化學(xué)發(fā)光原理和應(yīng)用.ppt

1、化學(xué)發(fā)光免疫分析,臨床檢驗常見類別,血液/體液常規(guī)檢測,免疫,生化,微生物,放射性免疫檢測,酶聯(lián)免疫檢測,金標(biāo)免疫檢測,化學(xué)發(fā)光檢測,直接化學(xué)發(fā)光,酶促化學(xué)發(fā)光,電化學(xué)發(fā)光,臨床檢驗,定量,半定量,免疫定量檢測原理,血液（尿液）中有很多含量非常低（pg/ml、ng/ml 、 mg/ml），但非常靈敏，其濃度變化能準(zhǔn)確反映人體疾病的發(fā)生、發(fā)展?fàn)顩r。如： T3、T4、AFP、肌鈣等等 【生化：檢測含量比較高的物質(zhì)】 準(zhǔn)確、定量 【酶標(biāo)法、金標(biāo)法：定性、半定量】,免疫標(biāo)記技術(shù)發(fā)展歷程,放射免疫 優(yōu)點：準(zhǔn)確、定量，項目齊全 缺點：放射性污染 試劑有效期短（一個月） 操作繁瑣、時間2小時左右,磁酶免 半

2、自動化學(xué)發(fā)光 時間分辨 優(yōu)點：沒有放射性污染，試劑有效期長（6個月以上） 缺點：操作繁瑣，2小時有結(jié)果，準(zhǔn)確性差,免疫標(biāo)記技術(shù)發(fā)展歷程,全自動化學(xué)發(fā)光 優(yōu)點： 沒有放射性污染 試劑有效期長（6個月以上） 操作全自動 速度快，半小時出結(jié)果 結(jié)果最準(zhǔn)確 缺點： 試劑價格貴,免疫標(biāo)記技術(shù)發(fā)展歷程,？,全自動化學(xué)發(fā)光主要品牌,化學(xué)發(fā)光主要技術(shù),包被技術(shù)： 板式化學(xué)發(fā)光 ： 固液相 5%參加反應(yīng) (時間分辨) （定性 定量不準(zhǔn)） 磁顆?；瘜W(xué)發(fā)光 ： 準(zhǔn)均相 95%參加反應(yīng) （精確 定量）,發(fā)光原理： 直接化學(xué)發(fā)光 標(biāo)記物在堿性（酸性）條件下，加強(qiáng)氧化劑，瞬間發(fā)光 廠家由10個點做成標(biāo)準(zhǔn)曲線，用戶只要高低

3、兩點定標(biāo)修正曲線即可，節(jié)省試劑，結(jié)果穩(wěn)定、準(zhǔn)確 酶促化學(xué)發(fā)光 標(biāo)記物在酶催化下，緩慢發(fā)光 由于酶不穩(wěn)定，每次都必須用6-12個點做標(biāo)準(zhǔn)曲線，浪費試劑,化學(xué)發(fā)光主要技術(shù),經(jīng)過清洗和分離后，在反應(yīng)杯中先后加入激發(fā)底物1和激發(fā)底物2，引發(fā)化學(xué)發(fā)光反應(yīng)，產(chǎn)生光信號。 儀器測定后顯示相對光強(qiáng)度(RLU)值，最后根據(jù)工作曲線計算待測物濃度。,夾心法,免疫定量檢測原理,免疫定量檢測原理,夾心法,樣本,ABEI標(biāo)記物,FITC標(biāo)記物和磁珠加入到反應(yīng)杯中，溫浴15分鐘*,形成“夾心三明治”免疫復(fù)合物，并被磁珠俘獲。,在夾心法中，待測物濃度和樣本RLU值成正相關(guān) 此時主曲線單調(diào)遞增,免疫定量檢測原理,免疫定量檢測

4、原理,RLU,0,Con.,50,500,A,B,C,D,E,F,G,H,I,J,主曲線的繪制：十點定標(biāo),競爭法,磁珠,樣本，ABEI標(biāo)記物,FITC標(biāo)記物和磁珠加入到反應(yīng)杯中，溫浴15分鐘*,ABEI標(biāo)記抗原，和樣本待測抗原競爭結(jié)合FITC標(biāo)記的抗體，2種產(chǎn)物同時被磁珠俘獲。,免疫定量檢測原理,經(jīng)過清洗和分離后，在反應(yīng)杯中先后加入激發(fā)底 物1和激發(fā)底物2，引發(fā)化學(xué)發(fā)光反應(yīng)，產(chǎn)生光信號。 儀器測定后顯示相對光強(qiáng)度(RLU)值，最后根據(jù)工作曲線計算待測物濃度。,競爭法,免疫定量檢測原理,在競爭法中，待測物濃度和樣本RLU值成負(fù)相關(guān) 此時主曲線單調(diào)遞減,免疫定量檢測原理,*兩點定標(biāo)原理,Cal1,

