動物細胞融合和單克隆抗體.ppt

1、知識回顧,1.動物細胞融合過程：,動物細胞A 動物細胞B,誘導(dǎo)，融合,2個完整的雜交細胞AB,有絲分裂,（膜融合、質(zhì)融合）,（核融合）,突破了有性雜交方法的局限，使遠緣雜交成為可能。,主要是應(yīng)用雜交瘤技術(shù)制造單克隆抗體,2.意義：,3.應(yīng)用：,三、動物細胞融合,方法？,4.植物體細胞雜交和動物細胞融合比較,細胞膜的流動性、 植物細胞的全能性,細胞膜的流動性,用纖維素酶、 果膠酶去壁,用胰蛋白酶 使細胞分散,物理、化學(xué)方法,物理、化學(xué)、 生物方法,獲得部分或完整植株,主要用于制備 單克隆抗體,考點疑難分析,克服遠源雜交不親和的障礙,突破有性雜交方法的局限，使遠緣雜交成為可能,（討論歸納）,高考仿

2、真題練,1.(2016?？谀M)(1)動物細胞誘導(dǎo)融合運用的原理 是_， 該過程中區(qū)別于原生質(zhì)體融合的 方法是用_處理。,細胞膜具有流動性,滅活病毒,2.科學(xué)工作者用綠色和紅色熒光材料，分別標記人和鼠的 細胞膜上的蛋白質(zhì)。當兩個標記細胞融合成一個細胞后， 起初一半膜發(fā)出綠色熒光，另一半膜發(fā)出紅色熒光，一段 時間后，兩種顏色的熒光點均勻分布，如圖所示。請分析 回答：,該實驗結(jié)果說明了細胞膜 ，這是因為 若在兩個細胞融合成一個細胞后，將融合細胞置于0 條件下再保持40min，則融合細胞仍然是一半膜發(fā)綠色熒 光，另一半膜發(fā)紅色熒光，這說明,具有一定的流動性,構(gòu)成細胞膜的磷脂分子和蛋白質(zhì)大都是可以運動

3、的,膜的流動性受溫度影響，在低溫下分子的運動受抑制,1. 單克隆抗體的概念,單個B細胞克隆產(chǎn)生的化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強的抗體,將單個B淋巴細胞和骨髓瘤細胞 融合成雜交瘤細胞分泌的,四、單克隆抗體,(1)單克隆抗體：,(2)制備原理：,知識回顧,B-B B-瘤 瘤-瘤 （未融合的B、瘤）,（一選）選擇性培養(yǎng)基：只有雜交瘤細胞才能存活,獲得產(chǎn)生相應(yīng)抗體的B細胞,（二選）：選能產(chǎn)生所需專一抗體的雜交瘤細胞,體外培養(yǎng),小鼠腹腔內(nèi)培養(yǎng),雜交瘤細胞特點：既能產(chǎn)生特異性抗體，又能大量增殖。,2.單克隆抗體制備過程,B淋巴細胞 骨髓瘤細胞,誘導(dǎo)融合,B-B細胞,B-瘤細胞,瘤-瘤細胞,選擇培養(yǎng)基,雜交瘤細胞（

4、 B-瘤細胞）,克隆化培養(yǎng),抗體檢測,產(chǎn)生所需抗 體的雜交瘤 細胞,體外培養(yǎng),單克隆抗體,2.單克隆抗體制備過程圖解,（用箭頭和文字寫出概念圖）,知識自主構(gòu)建,提純,（討論歸納）,共有幾種細胞？,（1）為什么選用小鼠骨髓瘤細胞與B淋巴細胞融合?,小鼠骨髓瘤細胞可大量增殖， B淋巴細胞能產(chǎn)生抗體。,（2）骨髓瘤細胞是癌細胞嗎?,有無限增殖能力的細胞是腫瘤細胞， 具有轉(zhuǎn)移能力的腫瘤細胞，稱為癌細胞， 所以說，瘤細胞不能等于癌細胞。,感悟拓展,（3）整個制備過程為何要經(jīng)過兩次篩選?,第一次篩選得到雜交瘤細胞（多種）,第二次需先在多孔培養(yǎng)板上，在每孔只有 一個雜交瘤細胞的情況下開始培養(yǎng)，然后 再篩選出

5、能產(chǎn)生特異性抗體的細胞群。,3.單克隆抗體的應(yīng)用：,（1）作為診斷試劑：準確識別各種抗原物質(zhì)，并與抗原特異性結(jié)合,（2）用于,運載藥物：制成“生物導(dǎo)彈”,治療疾?。褐饕糜诎┌Y治療,優(yōu)點：準確、高效、簡易、快速,單克隆抗體的優(yōu)點：,優(yōu)點:療效高、毒副作用小,特異性強，靈敏度高，能大量制備。,（2013年 海南卷）31.(15分)單純皰疹病毒I型HSV-I)可引起水泡性口唇炎。利用雜交瘤技術(shù)制備出抗SV-1的單克隆抗體可快速檢測HSV-1?；卮鹣铝袉栴}：,(1)在制備抗HSV-I的單克隆抗體的過程中，先給小鼠注射一種純化的HSV-1蛋白，一段時間后，若小鼠血清中抗_ 的抗體檢測呈陽性，說明小鼠體

