實(shí)驗(yàn)八酵母形態(tài)觀察20090413

1、酵母形態(tài)觀察及死活細(xì)胞鑒別微生物大小測(cè)定顯微鏡直接計(jì)數(shù)法,實(shí)驗(yàn)八,一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?1 觀察酵母菌的形態(tài)和出芽生殖方式 2 學(xué)習(xí)區(qū)分酵母菌死活細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)方法,酵母形態(tài)觀察及死活細(xì)胞鑒別,二、基本原理,酵母菌是單細(xì)胞真核微生物，通常以出芽方式進(jìn)行無性繁殖，有的進(jìn)行分裂繁殖；通過接合產(chǎn)生子囊孢子進(jìn)行有性繁殖，有性繁殖要在特定培養(yǎng)條件下才能進(jìn)行。 染料美藍(lán)氧化型呈藍(lán)色，還原型無色。用美藍(lán)對(duì)酵母活細(xì)胞染色時(shí)，由于細(xì)胞分泌的還原酶，能使美藍(lán)由藍(lán)色的氧化型轉(zhuǎn)變?yōu)闊o色的還原型。借此即可對(duì)酵母菌的死活細(xì)胞進(jìn)行鑒別。,三、實(shí)驗(yàn)器材,1 菌種：釀酒酵母 2 儀器：顯微鏡、載玻片、蓋玻片等,四、實(shí)驗(yàn)步驟,美藍(lán)浸片的觀察

2、 在載玻片中央加一滴0.1呂氏堿性美藍(lán)染色液，然后按無菌操作用接種環(huán)挑取少量酵母菌苔放在染液中，混合均勻。（染液不宜過多或過少，否則，在蓋上蓋玻片時(shí)，菌液會(huì)溢出或出現(xiàn)大量氣泡而影響觀察。） 用鑷子取一塊蓋玻片，先將一邊與菌液接觸，然后慢慢將蓋玻片放下使其蓋在菌液上。鏡檢。 將制片放置約3min后再次鏡檢并對(duì)照，先用低倍鏡然后用高倍鏡觀察酵母的形態(tài)和出芽情況，并根據(jù)顏色來區(qū)別死活細(xì)胞。,滴加染液涂片加蓋玻片鏡檢3min后再次鏡檢,五、實(shí)驗(yàn)報(bào)告,繪圖說明你所觀察到的酵母菌的形態(tài)特征 思考題 1、酵母死活細(xì)胞鑒別的基本原理是什么？,一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?學(xué)習(xí)并掌握用測(cè)微尺測(cè)定微生物大小的方法,微生物大小測(cè)定

3、,二、基本原理,測(cè)微尺：包括目鏡測(cè)微尺和鏡臺(tái)測(cè)微尺。 鏡臺(tái)測(cè)微尺是中央部分刻有精確等分線的載玻片，一般是將1mm等分為100格，每格長(zhǎng)0.01mm(即10um)。鏡臺(tái)測(cè)微尺并不直接用來測(cè)量細(xì)胞的大小，而是用于校正目鏡測(cè)微尺每格的相對(duì)長(zhǎng)度。 目鏡測(cè)微尺是放入接目鏡內(nèi)的圓形小玻片，其中央有精確的等分刻度。由于放大倍數(shù)不同，目鏡測(cè)微尺每小格代表的實(shí)際長(zhǎng)度不一樣。因此，需首先校正目鏡測(cè)微尺。,三、實(shí)驗(yàn)器材,1 菌種：釀酒酵母 2 儀器：目鏡測(cè)微尺、鏡臺(tái)測(cè)微尺、顯微鏡、載玻片、蓋玻片等,四、實(shí)驗(yàn)步驟,1 裝目鏡測(cè)微尺 2 校正目鏡測(cè)微尺 在40鏡下，看清鏡臺(tái)測(cè)微尺的刻度后，轉(zhuǎn)動(dòng)目鏡，使目鏡測(cè)微尺與鏡臺(tái)測(cè)

