白細胞血小板配血試驗.ppt

1、,免疫血液學,-白細胞 血小板 輸血前交叉配血試驗,一、人類白細胞抗原,人類白細胞抗原代表個體特異性 與移植排斥有關(guān)的抗原稱為組織相容性抗原或移植抗原-MHS 編碼MHS的基因組稱為主要組織相容性復合物(MHC) 人類的MHC是首先在白細胞上發(fā)現(xiàn)的，稱為人類白細胞抗原(human leukocyte antigen，HLA),HLA的研究歷史,最早發(fā)現(xiàn)人類白細胞抗原者為Dausset-1954年 HLA不僅僅是白細胞特異性同種抗原。 它是分布廣泛的組織抗原。,HLA的分型命名,血清學分型命名 具有臨床意義的HLA基因有A、B、C、DR、DQ、DP等位點(Loci)，每個位點又有若干等位基因，這

2、些基因的產(chǎn)物便是HLA抗原。 臨床意義比較大的HLA-A、B、C稱為類抗原 HLA-DR、DQ、DP稱為類抗原。,HLA的遺傳,單體型遺傳 存在基因重組 多態(tài)性現(xiàn)象 連鎖不平衡,HLA抗體及抗體檢測,臨床上HLA抗體多由妊娠、輸血或器官移植等免疫產(chǎn)生,HLA在醫(yī)學中的應(yīng)用,一、HLA與輸血 HLA與非溶血性輸血反應(yīng) HLA與血小板輸注 二、HLA與器官移植 (一)腎移植 (二)骨髓移植 三、HLA與親子鑒定,二、血小板血型,一類是與其他細胞表面或組織共有的抗原，稱血小板相關(guān)抗原 另一類為血小板特異性抗原,血小板血型,相關(guān)抗原：主要與紅細胞的ABO血型系統(tǒng)以及人類白細胞抗原(HLA)有關(guān) 特異性

3、抗原：由血小板特有的抗原決定簇組成，表現(xiàn)出血小板獨特的遺傳多態(tài)性，在其他細胞和組織上不能發(fā)現(xiàn),血小板血型,血小板表面存在紅細胞ABO系統(tǒng)的A抗原和B抗原,可能是從血漿中吸附上的。 是否還存在其他紅細胞血型抗原尚在探討之中 在我國，通常進行ABO同型血小板輸血,配合性血小板輸注,ABO同型 血小板抗體的篩選 交叉配合試驗：確保供受體的血小板型和HLA型的配合,血小板血型,血小板特異性抗原 具有獨特的型特異性，并構(gòu)成血小板膜結(jié)構(gòu)中的一部分 血小板特異性抗原有6個血型系統(tǒng)24個抗原，正式命名為HPA-1、HPA-2、HPA-3、HPA-4、HPA-5、HPA-15,血小板血型的臨床意義,一.血小板輸

4、注無效性(PTR) 二.輸血后紫癜(PTP) 三.新生兒同種免疫性血小板減少性紫癜(NAITP) 四.血小板的自身免疫作用-特發(fā)性血小板減少性紫癜(簡稱ITP),血小板同種抗體與輸血,1.ABO血型的選擇 一般需要做主側(cè)或次側(cè)的交叉配血，最好輸注ABO血型配合的血小板 2Rh血型的選擇 D陰性的患者，最好要避免用D陽性獻血者的濃縮血小板。對育齡婦女可以注射Rh免疫球蛋白,三、輸血前免疫血液學檢查,目的:供者與患者的血液,輸血前免疫血液學檢查,內(nèi)容： 患者的病史、標本的核對及處理 供受雙方ABO、Rh血型鑒定 不規(guī)則抗體的篩選和鑒定 交叉配血試驗 報告和發(fā)血,標 本,一、標本采集 二、紅細胞懸液

5、的配制 三、標本的保存,標 本,一、標本采集 1紅細胞標本-ACD或CPD、(Na2-EDTA)抗凝靜脈血 少數(shù)患者有一種自身抗體-不宜用抗凝血液作為紅細胞抗原標本,2血清標本 一般實驗避免使用血漿 配血試驗用血清不超過72小時,二、紅細胞懸液的配制 1、紅細胞懸液常用濃度有2、5和10 2、2的懸液一般用于滴定抗體效價，5的懸液常用于血型鑒定和交叉配血試驗，10的懸液則用于測定抗體的親合力。,三、標本的保存 1血清標本 不稀釋的血清標本如加有防腐劑可在4保存數(shù)月,在一20以下可保存數(shù)年 如用生理鹽水稀釋的血清只限當天使用 2紅細胞標本 一般試驗用的凝血標本要在5天之內(nèi)使用，以不溶血為準。如用