5、Cal2,主曲線,定標(biāo)曲線,C01,C02,1%=,Rf|C1-C01|,Rf C1,*100%,線性補(bǔ)償曲線,免疫定量檢測原理,發(fā)光標(biāo)志物 ABEI,在酸堿溶液里都非常穩(wěn)定,獨家專利 ABEI,化學(xué)品名稱: N-(4-氨基丁基)-N-乙烷基異魯米諾 N-(4-Aminobutyl)-N-ethylisoluminol 分子式: C14H20N4O2 分子量： 276.33,+ NaOH + H2O2 ABEI 激發(fā)底物1 激發(fā)底物2 發(fā)光 (持續(xù)測量3秒),發(fā)光信號產(chǎn)生及測量,ABEI直接化學(xué)發(fā)光,發(fā)光標(biāo)志物 ABEI,delay 2.5s,delay 0.1s,發(fā)光標(biāo)志物 ABEI,納米磁

6、珠：由聚合物交聯(lián)構(gòu)成骨架，包裹納米級鐵氧化物形成的微米級的小球,納米級鐵氧化物賦予磁性微球超順磁性,在磁場中迅速被磁化并增強(qiáng)磁場，從而可以快速聚集而從液相中分離。 外部磁場消失后恢復(fù)到初始狀態(tài)，沒有剩磁，可以重新分散開,利于清洗。,納米免疫磁性微珠,(專利技術(shù)),磁球表面有大量活性基團(tuán)，在適當(dāng)條件下可以和各種分子以穩(wěn)定的化學(xué)鍵結(jié)合。 根據(jù)標(biāo)記物的不同，可以廣泛應(yīng)用于診斷領(lǐng)域。,MALGUMI系統(tǒng)中，我們可以在磁球上標(biāo)記FITC抗體，作為通用的分離工具。 也可以根據(jù)需要直接標(biāo)記其他特定的抗原或抗體，作為特殊項目中的分離手段。,納米免疫磁性微珠,納米免疫磁性微珠,磁珠擴(kuò)增了抗原抗體反應(yīng)面積，從而提

7、高反應(yīng)效率，縮短了反應(yīng)時間 更快更充分的捕獲抗原抗體從而提高了靈敏度 作為液相分離平臺，與試劑充分混合后顯著的減少批內(nèi)和批間差異 通過化學(xué)鍵作用標(biāo)記抗原或抗體增強(qiáng)了準(zhǔn)確性。,性能優(yōu)點,MAGLUMI 1000,全自動化學(xué)發(fā)光免疫分析儀,MAGLUMI 2000,全自動化學(xué)發(fā)光免疫分析儀,MAGLUMI 2000 Plus,全自動化學(xué)發(fā)光免疫分析儀,MAGLUMI 4000,全自動化學(xué)發(fā)光免疫分析儀,超級POCT MAGLUMI 600,測試速度:180TH； 第一個結(jié)果時間：12分鐘； 一次可裝載16個樣本，可隨時添加樣本； 一次性可裝載4個試劑盒，可隨時連續(xù)裝載、替換； 一次可裝載60個反應(yīng)

8、杯,全自動化學(xué)發(fā)光免疫分析儀,全自動化學(xué)發(fā)光免疫分析儀,精美、簡練的外觀M2000,M2000機(jī)器分解圖,全自動化學(xué)發(fā)光免疫分析儀,樣本倉, 144個標(biāo)本位，可隨時添加，急診優(yōu)先 條形碼識別，抽血管、放免管等都可 樣本稀釋比例任意設(shè)定，自動稀釋高滴度樣本,全自動化學(xué)發(fā)光免疫分析儀,試劑區(qū), 15/25個試劑位，可隨時連續(xù)裝載、調(diào)換試劑盒 采用射頻識別技術(shù)讀取試劑盒信息，讀取速度 試劑區(qū)冷藏（8-12），獨立供電 帶磁球自動懸浮系統(tǒng),全自動化學(xué)發(fā)光免疫分析儀,采樣針,雙針，分別加試劑和樣本 內(nèi)外壁清洗，針外壁特氟龍包 被，杜絕交叉污染 液面探測、凝塊檢測功能,全自動化學(xué)發(fā)光免疫分析儀,一次可裝載

