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文檔簡介

1、國家新藥篩選實(shí)驗(yàn)室,中藥新藥臨床前安全性評(píng)價(jià),目 錄,一、概述 二、臨床前安全性評(píng)價(jià)在中藥新藥創(chuàng)制 中的地位和作用 三、臨床前安全性研究所涉及的內(nèi)容 四、急性毒性試驗(yàn)在新藥評(píng)價(jià)中的作用 五、長期毒性試驗(yàn)在新藥評(píng)價(jià)中的作用 六、毒理學(xué)試驗(yàn)結(jié)果的綜合分析 七、新藥申報(bào)資料中的常見問題分析,概 述,藥品的概念和基本要求,治療、預(yù)防和診斷疾病 安全、有效、質(zhì)量可控 安全第一,藥品非臨床研究質(zhì)量管理規(guī)范,Good Laboratory Practice (GLP) 美國 日本 歐盟 中國于1994年由國家科委頒布GLP,1999年由SDA簽署局長令實(shí)施GLP。,有毒與無毒的界限,如何區(qū)分藥物和毒物: 不

2、同劑量; 不同臨床主治; 不同給藥途徑; 生理鹽水(小鼠iv,LD50= 68ml/kg); 蒸餾水(小鼠iv,LD50=4ml/kg),新藥發(fā)展的歷史,20世紀(jì)前50年:新藥發(fā)展空前迅速 1930-1950年 磺胺類藥物、抗生素、抗微生物藥物、 抗精神失常藥、抗高血壓藥、抗腫瘤藥、 抗心絞痛藥、抗心律失常藥、調(diào)血脂藥、 利尿藥、螯合劑等。,但 是,氯丙嗪: 臨床使用前沒做過幾項(xiàng)指標(biāo) 酶抑寧: 幾乎沒做過毒性試驗(yàn)就上臨床應(yīng)用 (治療重癥肌無力)。 甲磺丁脲:人體應(yīng)用的報(bào)道和小鼠LD50測 定的報(bào)道發(fā)表在同一期的雜志上。 事實(shí)上甲磺丁脲在人體應(yīng)用前也 僅僅做了小鼠的急性毒性試驗(yàn)。,有利方面,臨床

3、試用方便 發(fā)現(xiàn)新藥機(jī)會(huì)多 研究周期短 成功率高 研究新藥的積極性高,不利方面,毒理研究少; 臨床事故出現(xiàn)較多; 有些毒性在臨床使用幾年后才出現(xiàn); 不斷出現(xiàn)藥害“事件”,二硝基酚減肥引起白內(nèi)障、骨髓抑制死亡177人 乙二醇磺胺酏劑造成107人死亡 有機(jī)錫(Stalinon)膠囊引起207人視力障礙 沙利度胺(Thalidomide, 反應(yīng)停)使萬余名新生兒先天畸形 氯碘喹啉造成千人失明或下肢癱瘓,關(guān)于中藥 在中國,傳統(tǒng)上認(rèn)為絕大多數(shù)中藥無毒。 中藥在臨床上出現(xiàn)的毒性有關(guān)報(bào)道增多: 馬兜鈴酸,雷公藤,大黃蒽醌等。 新藥中的未知毒性成份越來越多。 中藥類、 部分類新藥,已經(jīng)很難用傳統(tǒng)的中醫(yī)理論闡述其

4、功能主治,從化學(xué)本質(zhì)、毒性潛力上有別于傳統(tǒng)的中藥。尤其是中藥注射劑。,開發(fā)中藥新藥必須認(rèn)識(shí),對(duì)類、 部分類新藥毒性的了解已經(jīng)沒有傳統(tǒng)的參考背景,對(duì)其用藥的安全性就更應(yīng)加以重視。 只有通過動(dòng)物的毒理學(xué)試驗(yàn)才能為臨床人體試驗(yàn)研究提供毒理方面的參考依據(jù)。,臨床前安全性評(píng)價(jià)在中藥新藥創(chuàng)制中的地位和作用,-,毒理學(xué)技術(shù)審評(píng)的審評(píng)依據(jù),1法律:藥品管理法 2法規(guī):藥品注冊(cè)管理辦法 3技術(shù)指導(dǎo)原則:毒理學(xué) 4毒理學(xué)專業(yè)知識(shí),臨床前安全評(píng)價(jià)的目的, 提供新藥危害程度的科學(xué)依據(jù) 預(yù)測上市后對(duì)人體的有害程度 淘汰危害大的 權(quán)衡有危害的 通過危害小的 理想的是沒有危害的新藥,臨床前安全評(píng)價(jià)的措施,綜合分析 權(quán)衡利弊

