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1、蛙離體神經(jīng)干生物電信號(hào)與興奮性檢測(cè),一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?通過(guò)對(duì)蛙離體神經(jīng)干生物電信號(hào)與興奮性的檢測(cè),學(xué)習(xí)生物電信號(hào)的引導(dǎo). 觀察并分析神經(jīng)干復(fù)合動(dòng)作電位波形及刺激強(qiáng)度對(duì)神經(jīng)干動(dòng)作電位的影響. 了解神經(jīng)干動(dòng)作電位傳導(dǎo)速度的測(cè)量方法及神經(jīng)興奮性的周期性變化。,二、實(shí)驗(yàn)原理: 靜息電位:靜息時(shí),細(xì)胞膜兩側(cè)存在外正內(nèi)負(fù)的電位差,稱為靜息電位。胞外高Na+,胞內(nèi)高K+ 動(dòng)作電位:是指細(xì)胞受到一個(gè)有效刺激時(shí)膜電位在靜息電位基礎(chǔ)上發(fā)生的一次快速的可向遠(yuǎn)端傳播的電位波動(dòng)。AP的產(chǎn)生是“全”或“無(wú)”的;在同一細(xì)胞上的傳播是不衰減的。,AP是神經(jīng)興奮的客觀標(biāo)志,而神經(jīng)干是由許多神經(jīng)纖維組合而成的,所以從神經(jīng)干上可記錄
2、到許多神經(jīng)纖維動(dòng)作電位的復(fù)合,成為復(fù)合動(dòng)作電位,是非“全”或“無(wú)”的。 由于不同纖維的興奮性及其所產(chǎn)生的動(dòng)作電位幅度、波形各不相同,所以復(fù)合動(dòng)作電位的幅度將隨刺激強(qiáng)度的變化而變化。,A,A,“全”或“無(wú)”,單個(gè)細(xì)胞,神經(jīng)干/復(fù)合神經(jīng)纖維,非“全”或“無(wú)”,細(xì)胞內(nèi)外,細(xì)胞外電位差,單向,雙向,二、實(shí)驗(yàn)對(duì)象:蛙。 三、實(shí)驗(yàn)器材與藥品:蛙手術(shù)器械、神經(jīng)標(biāo)本盒、培養(yǎng)皿、任氏液、RM6240信號(hào)采集處理系統(tǒng)。 四、制備蛙離體坐骨神經(jīng)干標(biāo)本( 看錄像) 五、實(shí)驗(yàn)觀察項(xiàng)目: 1.引導(dǎo)雙相動(dòng)作電位 2.雙相動(dòng)作電位閾強(qiáng)度、最大刺激強(qiáng)度 3.神經(jīng)干動(dòng)作電位傳導(dǎo)速度的測(cè)定 4.神經(jīng)興奮性周期變化的檢測(cè) 5.引導(dǎo)單
3、相動(dòng)作電位,刺激偽跡,刺激偽跡是刺激電流通過(guò)導(dǎo)電介質(zhì)擴(kuò)散至兩引導(dǎo)電極而形成的電位差信號(hào)。,刺激偽跡:作為刺激開(kāi)始的標(biāo)志,神經(jīng)干標(biāo)本盒兩對(duì)引導(dǎo)電極分別接微機(jī)生物信號(hào)處理系統(tǒng)1、2通道,AP1和AP2分別反映A點(diǎn)與B點(diǎn)及C點(diǎn)與D點(diǎn)兩點(diǎn)間的電位差。興奮性從粗端傳導(dǎo)到細(xì)端,首先在A點(diǎn)興奮,膜電位倒轉(zhuǎn),胞外帶負(fù)電,而與之相鄰的B點(diǎn)未興奮,胞外帶正電,于是在A、B兩點(diǎn)間出現(xiàn)電位差,產(chǎn)生局部電流。而后A點(diǎn)復(fù)極化恢復(fù)胞外帶正電, 而B(niǎo)點(diǎn)興奮去極化出現(xiàn)胞外帶負(fù)電,此時(shí)又產(chǎn)生兩點(diǎn)間的電位差。人為規(guī)定:A為負(fù)、B為正時(shí),波形向上;A為正、B為負(fù)時(shí)。波形向下。于是就產(chǎn)生了雙相動(dòng)作電位。,雙相動(dòng)作電位特點(diǎn):AP1較AP