9、720個反應(yīng)杯 檢測過程中，可隨時連續(xù)裝載,反應(yīng)杯加載存儲器,全自動化學(xué)發(fā)光免疫分析儀,樣本編輯模式, 正常模式：病人ID號從條形碼上讀取,項目手動輸入； 快速模式：軟件自動生成病人ID號，項目手動輸入； 聯(lián)網(wǎng)模式：病人ID號條形碼讀取，項目從Lis系統(tǒng)獲取。,全自動化學(xué)發(fā)光免疫分析儀,試劑盒,試劑盒自帶標(biāo)準(zhǔn)品，兩點定標(biāo)修正主曲線 集成試劑盒設(shè)計，無需試劑預(yù)處理，即開即用 射頻識別技術(shù)，試劑的所有信息儲存在高頻電子標(biāo)簽上 更新、增加新項目無需對軟件升級，方便快捷,全自動化學(xué)發(fā)光免疫分析儀,軟件系統(tǒng),中、英、西班牙文界面、報告軟件 真正實現(xiàn)人機(jī)對話 智能報警,全自動化學(xué)發(fā)光免疫分析儀,M1000

10、 與 M2000的比較,1.無層存儲器 2. 一次可裝載192個反應(yīng)杯 3.單臂單針設(shè)計 4.120測試/小時,1.有層存儲器 2.一次可裝載720個反應(yīng)杯 3.雙臂雙針設(shè)計，分別加試 劑和樣本 4.180測試/小時,全自動化學(xué)發(fā)光免疫分析儀,M2000 與 M2000P的比較,1.臺式 2.15個試劑位 3.樣本區(qū)無冷藏功能,1.立式，帶儲藏柜 2.25個試劑位 3.樣本區(qū)有冷藏功能,全自動化學(xué)發(fā)光免疫分析儀,M2000P 與 M4000的比較,1.180測試/小時,1.280測試/小時,全自動化學(xué)發(fā)光免疫分析儀,反應(yīng)杯,溫育,測量,廢棄物,加樣,清洗,M2000硬件介紹,全自動化學(xué)發(fā)光免疫

11、分析儀,反應(yīng)杯,溫育,測量,加樣,清洗,M2000硬件介紹,全自動化學(xué)發(fā)光免疫分析儀,廢棄物,新產(chǎn)業(yè)與同行產(chǎn)品對比,新產(chǎn)業(yè)化學(xué)發(fā)光優(yōu)點,試劑項目多，100個已注冊項目，rT3、TRab、肝纖、CA50、CA242、SCCA、CA724、211、NSE、S-100 IAA、GAD65、IGF-1、醛固酮、血管緊張素、PCT、甘膽酸、FE3、肌鈣蛋白I、腦鈉肽、D-二聚體、25（OH）VD、TORCH、EB病毒、乙肝兩對半定量、丙肝等等。 180個測試/小時，第一個測試17分鐘，以后每分鐘3個測試 故障率低，試劑通過衛(wèi)生部室間質(zhì)評 試劑價格低、質(zhì)控品、標(biāo)準(zhǔn)品免費,磁顆粒、管式直接化學(xué)發(fā)光,Thyr

12、oid 甲狀腺 T3 三碘甲狀腺原氨酸 T4 四碘甲狀腺原氨酸 FT3 游離三碘甲狀腺原氨酸 FT4 游離四碘甲狀腺原氨酸 RT3 反三碘甲狀腺原氨酸 TRAB 促甲狀腺受體抗體 TGA 甲狀腺球蛋白抗體 TMA 甲狀腺微粒體抗體 TG 甲狀腺球蛋白 TSH (3rd Gen) 促甲狀腺激素(第三代超敏),項目菜單細(xì)則,甲亢、甲減 、自身免疫性甲狀腺疾病的診斷 ; 新生兒甲減檢查,項目菜單細(xì)則,Fertility 生育 FSH 促卵泡激素 LH 黃體生成素 PRL 催乳素 E2 雌二醇 PRG 孕酮 TEST 睪酮 F-TEST 游離睪酮 HCG/-HCG 絨毛膜促性腺激素 B-HCG 絨毛膜

13、促性腺激素B亞單位 FE3 游離雌三醇 PAPP-A 妊娠相關(guān)血漿蛋白 DHEA-S 脫氫表雄酮,卵巢性閉經(jīng)和垂體/下丘腦性閉經(jīng)、多囊卵巢綜合癥、男性性功能、青春期前兒童性早熟、孕檢、預(yù)測排卵,Metabolism 糖代謝 C-Peptide C-肽 Insulin 胰島素 Pro Insulin 胰島素原 IAA 抗人胰島素抗體 GAD 65 谷氨酸脫羧酶抗體 IGF-1 胰島素樣生長因子1 ICA 抗胰島細(xì)胞抗體 糖尿病的病因、分型、診斷及監(jiān)測； 妊娠期高血壓檢測,項目菜單細(xì)則,Tumor Makers 腫瘤標(biāo)志物 AFP 甲胎蛋白 CEA 癌胚抗原 Ferritin 鐵蛋白 TPA 組織