5、 客觀評(píng)價(jià) 為臨床安全、有效用藥,提供毒理學(xué)參考依據(jù),臨床前安全評(píng)價(jià)的作用,1. 預(yù)測臨床用藥時(shí)可能出現(xiàn)的毒性反應(yīng); 2. 制定臨床檢測、預(yù)防措施; 3. 推算臨床研究時(shí),人用藥的安全參考劑 量和安全范圍; 4. 確立禁忌證,限制用藥人群。,毒理學(xué)與藥學(xué)、臨床間的關(guān)系,毒理學(xué)與藥學(xué)的關(guān)系 1. 毒理評(píng)價(jià)是以藥學(xué)為基礎(chǔ)和前提的(物質(zhì)基礎(chǔ)): 2. 藥物結(jié)構(gòu),組分、雜質(zhì)(相關(guān)物質(zhì))含量、理化性質(zhì)、劑型(輔料)、穩(wěn)定性等,與其毒理作用密切相關(guān)。 毒理學(xué)與臨床的關(guān)系 1. 毒理研究是為臨床服務(wù); 2. 毒理研究的思路和目的與臨床基本一致,只是主體不同,臨床前新藥的評(píng)價(jià)要密切結(jié)合臨床試驗(yàn); 3. 大多數(shù)

6、毒理學(xué)的結(jié)果最終要通過臨床來證實(shí); 4. 臨床研究結(jié)果可能對(duì)毒理提出新的要求(彌補(bǔ)不足)。,綜合審評(píng)和聯(lián)系人制度,1. 促使新藥研發(fā)和創(chuàng)新思路逐步與國際接軌 2. 從審評(píng)角度引導(dǎo)新藥開發(fā)向研究行為過渡 3. 取代以往固守、套用技術(shù)指導(dǎo)原則的模式 4. 以科學(xué)方法完善藥品研制過程和審評(píng)機(jī)制,中藥的特點(diǎn),化學(xué)實(shí)體(chemical entity): 1. 多種成分(組分)的集合體; 2. 多種中藥有效成分或有效分子群并不明確; 3. 中藥中各成分之間的相互作用知之甚少;,中藥的特點(diǎn),臨床治療方面的特點(diǎn): 1. 中醫(yī)是復(fù)方用藥; 2. 辯證施治,病證結(jié)合; 3. 廣泛和長期的臨床應(yīng)用基礎(chǔ);,中藥的特

7、點(diǎn),藥理作用的特點(diǎn): 1. 多種成分、多靶點(diǎn)、綜合作用; 2. 生物活性緩和; 3. 一般來說,毒副作用較低;,中藥的特點(diǎn),中藥和化藥在研制程序上的差異 1. 化學(xué)藥品研制的程序: 實(shí)驗(yàn)室篩選 leading compounds(先導(dǎo)化合物) 新藥開發(fā)軌道 臨床研究 生產(chǎn)與銷售 2. 中藥開發(fā)研制的程序: 臨床實(shí)踐篩選 candidate(候選化合物) 臨床驗(yàn)證 新藥開發(fā)軌道 臨床研究 生產(chǎn)與銷售,中藥復(fù)方制劑,來源于長期臨床實(shí)踐,有人用歷史。 安全性評(píng)價(jià)有別于植物藥和以有效成分或有效部位制成的新制劑,更有別于化藥。,中藥臨床前安全性評(píng)價(jià)的特點(diǎn),考慮: 1. 毒理學(xué)上的要求不同; 2. 動(dòng)物與

8、人在毒性反應(yīng)上的差別。,毒理學(xué)上的不同,一、 急性毒性試驗(yàn) 1. 給藥途徑 中藥: 1、2類藥:二種給藥途徑或動(dòng)物測定LD50; 其它類別:一種臨床給藥途徑即可。 化學(xué)藥: 采用二種動(dòng)物和/或給藥途徑分別測定LD50。,毒理學(xué)上的不同,一、 急性毒性試驗(yàn) 2. 最大給藥量的測定 中藥: 以動(dòng)物能耐受的最大濃度、最大體積的藥量單次或一日內(nèi)23次給藥。(體重、死亡分布表) 化學(xué)藥: 在測定最大給藥量時(shí),一般采用單次給藥,而不采用一日多次給藥的方式。,毒理學(xué)上的不同,二、 長期毒性試驗(yàn) 1. 三、四類中藥可免做長期毒性試驗(yàn)的條件 (1) 給藥周期在一周之內(nèi); (2) 藥材符合法定標(biāo)準(zhǔn); (3) 無毒

9、性藥材; (4) 無18反、19畏等配伍禁忌; (5) 未經(jīng)化學(xué)處理(水、乙醇粗提除外); (6) 難以測出LD50,或給藥劑量大于20g生藥/kg;,毒理學(xué)上的不同,此處所稱毒性藥材,系指入國務(wù)院醫(yī)療用毒性藥品管理辦法的中藥品種。即:砒石、砒霜、水銀、生馬錢子、生川烏、生草烏、生白附子、生附子、生半夏、生南星、生巴豆、斑蝥、青娘蟲、紅娘蟲、生甘遂、生狼毒、生藤黃、生千金子、生天仙子、鬧羊花、雪上一枝蒿、紅升丹、白降丹、蟾酥、洋金花、紅粉、輕粉、雄黃。 凡在近年來發(fā)現(xiàn)所研制的藥材(原料)有毒性作用或在復(fù)方中含有有毒組份的均按毒性藥材處理。,毒理學(xué)上的不同,二、 長期毒性試驗(yàn) 2. 外用三、四類

