2013年最新高中生物精品教學(xué)課件：DNA的粗提取與鑒定(2)(人教版選修1).ppt

1、5.1 DNA的粗提取和鑒定，1，基礎(chǔ)知識，(1)提取DNA的方法，1。提取生物大分子的基本思維方式，選擇某種程度的物理或化學(xué)方法，分離其他物理或化學(xué)性質(zhì)的生物大分子，2。DNA提取的基本思考，DNA提取，其他成分去除，利用DNA DNA和蛋白質(zhì)等成分在濃度不同的NaCl溶液中溶解不同。利用牙齒特征選擇合適的鹽濃度，DNA就會完全溶解，雜質(zhì)沉淀?；蛉芙馄渌煞郑珼NA析出，3 .DNA等大分子的理化性質(zhì)，DNA不溶于酒精溶液，DNA不溶于酶、高溫、耐洗滌劑，DNA不溶于酒精溶液，但細(xì)胞中的某些蛋白質(zhì)溶于酒精。進(jìn)一步分離DNA和蛋白質(zhì)。DNA不溶于酒精溶液。DNA不影響酶、高溫、耐洗滌劑、蛋白質(zhì)

2、水解蛋白和DNA。高溫的大部分蛋白質(zhì)不能忍受6080，DNA是80以上的變性，洗滌劑溶解細(xì)胞膜，去除脂質(zhì)和蛋白質(zhì)，但對DNA沒有影響。試劑：(2)在DNA DNA中，二苯胺用藍(lán)色、沸水染色?，F(xiàn)象：(1)實(shí)驗(yàn)物質(zhì)的選擇；(2)破細(xì)胞，獲得含DNA的濾液；(3)濾液中雜質(zhì)的去除(精煉)；(4)DNA沉淀和鑒定魚卵；豬肝；雞血；哺乳動物的紅細(xì)胞；液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)的大腸桿菌可以選擇任何含有DNA的生物物質(zhì)DNA含量比較高的組織。從核DNA的數(shù)量來看，豬的38萬億，雞的78萬億，哺乳動物的0萬億，獼猴桃的58萬億，洋蔥的16萬億，豌豆的14萬億，菠菜的12萬億，大腸桿菌的1萬億。請選擇一個(gè)動植物材料。沒

3、有哺乳動物的血細(xì)胞核和細(xì)胞器。液體培養(yǎng)基中大腸桿菌的DNA楊怡減少。魚卵是減數(shù)分裂的產(chǎn)物。(b)碎細(xì)胞，含有DNA的過濾器，1，動物細(xì)胞，2，植物細(xì)胞，易碎，細(xì)胞膜應(yīng)溶解。雞血細(xì)胞溶液：加入一定量的蒸餾水，用玻璃棒攪拌，過濾后收集過濾器。想想為什么放蒸餾水做雞，蒸餾水是對雞血細(xì)胞的低滲透液體，水分牙齒大量進(jìn)入血細(xì)胞，使血細(xì)胞牙齒膨脹。加入混合作用，加速雞血細(xì)胞細(xì)胞膜，核膜破裂釋放DNA，加入洗滌劑和鹽，充分?jǐn)嚢?，研磨，過濾后收集研磨液，洗滌劑和鹽的作用分別是什么？洗滌劑離子洗滌劑溶解細(xì)胞膜，有助于DNA釋放食鹽NaCl，DNA溶解在研磨液中，研磨，粉碎細(xì)胞壁，釋放細(xì)胞核內(nèi)的DNA。缺乏研磨會減

4、少提取的DNA的楊怡，看不到絲綢沉淀物，用二苯胺看不到藍(lán)色等。，為了純化提取的DNA，需要進(jìn)一步處理過濾器。過濾器/研磨液中可能含有什么成分？答：可能含有核蛋白、多糖、RNA等雜質(zhì)。研磨的目的是什么，如果不充分研磨，會對實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生什么影響？1 .DNA的溶解性，2 .DNA中的酶、高溫、耐洗滌劑、(3)去除過濾器中的雜質(zhì)，方案2和方案3的原理有何不同？情景2:利用蛋白酶分解雜質(zhì)蛋白質(zhì)，將提取的DNA與蛋白質(zhì)分離。案例3:利用DNA和蛋白質(zhì)進(jìn)行高溫耐受性不同，將蛋白質(zhì)變性、DNA分離、(4) DNA的析出和鑒定、濾液體積等冷卻酒精溶液(體積分?jǐn)?shù)95)、23min停止，在溶液中以白色絲粗提取的D

5、NA用玻璃棒向一個(gè)方向混合。2.DNA的鑒定，在兩個(gè)試管中分別加入2mol/L NaCl溶液5ml。其中，在一個(gè)試管中放入DNA線，分別混合4毫升二苯胺試劑，然后放入沸水中加熱5min，冷卻，比較兩個(gè)試管中溶液的顏色變化，觀察現(xiàn)象。溶解史溶液加入藍(lán)色，檸檬酸鈉溶液的目的是防止血凝。溶解DNA，將2mol/L的NaCl溶液稀釋為0.14mol/L，使DNA最大限度地釋放，在沒有藍(lán)色的情況下提取的DNA含量低，或者在實(shí)驗(yàn)工作中可能發(fā)生錯(cuò)誤。再準(zhǔn)備，4，評估專題結(jié)果，(1)是否提取DNA，練習(xí)，1，說明提取DNA的實(shí)驗(yàn)工作中主要步驟的目的。答：提取DNA的第一步是選擇DNA含量高的生物材料。否則，在

6、實(shí)驗(yàn)中，在一定程度上丟失會使檢測變得困難。第二階段是DNA的釋放和溶解。牙齒階段是實(shí)驗(yàn)成功與否的關(guān)鍵。應(yīng)該盡可能溶解細(xì)胞內(nèi)的所有DNA。第三步是根據(jù)DNA的純化，即DNA的溶解特性、酶和耐高溫性的不同特性，盡可能地分離DNA和雜質(zhì)。最后一步是鑒定檢查整個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的DNA。2，你認(rèn)為從細(xì)胞中提取某些蛋白質(zhì)和提取DNA一樣容易嗎？答：蛋白質(zhì)提取比DNA提取難。這是因?yàn)榕cDNA相比，蛋白質(zhì)對溫度、鹽濃度、pH等條件更加敏感，很容易被停用。另外，由于蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu)多樣，理化性質(zhì)不同，蛋白質(zhì)提取沒有統(tǒng)一的方法，只能根據(jù)特定蛋白質(zhì)的特性摸索提取條件，設(shè)計(jì)特定的方法。2 .實(shí)驗(yàn)中NaCl的物質(zhì)濃度對2 molL和0.14 molL牙齒DNA有何影響？1 .在DNA粗提取實(shí)驗(yàn)過程中，將蒸餾水兩次放在燒杯中的作用是()。A .血液稀釋，樣品清洗B .血細(xì)胞破裂，NaCl濃度降低，DNA