《魚類急性毒性實驗》PPT課件.ppt

1、魚類的急性毒性實驗,制作人：蔡浩 協(xié)作者：李目，李行,監(jiān)測0936生物監(jiān)測課程第四組,Company Logo,目錄,Company Logo,通過本實驗，熟悉和掌握魚類急性毒性試驗的設(shè) 計、條件、操作步驟，以及試驗結(jié)果的計算、分析 和報告等全過程。,目的與要求,Company Logo,魚類對水環(huán)境的變化反應(yīng)十分靈敏，當(dāng)水體中的污染物達到一定程度時，就會引起一系列中毒反應(yīng)，例如行為異常、生理功能紊亂、組織細胞病變、直至死亡。在規(guī)定的條件下，使魚接觸含不同濃度受試物的水溶液，實驗至少進行24h，最好以96 h為一個實驗周期，在24h、48h、72h、96h時記錄實驗魚的死亡率，確定魚類死亡50

2、時的受試物濃度。魚類毒性試驗在研究水污染及水環(huán)境質(zhì)量中占重要地位。通過魚類急性毒性試驗可以評價受試物對水生生物可能產(chǎn)生的影響，以短期暴露效應(yīng)表明受試物的毒害性。魚類急性毒性試驗不僅用于測定化學(xué)物質(zhì)毒性強度、測定水體污染程度、檢查廢水處理的有效程度，也為制定水質(zhì)標(biāo)準、評價環(huán)境質(zhì)量和管理廢水排放提供環(huán)境依據(jù)。,實驗原理,Company Logo,1實驗魚的選擇、收集與馴養(yǎng) 試驗用的魚必須對毒物敏感，具有一定的代表性，便于實驗條件下飼養(yǎng)，來源豐富，個體健康。我國可采用的試驗魚有四大養(yǎng)殖淡水魚（青魚、草魚、鰱魚和鳙魚）、金魚、鯽魚、野生的食蚊魚等。 在同一實驗中要求試驗魚必須同屬、同種、同齡、同大小。

3、最好是當(dāng)年生。魚的平均體長以不超過57cm為合適。金魚體短、身寬，一般以3cm較為合適。同組魚中最大的體長不應(yīng)超過最小的體長的1.5倍。,實驗材料,注意：在毒性實驗報告中，魚類名稱要使用正式種名，即拉丁學(xué)名。,Company Logo,選用的試驗魚在試驗前必須在實驗室內(nèi)經(jīng)過馴養(yǎng)，使之適應(yīng)實驗室條件的生活環(huán)境和進行健康選擇。馴養(yǎng)魚應(yīng)該與試驗相同水質(zhì)水溫的水體中至少馴養(yǎng)7d，使其適應(yīng)試驗環(huán)境，不應(yīng)長期養(yǎng)殖（2個月）。馴養(yǎng)期間，應(yīng)每天換水，可每天喂食1-2次，但在試驗前一天應(yīng)停止喂食，以免試驗時，剩余餌料及糞便影響水質(zhì)。馴養(yǎng)期間試驗魚死亡率不得超過5，否則，可以認為這批魚不符合試驗魚的要求，應(yīng)該繼續(xù)

4、馴養(yǎng)或者重新更換試驗魚進行馴養(yǎng)。 試驗前必須挑選健康的魚，即選擇體色光澤、魚鰭完整舒展、行動活潑、逆水性強、大小無太大懸殊、無任何疾病的魚作為試驗魚。任何畸形魚、外觀上反常態(tài)的魚都不得作試驗魚。,Company Logo,2實驗儀器設(shè)備 （1）實驗容器 實驗容器一般用玻璃或其他化學(xué)惰性材質(zhì)制成的水族箱或水槽。容器體積可根據(jù)試驗魚的體重確定，通常以每升水中魚的負荷不得超過2g（最好為1g）。一些小型魚類幼魚可選擇500mL或 1000mL燒杯為實驗容器。容器的深度必須超過16cm，水體表面積越大越好。同一實驗應(yīng)采用相同規(guī)格和質(zhì)量的容器。為防止魚類跳出容器，可在容器上加上網(wǎng)罩。實驗容器使用后，必須

5、徹底洗凈，以除去所有毒性殘留物。我們用到的是大型水桶，水規(guī)格是40L。 （2）其他 溶解氧測定儀、水硬度計、溫度控制儀、pH計、分析天平。,Company Logo,3實驗用水（稀釋水）及水質(zhì)條件 用來馴養(yǎng)和配置實驗液的水，必須是未受污染的清潔水。一般可采用天然河水、湖水或地下水，但需過濾以除去大的懸浮物質(zhì)。也可用自來水代替，但必須進行人工曝氣或放置3d以上脫氯。如果試驗?zāi)康氖窃u價工業(yè)廢水或化學(xué)物質(zhì)對接納水體的影響時，則最好采用接納水體的污染源上游水作為試驗用稀釋水。蒸餾水不適合做稀釋水，因為蒸餾水中已除去了自然界水中的鹽類，與實際差距太大，另外由于蒸餾器的影響，有時使蒸餾水中帶有對魚類不利的