10、中藥制劑,如不含毒性藥材或有毒成分,可免做長期毒性試驗(yàn)。,毒理學(xué)上的不同,二、 長期毒性試驗(yàn) 3. 在下述情況下,三、四類中藥可用大鼠進(jìn)行長期毒性試驗(yàn)。 (1) 處方中各味中藥材符合法定標(biāo)準(zhǔn); (2) 無毒性藥材; (3) 無18反、19畏等配伍禁忌;,毒理學(xué)上的不同,二、 長期毒性試驗(yàn) 4. 在下述情況下,給藥周期可為臨床用藥期的2倍 (1) 三、四類中藥; (2) 處方中各味中藥材符合法定標(biāo)準(zhǔn); (3) 無毒性藥材; (4) 無18反、19畏等配伍禁忌; (5) 未經(jīng)化學(xué)處理(水、乙醇粗提除外); (6) 難以測出LD50,或給藥劑量大于20g生藥/kg;,毒理學(xué)上的不同,二、 長期毒性試

11、驗(yàn) 5. 其它中藥一般要求長期毒性試驗(yàn)給藥周期應(yīng)為臨床用藥期的34倍。 化學(xué)藥:一般要求長期毒性試驗(yàn)給藥期應(yīng)為臨床用藥期的34倍。,毒理學(xué)上的不同,三、 特殊毒性試驗(yàn)(“三致”試驗(yàn)) 中藥: 1. 只有一類新藥才要求做“三致”試驗(yàn); 2.強(qiáng)調(diào)以體內(nèi)試驗(yàn)為主。 化學(xué)藥: 1. 均做“三致”試驗(yàn); 2. 體外、體內(nèi)試驗(yàn)同等重要。,毒理學(xué)上的不同,1. 致突變?cè)囼?yàn): 一般可參照化藥的相關(guān)要求來進(jìn)行,但中藥制劑若有其特殊性時(shí),如溶解度、pH值等問題,難以進(jìn)行體外試驗(yàn)者(Ames,染色體畸變?cè)囼?yàn)),可只進(jìn)行體內(nèi)試驗(yàn)(小鼠微核試驗(yàn))。,毒理學(xué)上的不同,2 . 生殖毒性試驗(yàn): 一般生殖毒性試驗(yàn)、致畸敏感期毒

12、性試驗(yàn)和圍產(chǎn)期毒性試驗(yàn)。 動(dòng)物應(yīng)選用大鼠,其中致畸敏感期試驗(yàn)需用兩種動(dòng)物(大鼠和兔)進(jìn)行試驗(yàn)。從節(jié)省研發(fā)單位的時(shí)間出發(fā),致畸敏感期兔試驗(yàn)和圍產(chǎn)期毒性試驗(yàn)可在批準(zhǔn)進(jìn)行臨床研究后,在臨床試驗(yàn)期間進(jìn)行。 以上原則要求適用于一般的一類新藥。對(duì)部分具有特殊性的新藥,可免做部分或全部試驗(yàn)者,可由申報(bào)單位提出申請(qǐng),充分說明理由,經(jīng)SDA藥品審評(píng)中心批準(zhǔn)后可免做。如部分抗腫瘤藥、老年性用藥、搶救藥物(用藥次數(shù)極少、用藥時(shí)間短)等。,毒理學(xué)上的不同,3. 致癌試驗(yàn): 臨床上連續(xù)用藥6個(gè)月以上的藥物及慢性或復(fù)發(fā)性疾病需間斷性長期反復(fù)治療的藥物,需進(jìn)行致癌試驗(yàn); 具有遺傳毒性的藥物往往具有致癌性,若這類藥物預(yù)期長期

13、應(yīng)用于臨床時(shí),應(yīng)進(jìn)行致癌試驗(yàn); 若在長期毒性試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)有癌前病變的藥物或?qū)儆谂c人相關(guān)的具有潛在致癌性的同類化合物,也需進(jìn)行致癌試驗(yàn)。考慮到致癌試驗(yàn)的周期很長,故致癌試驗(yàn)可在臨床研究期間進(jìn)行,在申報(bào)生產(chǎn)時(shí)報(bào)送致癌試驗(yàn)有關(guān)資料。,毒理學(xué)上的不同,可考慮免做致癌試驗(yàn)的條件: 腫瘤治療劑或應(yīng)用于預(yù)期壽命短暫人群的藥物,不要求進(jìn)行致癌試驗(yàn); 原藥材有國家標(biāo)準(zhǔn),且文獻(xiàn)報(bào)道無“三致”作用,提取的同結(jié)構(gòu)類型化合物無致癌作用且該受試物致突變?cè)囼?yàn)陰性; 無生殖毒性和長期毒性試驗(yàn)未發(fā)現(xiàn)有增生作用者。,動(dòng)物與人在毒性反應(yīng)上的差別,以動(dòng)物試驗(yàn)來預(yù)測藥物臨床毒性的局限性: 中藥注射劑的一些不良反應(yīng)報(bào)道 國際生命科學(xué)研究院

