高中生物 專題5 課題1 第2課時(shí) DNA的粗提和鑒定課前預(yù)習(xí)學(xué)案 新人教版選修1

1、四川省岳池縣第一中學(xué)2014-2015學(xué)年高中生物 專題5 課題1 第2課時(shí) DNA的粗提和鑒定課前預(yù)習(xí)學(xué)案 新人教版選修1使用說明與學(xué)法指1回顧DNA提取原理與選材2掌握DNA提取過程與純化及鑒定方法知識(shí)準(zhǔn)備1DNA提取原理與選材2提取生物大分子的一般思路教材助讀一、DNA的粗提取主要實(shí)驗(yàn)步驟（以雞血紅細(xì)胞為例）破碎細(xì)胞，釋放DNA（核物質(zhì)）方法：將510mL雞血細(xì)胞液加入20mL 中；用玻棒攪拌5min；用34紗布過濾，以除去顆粒較大的雜質(zhì)過濾；收集 目的：破壞細(xì)胞，釋放核物質(zhì)注意：攪拌不能用力過大，以防止打碎DNA分子；DNA存在：多數(shù)與蛋白質(zhì)結(jié)合，存在于濾液中溶解細(xì)胞核內(nèi)DNA方法：向

2、濾液中加入物質(zhì)的量濃度為 NaCl溶液，攪拌1min；過濾獲取 目的：使與DNA結(jié)合的核蛋白解聚，釋放出DNA；DNA溶解于高溶液NaCl溶液中注意：按同一方向攪拌DNA析出方法：沿?zé)谙驗(yàn)V液中緩慢加入 ，并輕輕按同一方向攪拌，使DNA析出，直到絲狀物不再增加；可以在玻棒上收集到黏稠物目的：降低NaCl溶液濃度達(dá)到0.14mol/L左右，使DNA析出注意：加入的蒸餾水不能過多，使NaCl溶液濃度過低，DNA又會(huì)重新溶解黏稠物：絲狀、略帶黃色（DNA分子上附著有少量蛋白質(zhì)）DNA的初步純化方法：向 2mol/LNaCl溶液20mL中加入黏稠物，并按同一方向攪拌3min，使DNA充分溶解；過濾，

3、收集濾液；向?yàn)V液中貼壁緩慢加入50mL ，并用玻棒按同一方向緩慢、均勻地?cái)嚢?，在玻棒上收集白色絲狀物（DNA）原理： 原理：DNA不溶于乙醇中，而蛋白質(zhì)能溶于酒精二、提取DNA的鑒定1、方法：取甲、乙兩支試管，并向其中加入5mL（等量）的2mol/LNaCl溶液；向甲試管中加入粗提取的DNA，并攪拌使DNA溶解；向兩支試管中各加入4mL（等量）二苯胺試劑，混勻，沸水中加熱5min，待試管冷卻后，比較兩支試管的顏色（藍(lán)色）變化。2、注意點(diǎn)：實(shí)驗(yàn)中需要對照，目的：證明 三、知識(shí)注解 1、破碎細(xì)胞，釋放DNA動(dòng)物：在雞血細(xì)胞液中加入一定量的蒸餾水，使其吸水脹破，達(dá)到破碎細(xì)胞的目的。加入蒸餾水的同時(shí)，

4、要用玻璃棒進(jìn)行攪拌。方法：單向，快速，5min，力量不要過于猛烈，防治打碎DNA。目的是加速血細(xì)胞破裂注意：雞血細(xì)胞破碎以后釋放出的DNA，容易被玻璃容器吸附，所以在提取過程中為了減少DNA的損失，最好使用塑料的燒杯和試管盛放雞血細(xì)胞液問題：這是我們獲得的將是含有細(xì)胞膜、細(xì)胞器的碎片液體，如何初步獲得含有DNA的液體?過濾（ 需要用到3-4層紗布，除去一些顆粒較大的雜質(zhì)，獲得含有DNA的濾液。）植物：植物細(xì)胞有細(xì)胞壁的支持和保護(hù)，因此吸水不會(huì)漲破。我們通常通過研磨來破碎植物細(xì)胞的細(xì)胞壁。在研磨的過程中，一般還會(huì)加入洗滌劑和食鹽。洗滌劑的作用：洗滌劑也分為親水基團(tuán)和親脂基團(tuán)，可以與細(xì)胞膜中的蛋白

5、質(zhì)結(jié)合，使之溶解，進(jìn)而瓦解細(xì)胞膜。食鹽的作用：食鹽中主要含有NaCl，有利于DNA的溶解。問題：這時(shí)的濾液可能含有哪些細(xì)胞成分？ 主要有RNA、核蛋白、多糖等2. 溶解細(xì)胞核內(nèi)的DNA在濃度較高的NaCl溶液溶液中核蛋白容易解聚，游離出的DNA溶解在溶液中。方法：在溶液中加入兩倍體積的濃度為2mol/L的NaCl溶液，用玻璃棒沿一個(gè)方向攪拌1min，使DNA充分溶解。4. DNA的初步純化如果提取的DNA量不夠且其中含有較多雜質(zhì)，是無法用于其它操作的。所以我們必須對DNA進(jìn)行進(jìn)一步的純化。原理：DNA不溶于酒精溶液，但是細(xì)胞中的某些蛋白質(zhì)則溶于酒精。在實(shí)驗(yàn)中，我們可以使用預(yù)冷的酒精，使DNA能

