HPV臨床常用檢測方法

1、由于hpv不能在體外細(xì)胞培養(yǎng)，故不能用簡便的血清血檢測進(jìn)行hpv的診斷和分型。臨床上用于檢測hpv的方法包括細(xì)胞學(xué)方法、免疫組化、原位雜交、斑點(diǎn)雜交、核酸印跡和pcr等，其中以pcr方法的敏感性最高，是目前應(yīng)用最多感染的hpv型別、含量、持續(xù)時(shí)間決定病變的發(fā)展與預(yù)后,是進(jìn)行hpv檢測的主要內(nèi)容。目前主要是通過應(yīng)用分子生物學(xué)方法進(jìn)行hpv dna的檢測。1、現(xiàn)有的hpv實(shí)驗(yàn)室主要檢測手段: 聚合酶鏈反應(yīng)(pcr, polymerase chain reaction):擴(kuò)增位于兩段已知序列之間的dna片斷的方法。該法有較高的敏感度,可進(jìn)行hpv分型,缺點(diǎn)是對(duì)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境要求較高,容易發(fā)生樣本間的交叉

2、污染,從而導(dǎo)致假陽性率高。 核酸雜交檢測有較好的特異性和敏感度,還可以進(jìn)行hpv dna的分型,各種核酸雜交檢測方法有一定的優(yōu)缺點(diǎn)。a核酸印跡原位雜交適用于hpv分型和hpv dna分子量鑒定,雖然靈敏度高,但因操作復(fù)雜,需要新鮮組織標(biāo)本,不便在臨床上大規(guī)模使用。b斑點(diǎn)印跡其敏感度和特異性均低于核酸印跡原位雜交法,雖然經(jīng)濟(jì)實(shí)用,但實(shí)驗(yàn)過程存在有放射性污染,是環(huán)保所不能輕視的問題。c原位雜交（in situ hybridization，一種核酸雜交技術(shù)，可用來測定基因或特定核苷酸序列在核酸分子的所在部位，檢測重組體dna） 通過非放射性探針對(duì)石蠟組織進(jìn)行檢測,能作定位檢測,假陽性率低,但靈敏度不

3、高,大大降低了臨床使用價(jià)值。d雜交捕獲法(hybrid capture) 雜交捕獲試驗(yàn)是利用化學(xué)發(fā)光對(duì)抗體捕獲的信號(hào)加以放大。首先使dna雙鏈釋放并分解成為可以雜交的核苷酸單鏈,dna單鏈與rna組合探針結(jié)合為rna-dna雜合體,特異性抗體將rna-dna雜合體捕獲,偶聯(lián)有堿性磷酸酶的第二抗體與rna-dna雜合體結(jié)合,堿性磷酸酶使酶底物發(fā)光,根據(jù)光的強(qiáng)弱可確定堿性磷酸酶的含量,從而確定rna-dna雜合體的含量。能檢測13種高危型hpv,包括hpv16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68。各種檢測方法的比較各種檢測方法的比較方法學(xué)靈敏度特異性技術(shù)特點(diǎn)細(xì)胞

4、學(xué)（cytology）低低操作容易，成本較低，準(zhǔn)確度較差斑點(diǎn)印跡（dot blot）中中有一定放射性核酸印跡原位雜交（southern blot hybridization）高高標(biāo)準(zhǔn)、麻煩，不宜大規(guī)模使用原位雜交（in situ hybridization）高中蠟塊組織包埋內(nèi)檢測hpv雜交捕獲（hc、hc2）高中無放射性，易使用，高、低危型間有交叉反應(yīng)，且不能分型普通多聚酶鏈反應(yīng)（pcr）很高中取材容易，但目前已應(yīng)用試劑的只能檢測少數(shù)單一型別，如6、11、18等，且由于技術(shù)上的問題存在假陽性2、最新推出的hpv的實(shí)驗(yàn)室檢測技術(shù)高靈敏度高危型hpv分型多色熒光實(shí)時(shí)pcr試劑：為歐洲著名分子生物學(xué)

5、研究機(jī)構(gòu)專門針對(duì)宮頸癌篩查而全新設(shè)計(jì)的高危型hpv分型多色熒光實(shí)時(shí)pcr檢測試劑，可同時(shí)檢測高危型中最主要的16、18、31/33、35/45型。了解宮頸疾病人乳頭狀瘤病毒（hpv）感染患者中hpv亞型分布情況及高危型hpv的年齡分布。方法采用專利invader酶切信號(hào)放大法，利用cervista hpv hr cervisat核酸雜交基因分型試劑檢測宮頸脫落細(xì)胞hpv的14個(gè)亞型dna。hpv型組亞型備注a5/a651，56，66a718，39，45，59，68a916，31，33，35，52，58hpv基因分型檢測試劑盒（pcr-反向點(diǎn)雜交法）【產(chǎn)品用途】 對(duì)人乳頭瘤病毒（hpv）的感染情

6、況進(jìn)行定性檢測并加以分型，能夠檢測23種hpv基因型，直接提示感染hpv的基因型；包括18種高危和5種低危型，可用于臨床hpv感染的輔助診斷。【產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)】1.精確分型：能同時(shí)對(duì)23種hpv基因型進(jìn)行精確分型，包括18種高危型和5種地位型；2.效率高：單次檢測標(biāo)本數(shù)量可達(dá)96份；3.性能好：特異性強(qiáng)、重復(fù)性好，均高于98%；4.設(shè)備通用：如普通pcr儀和雜交儀，適應(yīng)于大、中、小型實(shí)驗(yàn)室；5.內(nèi)部質(zhì)控：具有真正意義上的內(nèi)部質(zhì)控，檢測結(jié)果更加準(zhǔn)確；6.可以檢測多種臨床標(biāo)本?！炯夹g(shù)方法】 采用pcr和反向點(diǎn)雜交法相結(jié)合的基因芯片技術(shù)【檢測原理】將大量不同序列的探針分子固定于支持物的不同位置上，然后與已做標(biāo)記的樣本進(jìn)行雜交，通過檢測雜交信號(hào)的強(qiáng)度和分布來進(jìn)行分析?！緳z測標(biāo)本】 宮頸脫落細(xì)胞、液基細(xì)胞學(xué)標(biāo)本、疣體組織、石蠟組織切