14、的研究 Litchfield臨床前毒性研究實(shí)驗(yàn),藥品動(dòng)物試驗(yàn)毒性與臨床毒性一致性的國際研究,動(dòng)物毒性試驗(yàn)與人臨床毒性反應(yīng)的陽性一致率為70% 非嚙齒類動(dòng)物單獨(dú)預(yù)測的陽性一致率為63% 嚙齒類動(dòng)物為43%,60年代臨床前毒性研究資料,500名病人53種藥物反應(yīng) Rat預(yù)測18種占 34% Dog預(yù)測占55% Rat&Dog占57%,94%的臨床毒性是在一個(gè)月或更短時(shí)間的動(dòng)物試驗(yàn)中被預(yù)測到的。結(jié)果提示:動(dòng)物毒性試驗(yàn)預(yù)測主要臨床毒性的重要,但同時(shí)又存在明顯的不足之處,即對(duì)某些系統(tǒng)毒性的預(yù)見性較差。,這就提醒人們:不能期望僅用從動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中得到全 面的信息來指導(dǎo)臨床應(yīng)用。動(dòng)物毒理試驗(yàn)的局限性:臨床仍有

15、風(fēng)險(xiǎn)。動(dòng)物與人的敏感性不同,假陰性和 假陽性。一致率僅70%左右。,毒理學(xué)研究的對(duì)策,1.設(shè)法減少動(dòng)物試驗(yàn)設(shè)計(jì)上的不足 參考PP、AT、GP、PK、TK的信息,選擇合理的采樣和檢測時(shí)機(jī)。,2應(yīng)重視一般藥理學(xué)(GP安全藥 理)的研究。,3更仔細(xì)并合理地選擇動(dòng)物種屬 (敏感動(dòng)物)。,4重視生化指標(biāo)和全身(免疫/ 淋巴)器官臟器重量檢測,采 用新技術(shù)檢測血液學(xué)指標(biāo)。,5加強(qiáng)GLP實(shí)驗(yàn)室中對(duì)動(dòng)物各項(xiàng) 正常生理指標(biāo)的數(shù)據(jù)背景資料 (data background)的研究。,6必要時(shí)采用其他非常規(guī)的試 驗(yàn)方法和模型,以加強(qiáng)毒性 機(jī)理研究(肝藥酶P450的研究),7可直接用人體組織及分子生物 學(xué)技術(shù)等進(jìn)行毒

16、理實(shí)驗(yàn)。,藥品臨床前安全性研究 所涉及的內(nèi)容,全身毒性和局部毒性研究,全身毒性研究: 急性毒性試驗(yàn); 長期毒性試驗(yàn); 特殊毒性試驗(yàn); 藥物依賴性試驗(yàn); 一般藥理(安全藥理)試驗(yàn); 全身過敏性試驗(yàn);,局部毒性研究,皮膚、粘膜毒性試驗(yàn): 1)局部刺激性試驗(yàn) 2)局部過敏試驗(yàn)(光敏試驗(yàn),被動(dòng)皮膚過敏試驗(yàn)等) 靜脈(肌肉)用藥毒性試驗(yàn): 1)血管(肌肉)刺激性試驗(yàn) 2)溶血試驗(yàn),基本目的 1. 找出毒性劑量: 單次、重復(fù)給藥的毒性劑量; 2. 確定安全范圍: 起效而不中毒,范圍越大越好; 3. 發(fā)現(xiàn)毒性反應(yīng): 為臨床安全監(jiān)護(hù)提供依據(jù), 預(yù)防毒副反應(yīng)發(fā)生 4. 尋找毒性靶器官:為藥物毒性防治提供依據(jù),

17、為開發(fā)新藥提供線索; 5. 毒性可逆與否: 可逆性毒性反應(yīng)不影響新藥審 批;不可逆損傷一般不批臨床; 6. 解救措施: 尤對(duì)毒性強(qiáng)猛、安全范圍小的藥;,基本要求,課題負(fù)責(zé)人:扎實(shí)理論、經(jīng)驗(yàn)、法規(guī); 試驗(yàn)者: 受過專門訓(xùn)練、業(yè)內(nèi)人士 在試驗(yàn)記錄上簽字; 受試物: 制備工藝基本穩(wěn)定,質(zhì)控成 熟;試劑:批號(hào)、廠家、規(guī)格; 動(dòng)物: 符合國家科技部規(guī)定的等級(jí)動(dòng)物 要求(SPF,Special Pathogen Free)。 一般用成年;必要時(shí)用特定年 齡、性別、模型動(dòng)物,儀器設(shè)備:符合要求、廠家、規(guī)格、專人定期 校驗(yàn)、誤差在允許范圍內(nèi)。試驗(yàn)設(shè)計(jì):隨機(jī)、對(duì)照、重復(fù)三原則。試驗(yàn)記錄:要求客觀采用的儀器記錄、

