園藝植物生物技術(shù)整合版

1、.第一章緒論1. 什么是生物技術(shù)（biotechnology）？ P1答：生物技術(shù)（biotechnology ）是以現(xiàn)代生命科學為基礎(chǔ)，結(jié)合其他基礎(chǔ)學科的科學原理，利用生物（或生物組織、細胞、器官、染色體、基因、核酸片段等）的特性和功能，設(shè)計、構(gòu)建具有預(yù)期性能的新物質(zhì)或新品系，加工生產(chǎn)產(chǎn)品或提供服務(wù)的綜合性技術(shù)。生物技術(shù)包括傳統(tǒng)生物技術(shù)與現(xiàn)代生物技術(shù)。傳統(tǒng)生物技術(shù)是指通過微生物的初級發(fā)酵來生產(chǎn)產(chǎn)品，如醬油、醋、酒、面包、奶酪、酸奶等食品的制作技術(shù)?，F(xiàn)代生物技術(shù)是指以現(xiàn)代生物學理論為基礎(chǔ)，以基因工程為核心的一系列技術(shù)的總稱。生物技術(shù)已廣泛應(yīng)用于農(nóng)林牧漁、醫(yī)藥食品、輕工業(yè)、化學工業(yè)和能源等領(lǐng)域，

2、與人民生活息息相關(guān)。2.什么是園藝植物生物技術(shù)（biotechnology in horticultural plants）？ P1答：園藝植物生物技術(shù)（biotechnologyin horticulturalplants ）以園藝植物為材料，利用生物技術(shù)，創(chuàng)造或改良種質(zhì)或生物制品的一門技術(shù),它是園藝學和生物技術(shù)的交叉技術(shù)學科，是在植物組織培養(yǎng)、植物細胞工程、植物染色體工程、植物基因工程、植物分子標記和生物信息學等現(xiàn)代生物技術(shù)手段基礎(chǔ)上產(chǎn)生和發(fā)展起來的。這些先進的現(xiàn)代生物技術(shù)在園藝科學上的應(yīng)用構(gòu)成了園藝植物生物技術(shù)的主要內(nèi)容。3. 園藝植物生物技術(shù)的主要內(nèi)容有哪些？P1 5答：園藝植物組織培

3、養(yǎng)（也稱園藝植物離體培養(yǎng)）指無菌和人工控制的環(huán)境條件下，利用人工培育基，對園藝植物的胚胎（成熟和未成熟的胚、胚乳、胚珠、子房等）、器官、（根、莖、葉、花、果實、種子等） 、組織（分生組織、形成層、韌皮部、表皮、表層、薄壁組織、髓部等） 、細胞（體細胞、生殖細胞等） 、原生質(zhì)體等進行離體培養(yǎng)，使其再生發(fā)育成完整植株的過程。植物細胞全能性是植物組織培養(yǎng)的理論基礎(chǔ)。園藝植物細胞工程指應(yīng)用細胞生物學和分子生物學的原理和方法，通過某種工程手段，以植物細胞為基本單位，在離體條件下進行培養(yǎng)、增殖，或人為地使細胞某些生物學特性按人們的意愿發(fā)生改變，從而達到改良品種和創(chuàng)造新品種，加速植物繁殖或獲得某種有用物質(zhì)的

4、過程。園藝植物染色體工程培養(yǎng)獲得單倍體，通過染色體加倍，迅速獲得純系；誘導多倍體，通過選育直接獲得多倍體品種；通過染色體交換、附加或易位，獲得染色體代換系、附加系或易位系。 園藝植物基因工程是以分子遺傳學為理論基礎(chǔ)，以分子生物學和微生物學的現(xiàn)代方法為手段，將不同來源的基因（或DNA分子），按預(yù)先設(shè)計的藍圖，在體外構(gòu)建雜交DNA分子，然后導入園藝植物細胞，以改良園藝植物原有的遺傳特性，獲得新種質(zhì)或新品種。 園藝植物分子標記廣義分子標記是指可遺傳的并可檢測的DNA 序列或蛋白質(zhì)。狹義的分子標記是指能反映園藝植物個體或種群間基因組中某種差異特征的DNA 片段。4.你認為園藝植物生物技術(shù)發(fā)展趨勢有哪些

5、？P11 13答：產(chǎn)業(yè)化步伐加快，由轉(zhuǎn)移抗性性狀向優(yōu)質(zhì)、高產(chǎn)等多種優(yōu)良性狀發(fā)展，常規(guī)育種與生物技術(shù)緊密結(jié)合的實用化進程加速（分子標記技術(shù)、胚挽救技術(shù)和細胞融合技術(shù)、單倍體培養(yǎng)技術(shù)、體細胞無性系變異與篩選技術(shù)） ，基因表達與功能研究更加深入植物組織培養(yǎng)部分（第2 6 章）一主要名詞概念1.植物細胞全能性：植物體的每一個細胞都含有一套完整的基因組，并具有發(fā)育成完整植株的潛能。2.脫分化 ：離體培養(yǎng)下，已經(jīng)分化的細胞，組織或器官莖細胞分裂或不分裂，失去原有的結(jié)構(gòu)和功能而恢復(fù)分生狀態(tài)，形成無組織結(jié)構(gòu)的細胞團或愈傷組織。3.再分化 : 脫分化的細胞或細胞團在適宜條件下可重新分化，形成另一種或幾種細胞，組