14、多肽抗原 PAP 前列腺酸性磷酸酶 PSA 前列腺特異性抗原 F-PSA 游離前列腺特異性抗原 CA125 糖類抗原125,項目菜單細(xì)則,Tumor Makers 腫瘤標(biāo)志物 CA153 糖類抗原153 CA199 糖類抗原199 CA50 糖類抗原50 CA242 糖類抗原242 CA724 糖類抗原724 CYFRA211 細(xì)胞角蛋白十九片段 NSE 神經(jīng)元特異性烯醇化酶 Stangtec-100 Stangec-100蛋白質(zhì) SCCA 鱗狀細(xì)胞癌相關(guān)抗原 Pepsinogen 胃蛋白酶 Pepsinogen 胃蛋白酶,項目菜單細(xì)則,部分疾病腫瘤標(biāo)志物選擇順序 肝 AFP CEA 結(jié)/直腸

15、 CEA CA19-9 CA50 胰腺 CA19-9 CEA CA50 胃 CA724 CEA CA19-9 食道 CEA CA19-9 CA724 CA50 SCCA 肺 SYFRA211 NSE CA50 CEA CA19-9 SCCA 乳腺 CA15-3 CA125 CEA 卵巢 CA125 AFP -HCG CEA 子宮 SCCA -HCG 前列腺 fPSA PSA PAP,項目菜單細(xì)則,Hepatic 肝纖維化 HA，Hyaluronic Acid 透明質(zhì)酸 PIIIP N-P III型前膠原N肽 CIV，Collagen IV IV型膠原蛋白 LN，Laminin 層粘連蛋白 CG

16、，Glycocholic Acid 甘膽酸 肝纖維化的程度，隨著慢遷移肝慢活肝肝硬化肝癌 病程演變，在血中的含量逐步升高； 妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥檢測,項目菜單細(xì)則,Kidney Function 腎功能 2-MG 2微球蛋白 H-ALB 人尿微量白蛋白 腎臟疾病的判斷 、腎臟移植檢測,項目菜單細(xì)則,Bone Metabolism 骨代謝 PTH 甲狀旁腺素 CT 降鈣素 BGP 骨鈣素 25-OH Vitamin D（total） 25-羥基維生素D（總） 高、低鈣血癥 、骨損傷后骨質(zhì)合成、骨質(zhì)疏松 ； VD在骨外，心血管系統(tǒng)疾病、糖尿病、腫瘤方面、 免疫系統(tǒng)疾病中的作用,項目菜單細(xì)則,Pre

17、natal Screening 產(chǎn)前篩查 AFP 甲胎蛋白 Free-B-HCG 游離絨毛膜促性腺激素B亞單位 PAPP-A 妊娠相關(guān)蛋白 唐氏(Downs)綜合征和開放神經(jīng)管缺陷的產(chǎn)前篩查,項目菜單細(xì)則,Cardiac 心血管及心肌標(biāo)志物 TroponinI 肌鈣蛋白I Myoglobin 肌紅蛋白 CK-MB 肌酸激酶同工酶 ALD 醛固酮 A I 血管緊張素I A II 血管緊張素II NT-proBNP 腦自然肽N端前體蛋白 D-Dimer D-二聚體 心肌梗死、心力衰竭、高血壓的診斷，血栓和溶栓治療,項目菜單細(xì)則,Inflammation Monitoring 炎癥監(jiān)測 PCT 降鈣

18、素原 CRP C反應(yīng)蛋白 細(xì)菌性和病毒性感染鑒別 抗生素應(yīng)用指導(dǎo) 器官、骨髓移植患者的術(shù)后感染監(jiān)測,項目菜單細(xì)則,Immunoglobulin 免疫球蛋白 IgG 人免疫球蛋白IgG IgM 人免疫球蛋白IgM IgE 人免疫球蛋白IgE IgA 人免疫球蛋白IgA 類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的鑒別，過敏性疾病 及一些免疫性疾病檢測,項目菜單細(xì)則,Drug Monitoring 藥物檢測 Digoxin 地高辛 Cyclosporine A 環(huán)包霉素 A FK506 他克莫司 用于器官移植的排斥反應(yīng)監(jiān)測，指導(dǎo)治療，提高存活率,項目菜單細(xì)則,TORCH TOXO IgG 弓形蟲IgG TOXO IgM 弓形蟲IgM Rubella IgG 風(fēng)疹病毒IgG Ruballa IgM 風(fēng)疹病毒IgM CMV IgG 巨細(xì)胞病毒IgG CMV IgM