18、表格化、 標(biāo)準(zhǔn)化。遇有未預(yù)見的現(xiàn)象及時(shí)記 錄;試驗(yàn)中差錯(cuò)應(yīng)立即在記錄中寫明 情況。原始記錄至少要保持到藥品 上市后5年。 結(jié)果: 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,結(jié)合客觀實(shí)際恰當(dāng)下結(jié) 論。,急性毒性試驗(yàn) 在新藥安全性評(píng)價(jià)中的作用,急性毒性試驗(yàn),是指動(dòng)物24hr內(nèi)單次或多次給藥后在7d或14d中,連續(xù)觀察動(dòng)物所產(chǎn)生的毒性反應(yīng)及死亡情況。,定性:毒性反應(yīng)性質(zhì)(中毒表現(xiàn))、毒性出現(xiàn)和消失的時(shí)間、毒性涉及的組織器官、中毒過程中的特征、可能的死亡原因等。,定量:觀察毒性反應(yīng)與劑量的關(guān)系、近似致死量(ALD)、最大耐受量(MTD)或最大給藥量、半數(shù)致死量(LD50)、致死劑量(LD);小動(dòng)物以LD50 作指標(biāo),大動(dòng)物以ALD

19、作指標(biāo)。,意 義,了解新藥的急性毒性強(qiáng)度; 為臨床研究、試驗(yàn)、使用時(shí)的毒副反 應(yīng)檢測提供參考依據(jù); 為不同提取工藝產(chǎn)品的毒性比較以及 配伍用藥或聯(lián)合用藥時(shí)藥物的相互 作用情況提供參考依據(jù)。,.可計(jì)算新藥相對(duì)毒性參數(shù): TI(治療指數(shù))=LD50/ED50、 SM(安全范圍)=(LD1/ED99-1) 100%;(LD1無害量),.為長期毒性、蓄積毒性及特殊毒性試驗(yàn)(如生殖毒性試驗(yàn)高劑量為母鼠的最大耐受量,微核試驗(yàn)的最高劑量一般采用1/2LD50,長期毒性試驗(yàn)的高劑量一般采用同種動(dòng)物1/51/10LD50)的觀察指標(biāo)及劑量選擇提供參考依據(jù);,目前對(duì)急毒試驗(yàn)的看法,LD50測定存在明顯的不足:動(dòng)物

20、消耗量大, 獲得的信息有限,不需要精確的LD50值, 從安全性評(píng)價(jià)角度來講,需要的不是精確的 LD50 ,而是更多的毒性信息,目前ICH(人 用藥品注冊(cè)技術(shù)要求國際協(xié)調(diào)會(huì)議)三方已 主張不采用LD50測定的方法,對(duì)急毒試驗(yàn)的主要要求,原則上:用盡可能少的動(dòng)物獲得盡可能 多的急性毒性信息(3R); 內(nèi)容上:只需提供其近似致死量(最大 耐受量)和詳細(xì)觀察記錄中毒 表現(xiàn); . 方法上:最大耐受量試驗(yàn),固定劑量法、 近似致死量法。,半數(shù)致死量(LD50)測定,試驗(yàn)環(huán)境 受試藥物 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 給藥途徑 給藥劑量 給藥容積 觀察指標(biāo),試驗(yàn)環(huán)境: 符合GLP實(shí)驗(yàn)室的規(guī)范要求溫度(1826C),濕度(4070%

21、),照度(300450Lux,局部150Lux),換氣次數(shù)(1015次/h),壓力(150Pa),菌落數(shù)等。試驗(yàn)單位應(yīng)具有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證。,受試藥物: 一般為浸膏。其工藝基本穩(wěn)定成型、質(zhì)量可控,批號(hào)、來源明確,可用適當(dāng)?shù)娜軇┤芙饣蚧鞈揖鶆?。必要時(shí)應(yīng)設(shè)溶媒對(duì)照。,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物: 注明種屬、品系、來源。應(yīng)出具實(shí)驗(yàn)動(dòng)物供應(yīng)單位的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量合格證。一般依體重確定,小鼠1822g,大鼠120150g,雌雄各半。 類新藥必須用2種動(dòng)物(嚙齒類和非嚙齒類各一種,其中非嚙齒類宜用Beagle犬)。類新藥建議選用2種動(dòng)物;,給藥途徑: 類新藥及可溶于水的至少選用兩種給藥途徑, 其中一種必須

22、是臨床給藥途徑。其它類至少有一種臨床給藥途徑; 小動(dòng)物以LD50 作指標(biāo),大動(dòng)物以ALD作指標(biāo);,給藥劑量: 小動(dòng)物一般設(shè)56個(gè)劑量組,隨機(jī)分組;劑距一般以0.650.85為宜。大動(dòng)物可用50%等量遞升法,求出近似致死劑量(ALD)和最大耐受量(MTD)。,給藥容積: 一般用不等濃度等容量給藥,常規(guī)給藥容量為小鼠 ig 0.20.4ml/10g, ip,sc和iv 0.10.2ml /10g;大鼠 ig 11.5ml/100g, ip,sc和iv 0.51ml/100g;,觀察指標(biāo): 給藥當(dāng)天,尤其是給藥后4h內(nèi)應(yīng)嚴(yán)密觀察并記錄,連續(xù)觀察714天。重點(diǎn)記錄動(dòng)物毒性反應(yīng)情況和死亡情況,包括中毒癥

