生物樣品分析測定.ppt

1、第一節(jié) 概述 生物藥物分析的對象藥物所到之生物體的體液、器官、組織、排泄物等。 生物藥物分析的目標(biāo)母體藥物和代謝產(chǎn)物 生物藥物分析的意義 藥物質(zhì)量的正確評價 臨床合理用藥,第一節(jié) 概述,生物藥物分析的特點(diǎn) 生物樣品中被測組分的存在形式多樣 原型藥（游離型）、結(jié)合型、代謝物、綴合物等 被測組分濃度低（10-6-10-9g/ml），變化幅度大 樣品干擾物質(zhì)多，部分樣品穩(wěn)定差 樣品量少 要求較快提供結(jié)果 測定數(shù)據(jù)的處理和闡明有時不太容易,第二節(jié) 藥物在生物體內(nèi)的存在狀態(tài)與生物轉(zhuǎn)化,藥物在生物體內(nèi)的存在狀態(tài) 藥物代謝保證臨床用藥的安全、合理和有效 藥物代謝的部位：肝臟、腎、脾、肺、腸粘膜、胎盤等 藥物

2、代謝反應(yīng) 第一階段（一相）：P450等催化下的氧化、還原、水解等反應(yīng)，增大極性 第二階段（二相）：與葡萄糖醛酸、硫酸鹽等結(jié)合，進(jìn)一步增大極性，隨尿排出,第三節(jié) 生物樣品的制備,常用生物樣品 生物樣品的選取原則 能夠反映出濃度與藥效之間的關(guān)系 易于獲得 便于處理 根據(jù)不同目的和要求進(jìn)行選取,第三節(jié) 生物樣品的制備,常用生物樣品 常用生物樣品的種類、特點(diǎn)與采集 血漿(plasma) 血樣 血清(serum) 全血(whole blood) 尿液(urine)用于藥物劑量回收、藥物腎清除率及生物利用度的研究 尿液藥物濃度變化大，應(yīng)測定一定時間內(nèi)尿中藥 物總量。 尿液與血液中藥物的相關(guān)性差。 尿中藥物

3、大多呈綴合狀態(tài)。,第三節(jié) 生物樣品的制備,常用生物樣品 常用生物樣品的種類、特點(diǎn)與采集 唾液(saliva)用于藥物濃度監(jiān)測和藥代動力學(xué)研究 其他動物臟器組織勻漿等 樣本的代表性 力求取樣條件標(biāo)準(zhǔn)化 樣品的貯存 血樣離心，冷凍保存 尿液立即測定，否則應(yīng)冷藏或加防腐劑,第三節(jié) 生物樣品的制備,樣品預(yù)處理 提取方法的選擇依據(jù) 藥物的理化性質(zhì) -酸堿度、極性、揮發(fā)性、可能的生物轉(zhuǎn)化途徑等 藥物的濃度范圍 藥物測定的目的 生物樣品的類型 樣品處理與分析技術(shù)的關(guān)系,第三節(jié) 生物樣品的制備,樣品預(yù)處理 藥物的提取 蛋白質(zhì)處理 利用蛋白質(zhì)脫水沉淀 有機(jī)溶劑、中性鹽等 利用蛋白質(zhì)形成不溶性鹽沉淀 酸性沉淀劑（

4、TCA、高氯酸、苦味酸等） 重金屬鹽（Zn2+、Cu2+） 其他方法 加熱、離心、超濾和透析、酶消化法,第三節(jié) 生物樣品的制備,樣品預(yù)處理 藥物的提取 綴合物（結(jié)合物）水解 酸水解無機(jī)酸 簡便快速，但專屬性差，有可能造成被測物分解。 酶水解 葡萄糖醛酸苷酶(glucuronidase) 芳基硫酸酯酶(arylsulfatase) 專屬性強(qiáng)，一般不會造成被測物分解，但水解時間長，費(fèi)用高。 溶劑解,第三節(jié) 生物樣品的制備,樣品預(yù)處理 藥物的提取 冷凍干燥 適用于 -大批量的生物樣品 -水溶性很強(qiáng)的樣品 -揮發(fā)性樣品 -對熱不穩(wěn)定的樣品,第三節(jié) 生物樣品的制備,樣品預(yù)處理 藥物的分離與凈化 液-液萃

5、取 萃取率：不低于50% 影響提取率的因素 pH值 提取溶劑 離子強(qiáng)度 離子對提取,第三節(jié) 生物樣品的制備,樣品預(yù)處理 藥物的分離與凈化 液-固萃取 固相提取柱（使用硅藻土、氧化鋁、離子交換樹脂、活性炭等填充劑） “干混合物”萃取 待測組分的富集 真空揮發(fā)或通氣流揮發(fā) 衍生化處理,第三節(jié) 生物樣品的制備,樣品預(yù)處理 待測物的損失 吸附、化學(xué)降解、衍生化反應(yīng)、絡(luò)合、蒸發(fā) 樣品玷污 增塑劑 脂肪酸和酯類 其他,第四節(jié) 生物樣品內(nèi)藥物分析方法,分析方法建立的一般步驟 以純品進(jìn)行測定 確定線性范圍、最適測定濃度、靈敏度、最佳測定條件等 空白樣品測定 以水代替空白樣品，添加對照品后測定 了解提取回收率和最低檢測濃度的大致情況 空白樣品中添加對照品后測定（回收率實驗） 實際樣品測定,第四節(jié) 生物樣品內(nèi)藥物分析方法,方法的評價 準(zhǔn)確度（accuracy） 回收率相對穩(wěn)定 與參比方法相比較相關(guān)系數(shù)r 0.95 精密度（precision） 各濃度點(diǎn)RSD不應(yīng)大于15%，最低定量限不應(yīng)大于20%。 靈敏度 檢測限(LOD)、定量限(LOQ)、最低檢測濃度,第四節(jié) 生物樣品內(nèi)藥物分析方法,方法的評價 方法的專屬性（specificity） 注重考慮代謝物、內(nèi)源性物質(zhì)和同時服用藥物的干擾 線性范圍-相關(guān)系數(shù)r 0.99 樣品穩(wěn)定性考察 長期貯存(-