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文檔簡介

1、實驗五 血清蛋白的醋酸纖維薄膜電泳,一、基本原理,（一）電泳的定義 帶電顆粒在電場的作用下向著與其電性相反的電極方向移動，這種現(xiàn)象稱之為電泳(electrophoresis，簡稱EP)。 （二）基本原理 帶電粒子在電場中運動，是物質的一種運動現(xiàn)象。電泳技術就是根據(jù)各種帶電粒子在電場中遷移速度的不同而對物質進行分離的實驗技術。 生物大分子在電場中移動的速度決定于它的分子形狀、相對分子質量大小、分子的帶電性質及數(shù)目，還與分離介質的阻力、溶液粘度及電場強度等因素有關。,蛋白質是兩性電解質，其在等電點時呈電中性狀態(tài)，在電場中既不向負極移動，也不向正極移動。 血清中各種蛋白質的等電點多低于pH7.4，因

2、此在pH比其等電點高的緩沖液(pH8.6)中，它們都解離成負離子，在電場中向正極移動。因為各種血清蛋白等電點不同(故而在同樣pH值下帶電荷數(shù)不同)以及分子量不同，因而在電場中的移動速度不同。 蛋白質分子小而帶電荷多者，移動速度較快；分子大而帶電荷少者泳動速度較慢。 據(jù)此原理可利用醋酸纖維薄膜電泳將血清蛋白分為清蛋白、1-球蛋白、2-球蛋白、-球蛋白及-球蛋白等5條區(qū)帶。,（一）電泳準備 1.將醋酸纖維薄膜切成2cm寬、8cm長的小條。 2.浸泡：將薄膜有光澤面向下漂浮于緩沖液中，浸泡510min，待膜完全浸透后，取出輕輕夾于濾紙中，吸去多余的溶液。 3.點樣：在無光澤面距一端約1cm處，用點樣器(或較細而尖端光滑的微量吸管)取血清約23l，進行點樣。 4.上槽：待血清吸入膜后，以無光澤面向下、兩端緊貼在濾紙橋上(加血清的一端貼在電泳槽陰極端，切勿使點樣處與電泳槽接觸)，加蓋，平衡23min，然后通電。,二、基本操作,（二）電泳 電壓約100160V，時間3060min （三）染色及漂洗 電泳完畢后，關閉電源，將膜取出，直接浸于氨基黑染色液中23min。然后取出用漂洗液浸洗脫色，至背景完全無色為止。,1電泳圖譜不齊：點樣時血清滴加不均； 2電泳圖譜出現(xiàn)條痕：點樣后薄膜過干，或由于電泳槽密閉性不良，或電流過大造成水分蒸發(fā)，薄膜干燥； 3分離不良：標本滴加過多； 4區(qū)帶拖尾

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