6、內(nèi)產(chǎn)生了_ 反應(yīng)，再從小鼠的_ _中獲取B淋巴細胞。將該B淋巴細胞與小鼠的_ _ 細胞融合，再經(jīng)過篩選、檢測，最終可獲得所需的雜交瘤細胞，該細胞具有的特點是_ 。：,HSV1蛋白,體液免疫,脾臟,無限增值且產(chǎn)生專一抗體,骨髓瘤,真題感悟,(2)若要大量制備抗該蛋白的單克隆抗體，可將該雜交瘤細胞注射到小鼠的_ 中使其增殖，再從_ _中提取、純化獲得。 (3)通過上述方法得到的單克隆抗體可準確地識別這種HSV-I蛋白，其原因是該抗體具有 _和_ _等特性。,腹腔,腹水,純度高,特異性強,2014新課標卷(第40題)（15分）某研究者用抗原（A）分別免疫3只同種小鼠（X、Y和Z），每只小鼠免疫5次，

7、每次免疫一周后測定各小鼠血清抗體的效價（能檢測出抗原抗體反應(yīng)的血清最大稀釋倍數(shù)），結(jié)果如下圖所示。,若要制備雜交瘤細胞，需取免疫后小鼠的B淋巴細胞（染色體數(shù)目40條），并將該細胞與體外培養(yǎng)的小鼠骨髓瘤細胞（染色體數(shù)目60條）按一定比例加入試管中，再加入聚乙二醇誘導(dǎo)細胞融合，經(jīng)篩選培養(yǎng)及抗體檢測，得到不斷分泌抗A抗體的雜交瘤細胞?；卮鹣铝袉栴}：,真題感悟,（1）制備融合所需的B淋巴細胞時，所用免疫小鼠的血清抗體效價需達到16000以上，則小鼠最少需要經(jīng)過 _ 次免疫后才能有符合要求的。達到要求后的X、Y、Z這3只免疫小鼠中，最適合用于制備B淋巴細胞的是 _小鼠，理由是_ _,4,Y,（2）細胞融

8、合完成后，融合體系中除含有未融合的細胞和雜交瘤細胞外，可能還有 ，體系中出現(xiàn)多種類型細胞的原因是 。 （3）雜交瘤細胞中有 個細胞核，染色體數(shù)目最多是 條。 （4）未融合的B淋巴細胞經(jīng)多次傳代培養(yǎng)后都不能存活，原因是 。,Y小鼠的血清抗體效價最高,骨髓瘤細胞相互融合形成的細胞,淋巴細胞相互融合形成的細胞,細胞融合是隨機的且融合率達不到100%,1,100,不能無限增殖,1.(2016河南名校測試）(1)單克隆抗體 制備過程中涉及的細胞工程技術(shù)有 _。 (2)單克隆抗體的特點是： _。,特異性強、靈敏度高、并可大量制備,動物細胞培養(yǎng)、動物細胞融合,高考仿真題練,(1)若A細胞是小鼠骨髓瘤細胞，則

9、B細胞是取自小鼠體內(nèi)的 細胞，從小鼠體內(nèi)提取分離該細胞之前，應(yīng)給小鼠注射_類物質(zhì)。 （2）d過程是一個_過程，該過程的進行常用_或_的誘導(dǎo)。 (3)假設(shè)僅考慮某兩個細胞的融合，則可形成 種類型的C細胞，因此需用_培養(yǎng)基篩選出D細胞用于培養(yǎng)，D細胞的名稱是 ，其特點是_。,效應(yīng)B,抗原,細胞融合,聚乙二醇 滅活的病毒,選擇性,3,既能無限增殖又能產(chǎn)生特異性抗體,雜交瘤細胞,2.(2015甘肅模擬)根據(jù)圖解回答問題：,(4)在培養(yǎng)時通過_分裂方式大量繁殖。D細胞體外培養(yǎng)需要注意的條件是（要求答5項）_。 （5）單克隆抗體在疾病的診斷、治療和預(yù)防方面，與常規(guī)抗體相比，其特點是_。,特異性強、靈敏度高,有絲,無菌、無毒的環(huán)境；充足的營養(yǎng)；適宜的溫度和pH；適宜的氣體環(huán)境,兩個過程,動物細胞融合過程,單克隆抗體制備過程,三個“一”,一個誘導(dǎo)細胞融合的新方法 滅活病毒,一個新細胞雜交瘤細胞,一個優(yōu)勢單克隆抗體特異性 強、靈敏度高的優(yōu)勢,課堂小結(jié),重點,課后作業(yè)：三維設(shè)計P104知命題熱點二、1,1、右圖為某同學(xué)根據(jù)雜交瘤技術(shù)的方法，設(shè)計的生產(chǎn)破傷風(fēng)桿菌抗體的實驗方案。據(jù)圖回答：（1）該方案能達