4、微尺的刻度平行，移動(dòng)載物臺(tái)，使目鏡測(cè)微尺的0點(diǎn)與鏡臺(tái)測(cè)微尺的某一刻度重合，然后，仔細(xì)尋找兩尺第二個(gè)完全重合的刻度。計(jì)算兩刻度間目鏡測(cè)微尺的格數(shù)和鏡臺(tái)測(cè)微尺的格數(shù)。由于鏡臺(tái)測(cè)微尺的刻度每格長(zhǎng)10m，所以可得 目尺每格長(zhǎng)度(m)=（臺(tái)尺格數(shù)10）/目尺格數(shù),目尺每格長(zhǎng)度(m)=（1010）/60=1.67um,3 菌體大小測(cè)定； 選擇5個(gè)左右的細(xì)胞進(jìn)行測(cè)定，求平均值； 圓球型直徑表示，橢圓型用長(zhǎng)軸寬軸表示。,五、實(shí)驗(yàn)報(bào)告,1 實(shí)驗(yàn)結(jié)果（P41 1） （1）目鏡測(cè)微尺標(biāo)定結(jié)果： 低倍鏡下 倍目鏡測(cè)微尺每格長(zhǎng)度是 um。 高低倍鏡下 倍目鏡測(cè)微尺每格長(zhǎng)度是 um。 油鏡下 倍目鏡測(cè)微尺每格長(zhǎng)度是 um

5、。 （2）菌體大小測(cè)定結(jié)果。（每種菌測(cè)3個(gè)細(xì)胞，取平均值） 2 思考題（P42 2） 在不改變目鏡和目鏡測(cè)微尺，而改變不同放大倍數(shù)的物鏡來測(cè)定同一細(xì)胞的大小時(shí)，其測(cè)定結(jié)果是否相同？為什么？,一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?1 明確血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)的原理 2 掌握用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板進(jìn)行微生物計(jì)數(shù)的方法,顯微鏡直接計(jì)數(shù)法,二、基本原理,顯微鏡直接計(jì)數(shù)法 血球計(jì)數(shù)板的結(jié)構(gòu)： 四條槽構(gòu)成三個(gè)平臺(tái)；中間較寬的平臺(tái)又被一短橫槽隔成兩半，每一邊的平臺(tái)上各刻有一個(gè)方格,網(wǎng)，每個(gè)方格網(wǎng)共分為九個(gè)大方格，一種是一個(gè)大方格分成25個(gè)中方格，而每個(gè)中方格又分成16個(gè)小方格；另一種是一個(gè)大方格分成16個(gè)中方格，每個(gè)中方格又分成25個(gè)小方格，

6、無論哪種每個(gè)大方格中的小方格都是400個(gè)。,每一個(gè)大方格邊長(zhǎng)為1mm，高0.1mm，所以計(jì)數(shù)室的容積為0.1mm3。計(jì)數(shù)時(shí)，通常只用5個(gè)中格內(nèi)的菌體(孢子)數(shù)即可。然后求出每個(gè)中方格的平均值，再乘上25或16，得出一個(gè)大方格中的總茵數(shù)，再換算成1ml菌液中的總菌數(shù)。若設(shè)5個(gè)中方格中總菌數(shù)為A，菌液稀釋倍數(shù)為B， （1）如果是25個(gè)中方格計(jì)數(shù)板，則計(jì)算方法為： 1ml菌液中的總菌數(shù)=（A/5)25104B=50000AB(個(gè)) （2）如果是16個(gè)中方格計(jì)數(shù)板，則計(jì)算方法為： 1ml菌液中的總菌數(shù)=(A/4) 16104B=40000AB(個(gè)),三、實(shí)驗(yàn)器材,1 菌種：釀酒酵母 2 儀器：血球計(jì)數(shù)板、顯微鏡、載玻片、蓋玻片等,四、實(shí)驗(yàn)步驟,1.菌懸液制備，以無菌生理鹽水將釀酒酵母制成濃度適當(dāng)?shù)木鷳乙骸?2. 取清潔無油的血球計(jì)數(shù)板，在計(jì)數(shù)室上面加蓋玻片。 3. 取酵母菌液，搖勻，用滴管由蓋玻片邊緣滴一小滴，使菌液自行滲入，計(jì)數(shù)室內(nèi)不得有氣泡。 4. 靜止5min后，用低倍鏡觀察并將計(jì)數(shù)室移至視野中央。,5. 在高倍鏡下計(jì)數(shù)：隨機(jī)計(jì)數(shù)五個(gè)中格的平均值，然后求得每個(gè)中格的平均值。乘上16（或25