6、保存液可保存3周 用鹽水配制的紅細胞懸液只能在當天使用,供受雙方ABO、Rh血型鑒定,ABO血型正反定型 Rh血型鑒定,試管法,抗A、抗B以外的所有抗體統(tǒng)稱為不規(guī)則抗體。 常見于多次輸血的人群,不規(guī)則抗體的篩選和鑒定,不規(guī)則抗體的篩選和鑒定,患者血清+試劑篩選紅細胞 鹽水介質(zhì) 聚凝胺介質(zhì) 抗人球蛋白介質(zhì),交叉配血試驗,受者血清+供者紅細胞 受者紅細胞+供者血清 方法,主側(cè),次側(cè),鹽水介質(zhì) 聚凝胺介質(zhì) 抗人球蛋白介質(zhì),（1）低離子聚凝胺交叉配血技術(shù),原理：聚凝胺（Polybrene），一種高價陽離子季胺鹽多聚物，溶解后能產(chǎn)生很多正電荷，可以中和紅細胞表面的負電荷，使紅細胞之間距離減少，能引起正常

7、紅細胞可逆性的非特異性凝集。如果使抗體致敏的紅細胞被聚凝胺凝集，則凝集不可逆。,1 紅細胞間有一定間距,2 加入聚凝胺后，可以縮短紅細胞之間的距離，使其非特異性凝集,3 加入枸櫞酸鈉，可以中和聚凝胺,4 紅細胞的非特異性凝集消失,聚凝胺交叉配血技術(shù)示意圖1,聚凝胺,枸櫞酸鈉,1 紅細胞上已有不完全抗體致敏,2 加入聚凝胺后，縮短紅細胞之間的距離，讓不完全抗體可以同時與兩個紅細胞結(jié)合使其特異性凝集,3 加入枸櫞酸鈉中和聚凝胺,4 由于不完全抗體的結(jié)合，紅細胞的特異性凝集不消失,聚凝胺交叉配血技術(shù)示意圖2,聚凝胺,枸櫞酸鈉,不完全抗體,試驗分步原理,血清,紅細胞懸液,加入LIM,混合液,試驗分步原

8、理,Polybrene分子連接到紅細胞上,加入Polybrene,試驗分步原理,離心,Polybrene拉近紅細胞間的距離并造成凝集,1個IgG分子同時連接兩個紅細胞,試驗分步原理,加入重懸液減弱了Polybrene的作用,加重懸液,試驗分步原理,已被血型抗體致敏的紅細胞不會散開,陽性結(jié)果,試驗分步原理,未被血型抗體致敏的紅細胞很快散開,陰性結(jié)果,注意事項,按比例加樣 致敏時間 觀察非特異性凝集 觀察結(jié)果 關(guān)于冷凝集,聚凝胺方法的特點,靈敏：靈敏度比抗球蛋白方法高1-20倍。 速度快：實驗時間5分鐘左右。 準確：準確度高于酶試驗。 不適合于Kell系統(tǒng)抗體的檢測，但黃種人群中Kell系統(tǒng)抗體極

9、罕見。 操作要求較高,（2）微柱凝膠技術(shù),微柱凝膠技術(shù),凝膠技術(shù)的原理,凝膠技術(shù)的原理：,A、反應(yīng)室：下端底孔很小，液體在孵育過程中不會流入下方微柱中。 B、試劑或鹽水層：紅細胞在離心力作用下穿越該層，紅細胞與反應(yīng)室中的血清分離并與該層液體中的試劑反應(yīng)。 C、粘液：親和柱中有一層粘液，作用與“試劑或鹽水層”相同。,1）敏感：在凝膠試驗中常能發(fā)現(xiàn)其它試驗不易發(fā)現(xiàn)的問題。 2）結(jié)果可保存 凝膠試驗的結(jié)果可在冰箱中保存數(shù)日，并且較容易被拍成照片。 3）操作技術(shù)要求較低：凝膠試驗的操作主要是簡單的加樣和判讀，孵育、離心過程都有專門的設(shè)備。其中能被人為改變的因素較少。 4)無需洗滌的抗球蛋白試驗：,優(yōu)點：,缺點：,凝膠試驗方法成本較高，需要特殊設(shè)備。 高度敏感有時也會造成不便：有報導應(yīng)用凝膠試驗后，1/300的庫血直抗陽性。,2不完全抗體可以結(jié)合在紅細胞表面,但是不能和兩個紅細胞同時結(jié)合（致敏）。,3加入抗人球蛋白,1紅細胞彼此之間有一定的間距,4抗人球蛋白可以同時和兩個不完全抗體的FC段結(jié)合，從而把紅細胞連接在一起。,（3）抗人球蛋白交叉配血法示意圖,1.試劑紅細胞(表面標有抗血小板抗體),2.加入供者血小板,3.試劑紅細胞和血小板特異性結(jié)合,4.加入受者的血清,如有抗血小板抗體,則和血小板發(fā)生特異性結(jié)合,5.凝膠柱中的抗人球蛋白捕獲抗血小