實(shí)驗(yàn)五醋酸纖維素膜電泳

1、實(shí)驗(yàn)五 血清蛋白的醋酸纖維薄膜電泳,一、基本原理,（一）電泳的定義 帶電顆粒在電場(chǎng)的作用下向著與其電性相反的電極方向移動(dòng)，這種現(xiàn)象稱之為電泳(electrophoresis，簡(jiǎn)稱EP)。 （二）基本原理 帶電粒子在電場(chǎng)中運(yùn)動(dòng)，是物質(zhì)的一種運(yùn)動(dòng)現(xiàn)象。電泳技術(shù)就是根據(jù)各種帶電粒子在電場(chǎng)中遷移速度的不同而對(duì)物質(zhì)進(jìn)行分離的實(shí)驗(yàn)技術(shù)。 生物大分子在電場(chǎng)中移動(dòng)的速度決定于它的分子形狀、相對(duì)分子質(zhì)量大小、分子的帶電性質(zhì)及數(shù)目，還與分離介質(zhì)的阻力、溶液粘度及電場(chǎng)強(qiáng)度等因素有關(guān)。,蛋白質(zhì)是兩性電解質(zhì)，其在等電點(diǎn)時(shí)呈電中性狀態(tài)，在電場(chǎng)中既不向負(fù)極移動(dòng)，也不向正極移動(dòng)。 血清中各種蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)多低于pH7.4，因

2、此在pH比其等電點(diǎn)高的緩沖液(pH8.6)中，它們都解離成負(fù)離子，在電場(chǎng)中向正極移動(dòng)。因?yàn)楦鞣N血清蛋白等電點(diǎn)不同(故而在同樣pH值下帶電荷數(shù)不同)以及分子量不同，因而在電場(chǎng)中的移動(dòng)速度不同。 蛋白質(zhì)分子小而帶電荷多者，移動(dòng)速度較快；分子大而帶電荷少者泳動(dòng)速度較慢。 據(jù)此原理可利用醋酸纖維薄膜電泳將血清蛋白分為清蛋白、1-球蛋白、2-球蛋白、-球蛋白及-球蛋白等5條區(qū)帶。,（一）電泳準(zhǔn)備 1.將醋酸纖維薄膜切成2cm寬、8cm長(zhǎng)的小條。 2.浸泡：將薄膜有光澤面向下漂浮于緩沖液中，浸泡510min，待膜完全浸透后，取出輕輕夾于濾紙中，吸去多余的溶液。 3.點(diǎn)樣：在無光澤面距一端約1cm處，用點(diǎn)樣器(或較細(xì)而尖端光滑的微量吸管)取血清約23l，進(jìn)行點(diǎn)樣。 4.上槽：待血清吸入膜后，以無光澤面向下、兩端緊貼在濾紙橋上(加血清的一端貼在電泳槽陰極端，切勿使點(diǎn)樣處與電泳槽接觸)，加蓋，平衡23min，然后通電。,二、基本操作,（二）電泳 電壓約100160V，時(shí)間3060min （三）染色及漂洗 電泳完畢后，關(guān)閉電源，將膜取出，直接浸于氨基黑染色液中23min。然后取出用漂洗液浸洗脫色，至背景完全無色為止。,1電泳圖譜不齊：點(diǎn)樣時(shí)血清滴加不均； 2電泳圖譜出現(xiàn)條痕：點(diǎn)樣后薄膜過干，或由于電泳槽密閉性不良，或電流過大造成水分蒸發(fā)，薄膜干燥； 3分離不良：標(biāo)本滴加過多； 4區(qū)帶拖尾