6、夠更好地凝結(jié)方法：將DNA粘稠物再溶解，繼續(xù)用2mol/L的NaCl溶液20mL溶解DNA黏稠物，仍舊沿一個(gè)方向不停攪拌3min，使DNA充分溶解。過濾:用34層紗布進(jìn)行過濾，濾去雜質(zhì)，收集含有DNA的濾液。純化：向?yàn)V液中貼壁緩慢加入50mL預(yù)冷的體積份數(shù)為95%乙醇，并用玻璃棒朝一個(gè)方向緩慢、均勻地?cái)嚢?，溶液中?huì)出現(xiàn)DNA絲狀物。預(yù)冷的酒精具有以下優(yōu)點(diǎn)：、抑制核酸水解酶活性，防止DNA降解 、降低分子運(yùn)動(dòng)，易于形成沉淀析出、低溫有利于增加DNA分子柔韌性，減少斷裂5. DNA的鑒定原理：二苯胺法 在沸水浴的條件下，DNA遇二苯胺變藍(lán)。方法：在2mol/L的NaCl溶液5mL，放入絲狀物，用玻

7、璃棒攪拌，使之溶解。加入4mL的二苯胺試劑?；旌暇鶆蚝?，將試管置于沸水中加熱5min。問題：如果溶液變藍(lán)是否能說明DNA的存在?設(shè)置對照：在5mL 2mol/L的NaCl溶液中加入4mL的二苯胺試劑，置于沸水中加熱5min。對比：甲基藍(lán)鑒定DNA？用甲基綠溶液直接滴在有DNA絲狀物的載玻片或玻棒上，呈藍(lán)綠色反應(yīng)。只用一種即可，不混合用。前者要加熱，后者不加熱預(yù)習(xí)自測題1、 從細(xì)胞核中提取DNA所用的提取溶液是（ ）A. NaCl溶液 B酒精 C蒸餾水 D檸檬酸鈉2、在提取的細(xì)胞核物質(zhì)的溶液中，加入2mol/L的NaCl溶液40ml目的是（ ）A.溶解雜質(zhì) B溶解蛋白質(zhì) C析出DNA D溶解DN

8、A我的疑問學(xué)始于疑怎樣運(yùn)用提取原理提取細(xì)胞中的DNA,如何鑒定提取得到的是否為DNA課內(nèi)探究質(zhì)疑探究探究一、DNA粗提取的主要步驟1、本實(shí)驗(yàn)中幾次過濾？過濾的目的是什么？ 2、 本實(shí)驗(yàn)中幾次加入蒸餾水？目的各是什么？3、 為什么反復(fù)第溶解與析出DNA能夠去除雜質(zhì)4、 分析教材中方案一、二、三的原理方案一： 方案二： 方案三： ；探究二、DNA的鑒定1、實(shí)驗(yàn)結(jié)果評價(jià)：是否提取到DNA？2、粗提取得到的絲狀物為什么略帶黃色？3、影響絲狀物總量的因素有哪些？知識(shí)網(wǎng)絡(luò)圖 破碎細(xì)胞，釋放DNA（核物質(zhì)） 溶解細(xì)胞核內(nèi)DNA 提取主要步驟 DNA析出 DNA的初步純化 DNA的粗提和鑒定 鑒定原理鑒定 試

9、劑：二苯胺 顯藍(lán)色（沸水）當(dāng)堂檢測1DNA粗提取的實(shí)驗(yàn)中，先后兩次向燒杯中加入蒸餾水的作用分別是（ ）A稀釋血液；沖洗樣品 B使血細(xì)胞破裂；降低NaCl濃度，使DNA析出C使血細(xì)胞破裂；增大DNA溶解量 D使血細(xì)胞破裂；提取含雜質(zhì)較少的DNA2在提取的細(xì)胞核物質(zhì)的溶液中，加入2mol/L的NaCl溶液40ml目的是（ ）A溶解雜質(zhì) B溶解蛋白質(zhì) C析出DNA D溶解DNA3提取含雜質(zhì)較少的DNA所用的溶液（ ）ANaCl溶液 B冷卻90%的酒精 C加熱95%的酒精 D冷卻95%的酒精4. DNA析出與鑒定過程中，會(huì)出現(xiàn)白色絲狀物，用玻璃棒攪拌時(shí)為什么要沿一個(gè)方向輕輕攪拌( )A為了省力 B加快

10、蛋白質(zhì)的析出C為了加大DNA的溶解度 D防止DNA結(jié)構(gòu)被破壞5.在DNA析出與鑒定過程中加入酒精的目的是( )A溶解DNA B、除去DNA中所有雜質(zhì)C析出DNA D稀釋溶液降低濃度 6.在DNA粗提取過程中，先后兩次向燒杯中加入蒸餾水的作用分別是( )A.稀釋血液；沖洗樣品 B.使血細(xì)胞破裂；降低NaCl濃度使DNA析出C.使血細(xì)胞破裂；增大DNA溶解量 D.使血細(xì)胞破裂；提取含雜質(zhì)較少的DNA 7.關(guān)于DNA粗提取與鑒定的說法正確的是( )A洗滌劑能瓦解細(xì)胞膜，同時(shí)也能控制DNA在NaCl溶液中的溶解度B在探究洗滌劑對植物細(xì)胞DNA提取的影響實(shí)驗(yàn)中，需要控制的變量是洗滌劑和植物細(xì)胞C常溫下，DNA遇二苯胺被染成藍(lán)色D將濾液放在6075的恒溫水浴箱中保溫1015分鐘能去除