23、狀、中毒發(fā)生時(shí)間、持續(xù)時(shí)間、恢復(fù)期及最短死亡時(shí)間和最長死亡時(shí)間表,體重變化表。建議采用Bliss法計(jì)算LD50值。,最大給藥量試驗(yàn),在最大濃度和最大給藥體積 (一日內(nèi)23次給藥)的情況 下不引起動(dòng)物死亡的劑量。,長期毒性試驗(yàn) 在新藥安全性評(píng)價(jià)中的作用,目 的 觀察反復(fù)給藥情況下,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物對(duì)受試物出現(xiàn)的毒性反應(yīng),劑量毒性效應(yīng)的關(guān)系,主要靶器官,毒性反應(yīng)的性質(zhì)和損害程度及可逆性等;實(shí)驗(yàn)動(dòng)物能耐受的劑量范圍,無毒反應(yīng)劑量、毒性反應(yīng)劑量及安全劑量范圍。 還可以了解毒性產(chǎn)生時(shí)間、持續(xù)時(shí)間、可能反復(fù)產(chǎn)生毒性反應(yīng)的時(shí)間、有否遲發(fā)性毒性反應(yīng)、有否蓄積毒性或耐受性等。,特 點(diǎn) 長期毒性是研究周期最長,困難最大,

24、耗資最多,難以重復(fù)的試驗(yàn)。但它對(duì)于新藥研究的成功與否起著舉足輕重的作用。 如果說臨床前安全性評(píng)價(jià)對(duì)保證臨床安全用藥有很大作用的話,則長毒試驗(yàn)起著最主要的作用。,意 義 長毒試驗(yàn)是臨床前毒性評(píng)價(jià)的主要內(nèi)容,是新藥審評(píng)的重點(diǎn)內(nèi)容之一,是能否過渡到臨床試用的主要依據(jù)。 其結(jié)果為臨床安全用藥的劑量設(shè)計(jì)提供參考依據(jù),為臨床毒副反應(yīng)的監(jiān)護(hù)及生理生化指標(biāo)監(jiān)測提供依據(jù)。,總之,長期毒性試驗(yàn)是判斷一個(gè)候選藥物是否有進(jìn)一步開發(fā)的價(jià)值、通過權(quán)衡利弊能否過渡到臨床的重要依據(jù)之一。,一般原則,試驗(yàn)設(shè)計(jì):周到合理,實(shí)驗(yàn)條件嚴(yán)格控制; 觀察指標(biāo):力求全面并針對(duì)受試藥特點(diǎn)選擇相應(yīng)的敏感指標(biāo); 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù):應(yīng)經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理(屬正態(tài)

25、分布的,可用t檢驗(yàn)或方差分析;若屬非正態(tài)分布,應(yīng)選用非參數(shù)統(tǒng)計(jì)分析法,如Ridit分析或秩和檢驗(yàn)); 試驗(yàn)結(jié)果:應(yīng)認(rèn)真分析,辨別真?zhèn)?,以判斷?shù)據(jù)結(jié)果的變化是否與藥物有關(guān); 試驗(yàn)結(jié)論:應(yīng)能說明受試藥長期服用時(shí)毒性反應(yīng)的主要特點(diǎn)及安全劑量范圍,提示在臨床試驗(yàn)時(shí)應(yīng)注意觀察哪方面的毒性反應(yīng)。,長期毒性試驗(yàn)的具體要求,長期毒性試驗(yàn)應(yīng)在藥理學(xué)試驗(yàn)(藥效,藥代,一般 藥理,急毒試驗(yàn))之后進(jìn)行;試驗(yàn)設(shè)計(jì)應(yīng)由藥學(xué)、 藥理、毒理、臨床研究人員共同制定; 長毒試驗(yàn)的研究設(shè)計(jì)必須科學(xué)、周到和合理; 嚴(yán)格掌握試驗(yàn)條件、盡量排除干擾; 觀察指標(biāo)力求全面并能針對(duì)新藥的作用特點(diǎn),突重點(diǎn); 認(rèn)真、科學(xué)地分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果,實(shí)事求是辨

26、別真?zhèn)危?數(shù)據(jù)經(jīng)合理的統(tǒng)計(jì)學(xué)處理; 結(jié)論能明確回答新藥毒副反應(yīng)的主要特點(diǎn)及安全劑量的 主要范圍。,試驗(yàn)環(huán)境:同急性毒性試驗(yàn)的要求;受試藥物:處方固定,工藝和質(zhì)量基本穩(wěn) 定。口服制劑建議用提取物或浸 膏灌胃;外用制劑、注射劑可用 原制劑,為提高劑量可進(jìn)行濃縮。 考慮到中試供樣量,可采用混批。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物:動(dòng)物種屬、品系、來源清晰。 應(yīng)出具實(shí)驗(yàn)動(dòng)物供應(yīng)單位的實(shí)驗(yàn) 動(dòng)物生產(chǎn)許可證和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量 合格證。,應(yīng)采用敏感動(dòng)物進(jìn)行試驗(yàn): 嚙齒類動(dòng)物一般選SD或Wistar大鼠,一般為68周齡,試驗(yàn)周期3個(gè)月以上者可選56周齡; 非嚙齒類動(dòng)物選Beagle犬412月,雜種犬5歲以下。年輕動(dòng)物對(duì)藥敏感,另外可觀察對(duì)