6、金屬離子，影響試驗結(jié)果。,Company Logo,實驗用水的水質(zhì)條件一般是指水的溫度、pH、溶解氧、硬度、水中的有機物和水量等。 （1）水溫 實驗中應(yīng)保持魚類原來的適應(yīng)溫度，一般冷水魚在1218，溫水魚在2125。為使得實驗結(jié)果可靠，在同一實驗中，溫度的波動范圍不要超過2（即1）。冬天可以通過加熱室內(nèi)的空氣溫度而達到調(diào)節(jié)水溫的目的，也可以采用電熱棒直接控制調(diào)節(jié)水溫。,Company Logo,（2）pH 水的pH與水生生物的代謝作用有密切關(guān)系。對毒物的毒性作用也有一定的影響。因此，在實驗中應(yīng)維持pH在魚類適宜范圍內(nèi)。一般實驗液的pH在6.08.5為宜。如需調(diào)節(jié)pH，可用1M或0.1M的HCl

7、和NaOH來調(diào)節(jié)受試物貯備液的pH。調(diào)節(jié)貯備液的pH時不能使受試物濃度明顯改變，或發(fā)生化學(xué)反應(yīng)或沉淀。 （3）溶解氧 溶解氧是魚類生存的必要條件，它能影響魚類對毒物的敏感性。一般溫水魚要求溶解氧在4mg/L以上，冷水魚要求溶解氧在 5mg/L以上，每日光照1216h。 （4）硬度 水的總硬度為 19250 mg/L（以CaCO3計）。,Company Logo,1預(yù)實驗 用確定正式實驗所需濃度范圍，可選擇較大范圍的濃度系列，如1000mg/L、100mg/L、10mg/L、1mg/L、0.1mg/L。每個濃度放入五條魚，可用靜態(tài)方式進行，不設(shè)平行組，試驗持續(xù)4896h。每日至少兩次記錄各容器內(nèi)

8、的死魚數(shù)，并及時取出死魚。求出24h100死亡濃度和96h無死亡濃度。 如果依次預(yù)試驗結(jié)果無法確定正式試驗所需的濃度范圍，應(yīng)另選一濃度范圍再次進行預(yù)試驗。,Company Logo,2正式實驗 根據(jù)預(yù)試驗得出的結(jié)果，在包括使魚全部死亡的最低濃度和96 h魚類全部存活的最好濃度之間至少設(shè)置5個濃度組，并以幾何級數(shù)排布。濃度間隔系數(shù)應(yīng)2.2。 每個試驗濃度組應(yīng)至少設(shè)23個平行，每一系列設(shè)一個空白對照。如使用了助溶劑，應(yīng)增設(shè)溶劑對照組，其濃度與試劑中的最高溶劑濃度相同。試驗魚的數(shù)目以每組（濃度組和對照組）至少7尾合適，建議取10尾。 試驗溶液調(diào)節(jié)至相應(yīng)溫度后，從馴養(yǎng)魚群中隨即取出魚并隨機迅速放入各試

9、驗容器中。轉(zhuǎn)移期間處理不當(dāng)?shù)聂~均應(yīng)棄除。同一試驗，所有試驗用魚應(yīng)30min內(nèi)分組完畢。,Company Logo,在24h、48h、72h、96h后檢查受試魚的狀況。如果沒有任何肉眼可見的運動，如鰓的扇動、碰觸尾柄后無反應(yīng)等，即可判斷該魚已死亡。觀察并記錄死魚數(shù)目后，將死魚從容器中取出。應(yīng)在試驗開始后3h或6h觀察各處理組魚的狀況，并記錄試驗魚的異常行為（如魚體側(cè)翻、失去平衡，游泳能力和呼吸能力減弱，色素沉積等）。 試驗開始和結(jié)束時要測定pH、溶解氧和溫度。試驗期間，每天至少測定一次。 至少在試驗開始和結(jié)束時，測定實驗容器中試驗液的受試物濃度。 試驗結(jié)束時，對照組的死亡率不得超過10。,Com

10、pany Logo,1數(shù)據(jù)處理 以暴露濃度為橫坐標(biāo)，死亡率為縱坐標(biāo)，在計算機或?qū)?shù)概率紙上，繪制暴露濃度對死亡率的曲線。用直線內(nèi)插法或常用統(tǒng)計程序計算出 24h、48h、72h、96h的半致死濃度（LC50）值，并計算95的置信限。 如果試驗數(shù)據(jù)不適于計算LC50，可用不引起死亡的最高濃度和引起100死亡的最低死亡濃度估算LC50的近似值，即這兩個濃度的集合平均值。,Company Logo,2化學(xué)物質(zhì)急性毒性分級 依據(jù)LC50值的大小，可以將化學(xué)物質(zhì)的急性毒性分為劇毒、高毒、中等毒、低毒和微毒5級，如實驗表3-1所示。,實驗表3-1 魚類急性毒性實驗毒性分級標(biāo)準,Company Logo,3編寫報告 在實驗報告中應(yīng)包括：試驗名稱、目的、試驗原理、試驗的準確起止日期，還有如下幾項： （1）試驗魚的種名、來源、體重、體長、健康和馴化狀況。 （2）受試物質(zhì)名稱、來源物化性質(zhì)和保存方法。 （3）實驗用水的來源、物化性質(zhì)和實驗前的處理等。 （4）實驗溶液的濃度與配置方法、實驗溫度。 （5）實驗條件，如容器形式、實驗液的體積與深度、受試生物數(shù)目及負荷率。 （6）實驗開始后24h、48h、72h、96h時的LC50值，及其毒性分級。,Company Log