培養(yǎng)基的制備和高壓蒸汽滅菌.ppt

1、培養(yǎng)基的制備和高壓蒸汽滅菌,2007.11,目的與要求,1、了解培養(yǎng)基的配制原理，掌握制備培養(yǎng)基的過程。 2、學(xué)習(xí)高壓蒸汽滅菌操作技術(shù)。 3、初步掌握劃線和涂布平板的技術(shù)。 4、了解抗生素對(duì)細(xì)菌的抑制作用。,配培養(yǎng)基,滅菌、倒平板,劃線、涂布平板,抑菌圈實(shí)驗(yàn),實(shí)驗(yàn)流程,任何培養(yǎng)基一旦配成，必須立即進(jìn)行滅菌處理,培養(yǎng)基,培養(yǎng)基（medium)：由人工配制的適合微生物生長(zhǎng)、繁殖或適合積累代謝產(chǎn)物的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。,在微生物學(xué)研究和生長(zhǎng)實(shí)踐中，配置合適的培養(yǎng)基是一項(xiàng)最基本的要求。,培養(yǎng)基的配制過程,計(jì)算用量:200ml固體培養(yǎng)基 稱量：托盤天平 溶解：自來水 調(diào)pH：自然pH 滅菌： 一般培養(yǎng)基， 121

2、 0C, 15-30min：20min； 含糖培養(yǎng)基： 112 0C, 15-30min； 易產(chǎn)生沉淀的物質(zhì)：分別滅菌后再混合 倒平板,3g/L 牛肉膏,10g/L 蛋白胨,5g/L NaCl,2% 瓊脂粉,滅菌,滅菌（Sterilization）是指利用物理、化學(xué)等手段殺滅一切微生物的營(yíng)養(yǎng)體、芽孢和孢子的過程。,滅菌方法,化學(xué)藥品滅菌,輻射滅菌,過濾除菌,加熱法,干熱滅菌,濕熱滅菌,火焰灼燒,熱空氣滅菌,煮沸消毒法,常壓蒸汽滅菌法,高壓蒸汽法,高壓蒸汽滅菌鍋的構(gòu)造,Be careful!,高壓蒸汽滅菌鍋的使用,待滅菌物品的包扎,裝鍋、加水,加蓋 （對(duì)角線均勻擰旋）,升溫、排氣（放大氣5min

3、）,恒溫,切斷電源、冷卻,開鍋取物,121 20min,Attention!,倒平板,融化的瓊脂培養(yǎng)基,冷卻至50左右(以手背能忍受的溫度為準(zhǔn)),平板劃線的基本程序,滅菌接種環(huán),沾取菌液,接種,滅菌接種環(huán),殺滅接種環(huán)沾染的細(xì)菌，以免污染標(biāo)本,殺滅接種環(huán)沾染的細(xì)菌，以免污染環(huán)境,連續(xù)劃線法,滅菌過的移液管,吸取菌液0.1ml滴在培養(yǎng)皿中央,用滅菌的涂布棒均勻涂布： 將菌懸液先沿一條直線輕輕地來回推動(dòng),使之分布均勻， 然后改變方向沿另一垂直來回推動(dòng)，平板內(nèi)邊緣處可改變方向用三角玻扒再涂布幾次。,三角鐵扒,平板涂布的基本程序,抑菌圈實(shí)驗(yàn),每組4人,需要滅菌的東西： 固體培養(yǎng)基200ml（2g蛋白胨，

4、0.6g牛肉膏，1gNaCl，4g瓊脂，自來水200ml，自然pH） 培養(yǎng)皿10個(gè)（每人倒平板兩個(gè)，一個(gè)劃線，一個(gè)涂布；涂布的那個(gè)用于抑菌圈實(shí)驗(yàn)） 1ml移液管4支(每人1支） 濾紙片，每人兩片，每組需剪10片，裝入培養(yǎng)皿中滅菌,Ready? GO!,思考題,1、總結(jié)一下，配制培養(yǎng)基應(yīng)注意哪些問題。 2、高壓滅菌的關(guān)鍵是什么？ 3、加入青霉素濾紙的涂布平板究竟會(huì)產(chǎn)生什么樣的效果，為什么？,Game Over!,（1）加入適量自來水于滅菌鍋中（至水位線）。 （2）放入需要滅菌的東西。 注意：不要擺得太擠，以免影響蒸汽流通和滅菌效果。 （3）加蓋旋緊螺旋，使蒸汽鍋密閉不漏氣（對(duì)角線均勻擰旋） （4）打開放氣閥，打開電源，自開始產(chǎn)生大氣后5分鐘（此時(shí)蒸汽鍋內(nèi)的冷空氣由排氣閥排盡），關(guān)緊放氣閥，讓溫度隨蒸汽壓力上升而上升，當(dāng)達(dá)所需壓力時(shí)（即溫度上升到121），控制熱源維持所需時(shí)間（20分鐘），然后停止加熱，讓其自然冷卻。 注意：應(yīng)用此法滅菌是否徹底的一個(gè)重要關(guān)鍵是在壓力上升之前，必須將鍋內(nèi)的冷空氣完全排盡。 （5）待壓力降至0磅時(shí)，打開