4、2出現(xiàn)早且波形幅度大。 我們從神經(jīng)干粗端作為刺激端,所產(chǎn)生的興奮從粗端傳導(dǎo)到細(xì)端。從上圖可知:A點(diǎn)較C點(diǎn)早興奮,這是AP1比AP2出現(xiàn)早的原因。A點(diǎn)較C點(diǎn)粗,所含的神經(jīng)纖維也多。神經(jīng)干是由許多神經(jīng)纖維組成的,同類神經(jīng)纖維的傳導(dǎo)速度不同。與點(diǎn)是AP1比AP2波形幅度大的原因。,“實(shí)驗(yàn)”菜單中選擇自定義實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目“神經(jīng)干動(dòng)作電位”進(jìn)入實(shí)驗(yàn)狀態(tài)。儀器參數(shù):1、2通道時(shí)間常數(shù)0.020.002s、濾波頻率1KHz、靈敏度5mV,采樣頻率:40KHz,掃描速度:0.5ms/div。單刺激激方式,刺激幅度0.13V,刺激波寬0.1ms,延遲5ms,同步觸發(fā)。,2、雙相動(dòng)作電位閾強(qiáng)度、最大刺激強(qiáng)度: (1)概
5、念: 對(duì)神經(jīng)干而言,閾強(qiáng)度是指神經(jīng)干剛好能產(chǎn)生動(dòng)作電位的刺激強(qiáng)度。在一定范圍的閾上刺激內(nèi),刺激強(qiáng)度越小,神經(jīng)干所形成的動(dòng)作電位越小。 這是因?yàn)殡S著刺激強(qiáng)度的下降,神經(jīng)干上可興奮的神經(jīng)纖維越來(lái)越少的緣故。 最大刺激強(qiáng)度:在閾上刺激時(shí),復(fù)合動(dòng)作電位的幅度隨刺激強(qiáng)度的增大而增大,當(dāng)所有的神經(jīng)纖維都已興奮時(shí),此時(shí)即使增加刺激強(qiáng)度,所產(chǎn)生的動(dòng)作電位幅度也不再增大。我們就把這種恰好能引起神經(jīng)干的所有神經(jīng)纖維都興奮的刺激強(qiáng)度稱為最大刺激強(qiáng)度。,0V,0.25V,0.3V,0.4V,0.5V,0.6V,0.7V,0.8V,0.9V,為什么在一定范圍的閾上刺激內(nèi),刺激強(qiáng)度越大,神經(jīng)干所形成的動(dòng)作電位越大?,1.
6、復(fù)合AP 2.興奮性不同 3.最大刺激強(qiáng)度,3.測(cè)定傳導(dǎo)速度(自動(dòng)/手動(dòng)) (1)V=S/t(m/s) ( 2)AP1與AP2的波峰的時(shí) 差r1點(diǎn)與r3點(diǎn)間的距離,S1,S2,r1,r4,r3,r2,S(cm),4.檢測(cè)興奮性周期變化,絕對(duì)不應(yīng)期 相對(duì)不應(yīng)期 閾上 超常期 閾下 低常期 閾上,興奮性,0,閾值,神經(jīng)纖維的絕對(duì)不應(yīng)期相當(dāng)于整個(gè)鋒電位的時(shí)期,相對(duì)不應(yīng)期和超常期相當(dāng)于負(fù)后電位的時(shí)期,低常期則相應(yīng)于正后電位的時(shí)期。,最大刺激強(qiáng)度,雙刺激,調(diào)節(jié)間隔時(shí)間,保持刺激強(qiáng)度和波寬不變,從最大間隔開(kāi)始逐漸縮小,所選的每一個(gè)間隔都給予一次刺激,隨著波間隔的縮小,越來(lái)越多神經(jīng)纖維在接受第二個(gè)刺激時(shí)已處于第一個(gè)刺激誘發(fā)的動(dòng)作電位的不應(yīng)期,所產(chǎn)生的復(fù)合動(dòng)作電位波幅就逐漸減小直至消失。(不能區(qū)分絕對(duì)不應(yīng)期和相對(duì)不
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