過(guò)氧化物酶的顯示和觀察

1、細(xì)胞中過(guò)氧化物酶的顯示與觀察,( peroxisome),微體（micro-bodies）,電鏡下的過(guò)氧化物酶體,電子致密的核心是尿酸氧化酶的結(jié)晶，即類核體,peroxisome,Peroxisomes are simple, membrane-bound vesicles (or microbodies, as they are also called) A diameter of 0.1 to 1.0 m that often contain a dense, crystalline core of oxidative enzymes Peroxisomes are multifuncti

2、onal organelles, containing more than 50 enzymes involved in such diverse activities glyoxysome乙醛酸循環(huán)體: specialized type of peroxisome, present in plants.,過(guò)氧化物酶體包括2種酶類：,氧化酶(oxidases) 約占過(guò)氧化物酶體酶總量的一半 各種氧化酶作用于不同的底物 將氧還原成過(guò)氧化氫。 RH2 + O2 R + H2O2,過(guò)氧化氫酶(catalase) 是過(guò)氧化物酶體的標(biāo)志酶 約占過(guò)氧化物酶體酶總量的40% 作用是將過(guò)氧化氫還原成水 RH2

3、 +H2O2 R + 2H2O,過(guò)氧化物酶體的增殖,實(shí)驗(yàn)原理,氧化還原酶類的原位顯示：根據(jù)氧化還原的原理，使無(wú)色的化合物氧化成有色的物質(zhì)得以定位。 過(guò)氧化物酶體系能把許多胺類氧化成有色化合物。本實(shí)驗(yàn)用聯(lián)苯胺混合液處理標(biāo)本，過(guò)氧化物酶可將其氧化為藍(lán)色或棕色產(chǎn)物。 根據(jù)顏色反應(yīng)，可判定過(guò)氧化物酶的有無(wú)或多少。,RH2+ O2 R + H2O2 H2O2 + RH2 R + H2O,實(shí)驗(yàn)步驟,實(shí)驗(yàn)一： 取洋蔥鱗片表皮一薄片； 置于0.85NaCl溶液中35分鐘。培養(yǎng)皿1 浸在溶有0.1%鉬酸胺的0.85NaCl溶液中5分鐘。培養(yǎng)皿2 在使用聯(lián)苯胺溶液前，每2ml加10%的過(guò)氧化氫2滴。培養(yǎng)皿3 浸在聯(lián)苯胺溶液中2分鐘，至切片出現(xiàn)藍(lán)色為止。培養(yǎng)皿3 在0.85%NaCl溶液中洗1min。培養(yǎng)皿4 將薄片置于載玻片上展開(kāi)，蓋上蓋玻片，顯微鏡檢查。,實(shí)驗(yàn)二： 取馬鈴薯塊莖一個(gè)，用徒手切片法切取一小薄片置于載玻片上， 滴加3的過(guò)氧化氫溶液。 用煮熟的馬鈴薯重復(fù)上述過(guò)程，結(jié)果如何？,實(shí)驗(yàn)結(jié)果,1、在顯微鏡下可見(jiàn)到細(xì)胞中有一些染成藍(lán)色或棕色的顆粒。即為過(guò)氧化物酶存在的部位。,2、 滴加了過(guò)氧化氫溶液的馬鈴薯組織四周出現(xiàn)氣泡，提示植物中過(guò)氧化氫酶的存在。,過(guò)氧化氫酶能使H2O2分解，生成H2O和O2,H2O2 H2O +