶

3、解后定容至100mL。 10g/mL脯氨酸標(biāo)準(zhǔn)母液配制：精確稱取20mg脯氨酸，倒入小燒杯內(nèi)，用少量蒸餾水溶解，再倒入200ml容量瓶中，加蒸餾水定容至刻度（為100g/mL脯氨酸母液），再吸取該溶液10ml, 加蒸餾水稀釋定容至100mL, 即為10g/mL脯氨酸標(biāo)準(zhǔn)液。 冰醋酸。 甲苯。,【實(shí)驗(yàn)步驟】,脯氨酸標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作 取6支試管，編號，按下表配制每管含量為020g的脯氨酸標(biāo)準(zhǔn)液。 混勻后，置于沸水浴上加熱30min，冷卻。 各試管加入5mL甲苯，振蕩30秒鐘，靜置片刻，使色素全部轉(zhuǎn)至甲苯溶液。 以甲苯溶液為空白對照，在520mm波長處測定吸光度（A）值。以脯氨酸含量為橫坐標(biāo)，吸光度值

4、為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。,樣品的測定 稱取不同處理的植物葉片各0.5g，分別置大試管中，然后向各管分別加入5ml 3的磺基水楊酸溶液，在沸水浴中提取10min（提取過程中要經(jīng)常搖動(dòng)），冷卻后過濾于干凈的試管中，濾液即為脯氨酸的提取液。 吸取2ml提取液于帶玻塞試管中，加入2ml冰醋酸及2ml 2.5酸性茚三酮試劑，在沸水浴中加熱30min，溶液即呈紅色。冷卻后加入5ml甲苯，搖蕩30秒鐘，靜置片刻后，測定萃取液在520nm處的吸光值。,從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出樣品測定液中脯氨酸的含量，按下公式計(jì)算樣品中脯氨酸含量：,X 提取液總量（mL） 脯氨酸含量（g/g） 樣品鮮重（g） 測定時(shí)提取液用量（mL） 公式中：X 從標(biāo)準(zhǔn)曲線中查得的