27、生長發(fā)育的影響。 試驗(yàn)開始時(shí)體重差異不應(yīng)超過該次試驗(yàn)動(dòng)物平均體重的20%。若用于兒童患者則應(yīng)根據(jù)具體情況采用幼年動(dòng)物。,動(dòng)物數(shù):原則上應(yīng)滿足統(tǒng)計(jì)學(xué)的要求,具體應(yīng)根據(jù)動(dòng)物可能的消耗情況來設(shè)計(jì)(藥物毒性特點(diǎn)、試驗(yàn)要達(dá)到的目標(biāo)、指標(biāo)變異情況、檢測次數(shù)和給藥周期長短等)。 大鼠:每組至少20只,如試驗(yàn)周期為三個(gè)月以上,應(yīng)根據(jù)需要增加數(shù)量至每組3040只; 犬:每組動(dòng)物至少6只,雌(無孕)雄各半(單性別用藥者例外),隨機(jī)分組,對(duì)試驗(yàn)周期為6個(gè)月或9個(gè)月的長毒,應(yīng)根據(jù)試驗(yàn)需要相應(yīng)增加動(dòng)物數(shù)。,給藥途徑:給藥途徑應(yīng)與推薦臨床的途徑一致,否則要說明理由。臨床用藥途徑為靜脈注射時(shí),如有困難亦可用其它適宜的注射途

28、徑代替,詳細(xì)說明給藥方法。若摻食法給藥應(yīng)提供數(shù)據(jù),說明如何保證給藥劑量的一致性,藥物的均一性和穩(wěn)定性;外用藥長毒試驗(yàn)要注意詳細(xì)說明實(shí)驗(yàn)條件(環(huán)境溫度、濕度等)和試驗(yàn)方法(給藥部位、面積、固定方法、持續(xù)時(shí)間、給藥厚度等)。,劑量設(shè)計(jì),可參考藥效學(xué)有效劑量、急性毒性試驗(yàn)(LD50法,MTD法)以及預(yù)試驗(yàn)的結(jié)果來設(shè)計(jì)高、中、低三個(gè)劑量組和一個(gè)對(duì)照組(必要時(shí)設(shè)溶劑或賦形劑對(duì)照組),以找到無毒劑量、中毒劑量和藥物安全范圍。 要求高劑量組原則上力求使動(dòng)物產(chǎn)生明顯的或嚴(yán)重的毒性反應(yīng),或個(gè)別動(dòng)物死亡;低劑量組應(yīng)高于同種動(dòng)物的有效劑量(或按體表面積折算)而不出現(xiàn)毒性反應(yīng);在高、低劑量組之間應(yīng)按等比關(guān)系再設(shè)1個(gè)中

29、劑量組。,劑量設(shè)計(jì),如果小鼠急性毒性試驗(yàn)在最大給藥量情況下仍不出現(xiàn)毒性反應(yīng)和死亡或僅個(gè)別動(dòng)物有毒性反應(yīng)時(shí),可按動(dòng)物藥效劑量或臨床擬用劑量科學(xué)合理的倍數(shù)進(jìn)行設(shè)計(jì)。 建議高劑量組應(yīng)考慮采用最大給藥濃度及動(dòng)物的最大給藥容量來完成長毒試驗(yàn),或相當(dāng)于犬和大鼠藥效學(xué)有效劑量的2030倍。,給藥周期,應(yīng)根據(jù)臨床用藥的實(shí)際情況并結(jié)合適應(yīng)證的特點(diǎn)來定,具體要求我國已基本參照ICH達(dá)成的一致,中藥的毒性試驗(yàn)在充分考慮其特殊性的前提下,也建議與ICH一致。具體規(guī)定: 臨床用藥期 長期毒性試驗(yàn) 1周內(nèi)者, 2周 2周內(nèi)者, 4周 24周, 13周 4周3月, 26周 3個(gè)月以上者, 大鼠26周,犬9個(gè)月 此為最長試驗(yàn)

30、周期。對(duì)需長期反復(fù)應(yīng)用的藥物,應(yīng)做最長試驗(yàn)周期的長期毒性試驗(yàn)。,給藥周期,對(duì)功能主治有若干項(xiàng)的,應(yīng)按臨床最長療程的功能主治來確定長毒給藥周期; 對(duì)一些慢性病的治療藥,應(yīng)根據(jù)疾病臨床實(shí)際所需療程按最長試驗(yàn)周期提供長期毒性資料。,為加快申報(bào)速度減少浪費(fèi),鼓勵(lì)在長毒試驗(yàn)進(jìn)行至與期臨床試驗(yàn)療程相等的給藥時(shí)間時(shí)提交申報(bào)資料。,觀測指標(biāo),1)注意根據(jù)受試藥特點(diǎn)選擇針對(duì)性強(qiáng)的檢測指標(biāo)以反映其毒性特點(diǎn): PP、GP特點(diǎn)下的過量給藥; AT結(jié)果、LT預(yù)試結(jié)果預(yù)測可能的毒性 文獻(xiàn)報(bào)道或臨床預(yù)試的不良反應(yīng); 處方中已知成分的毒性。,2)設(shè)計(jì)指標(biāo)檢測的最佳時(shí)機(jī)和次數(shù)(可參考藥代動(dòng)力學(xué)數(shù)據(jù));,3)對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物一般狀況的

31、觀察是最基本、最重要的內(nèi)容: 體重的變化率與動(dòng)物的攝食量在大多數(shù)情況下的變化是一致的。 出現(xiàn)早、反應(yīng)靈。所以必須計(jì)算體重和攝食量。 其他:瞳孔反射、步態(tài)、精神狀態(tài)等。,4)注意在試驗(yàn)中觀察與免疫毒性相關(guān)的指標(biāo);,5)要重視臟器病理組織學(xué)指標(biāo)的全面檢查,出具正式病理部門簽章的、書寫規(guī)范(高劑量組、空白對(duì)照組)的22個(gè)臟器的病理報(bào)告書,并提供病理照片(尤其是表現(xiàn)出病變的臟器)。,毒理學(xué)試驗(yàn)結(jié)果的綜合分析,分析目的: 數(shù)據(jù)變化是否與受試物有關(guān);以確定無毒反應(yīng)劑量、毒性反應(yīng)劑量及安全劑量范圍。,2. 差異的生物學(xué)意義與統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的關(guān)系: 沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義不等于沒有生物學(xué)意義; 有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義也不等于有生物

32、學(xué)意義; 分析原則:綜合分析,注意系統(tǒng)性和關(guān)聯(lián)性。,3.分析步驟 分析計(jì)數(shù)和計(jì)量資料,數(shù)據(jù)屬于正態(tài)分布,用t檢驗(yàn)或方差分析;數(shù)據(jù)是非正態(tài)分布,應(yīng)用非參數(shù)統(tǒng)計(jì)分析Ridit或秩和檢驗(yàn)(如半定量的計(jì)分?jǐn)?shù)據(jù))是否有差異及統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;差異是否有生物學(xué)意義。,4.具體分析方法(計(jì)數(shù)和計(jì)量資料),統(tǒng)計(jì)學(xué)家:往往強(qiáng)調(diào)P值,不考慮實(shí)際情況; 臨床醫(yī)生:更多考慮臨床的實(shí)際意義; 藥理毒理工作者:應(yīng)將二者結(jié)合起來考慮,才是客觀、可信、可靠的結(jié)論。,不能只求與對(duì)照組的比較,還要說明給藥組兩兩之間的比較,以說明并分析量毒關(guān)系。 如尿量、RBC、WBC及血小板計(jì)數(shù)等,由于系統(tǒng)誤差可能有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P0.05,但因?yàn)橐话?/p>

33、都在正常范圍內(nèi)(指自己實(shí)驗(yàn)室的背景值范圍)的波動(dòng),無量毒關(guān)系,所以無臨床的實(shí)際意義。,綜合考慮同一指標(biāo)的均數(shù)計(jì)量和個(gè)體計(jì)數(shù)結(jié)果的統(tǒng)計(jì)學(xué)和生物學(xué)意義。 如:ALT的“均數(shù)SD”,往往因SD過大而使各組間的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析無顯著差異。 此時(shí)應(yīng)注意分析,SD過大通常是由于某幾例動(dòng)物個(gè)體數(shù)值的異常變化所致。雖然統(tǒng)計(jì)學(xué)無差異,但就某一個(gè)體來說,其數(shù)據(jù)的變化是異常的。此時(shí),應(yīng)列出個(gè)體數(shù)據(jù)再加以分析。,注意選擇敏感指標(biāo) 如:血液檢查常常只注意紅細(xì)胞計(jì)數(shù)而忽視網(wǎng)織紅細(xì)胞的檢查。事實(shí)上RBC計(jì)數(shù)不論在反映溶血或反映紅系造血抑制上都不靈敏。因?yàn)镽BC壽命很長,120d。在此期間,骨髓紅系造血即使受到抑制,外周血也表現(xiàn)不出來,因?yàn)闄C(jī)體可以從貯存庫將紅細(xì)胞動(dòng)員出來,外周血的紅細(xì)胞不致明顯下降。但網(wǎng)織紅細(xì)胞卻是一個(gè)很敏感的指標(biāo),其計(jì)數(shù)下降表明紅系造血障礙和溶血加強(qiáng)。不能因?yàn)镽BC無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義而忽略其可能的毒性,甚至是毒性靶器官。,又如:ALT、AST、ALP、Tbill是檢測肝功的指標(biāo)。ALT是敏感指標(biāo);AST受標(biāo)本溶血影響大;ALP受動(dòng)物年齡影響大,應(yīng)強(qiáng)調(diào)組間對(duì)照。ALP、AST非肝臟特異性酶,也可來自機(jī)體的其他器官,在分析時(shí)要注意。 狗BUN

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