6、織，器官，甚至完.整的植株。4.器官發(fā)生途徑:培養(yǎng)條件下的組織或細胞團分化形成不定根，不定芽等器官的過程。5 體細胞胚胎發(fā)生途徑:外植體中體細胞誘發(fā)并形成胚胎的過程。6.外植體 : 用于培養(yǎng)的園藝植物的細胞，組織，器官，胚胎，原生質(zhì)體通常稱為外植體。7.褐化現(xiàn)象 : 植物體內(nèi)酚類物質(zhì)在外植體被切割后氧化形成醌類物質(zhì)，使培養(yǎng)基變褐。8.看護培養(yǎng) : 在培養(yǎng)皿中先加入一定體積的固體培養(yǎng)基，在其上放一塊幾毫米大小的愈傷組織，再在其上放一張無菌濾紙，最后把外植體放在濾紙上。培養(yǎng)基通過愈傷組織和濾紙為外植體供給營養(yǎng)。9.分批培養(yǎng) : 把細胞分散到一定容積的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，當培養(yǎng)物增值到一定量時，轉(zhuǎn)接繼代，

7、建立起單細胞培養(yǎng)物。10. 連續(xù)培養(yǎng) : 在培養(yǎng)過程中不斷注入新鮮培養(yǎng)基，同時排放相同體積的舊培養(yǎng)基，保持反應(yīng)器內(nèi)培養(yǎng)液的體積不變，是營養(yǎng)物質(zhì)連續(xù)得到補充，細胞的生長和增值得以連續(xù)進行。11. 體細胞雜交 : 將不同的植株的原生質(zhì)體，在一定條件下融合成雜種細胞。12. 雄核發(fā)育 ：適宜的離體培養(yǎng)條件下，花粉的發(fā)育可偏離活體時的正常發(fā)育而轉(zhuǎn)向孢子體發(fā)育，經(jīng)胚狀體途徑或器官發(fā)生途徑形成完整植株。13. 雌核發(fā)育 ：胚胎的發(fā)育僅在母體遺傳的控制下進行的一種發(fā)育方式。14. 非整倍體 ：核染色體數(shù)不是染色體基數(shù)的整數(shù)倍，而是發(fā)生個別染色體數(shù)目增減的生物體。15. 代換系 ：生物體的染色體被異源種屬染色

8、體所代換的品系叫代換系。16. 異位系 ：某染色體的一個區(qū)段移接到非同源的另一染色體上，染色體相互發(fā)生片段交換的植株叫相互異位系，染色體片段只從一方移接到另一方染色體上的植株叫簡單異位系。17. 附加系 ：非同種或異種染色體導入受體中，這種染色體在受體中增加的技術(shù)叫染色體附加，具有附加染色體的品系叫附加系。18.限制生長保存： 改變培養(yǎng)物生長的外界環(huán)境條件，限制離體保存材料的生長速度，使細胞生長降至最小限度，但不死亡，從而達到延長繼代培養(yǎng)時間的目的。19.超低溫保存：指在 80 度至 195 度甚至更低溫度下保存生物材料。20.體細胞無性系變異: 植物外植體在組織培養(yǎng)過程中，由于受到非生物因子

9、的誘導發(fā)生變異，進而導致再生植株發(fā)生遺傳變異的現(xiàn)象稱為植物體細胞無性系變異。二各章需掌握的主要內(nèi)容1.植物組織培養(yǎng)的類型有哪些？植株再生途徑主要有哪些？（P1517）答：植物組織培養(yǎng)的類型：按照外植體的不同可分為：胚胎培養(yǎng)，器官培養(yǎng)，組織培養(yǎng)，細胞培養(yǎng)，原生質(zhì)體培養(yǎng)。按照培養(yǎng)及性質(zhì)不同可分為：固體培養(yǎng)，液體培養(yǎng)，半液半固體培養(yǎng)。按照培養(yǎng)方法不同可分為：靜置培養(yǎng)，振蕩培養(yǎng)，看護培養(yǎng)，飼喂培養(yǎng)，微室培養(yǎng)。植株再生途徑：器官發(fā)生途徑、體細胞胚胎發(fā)生途徑、原球莖發(fā)生途徑。2、完整的植物組織培養(yǎng)實驗室包括哪些部分？每一部分具有哪些功能？需要配備哪些儀器設(shè)備？自己能獨立設(shè)計一個組織培養(yǎng)實驗室。( 此題答案

10、為老師課件上的，相關(guān)內(nèi)容在課本p19)答：一、完整的植物組織培養(yǎng)室通常包括洗滌室、化學實驗室、緩沖室、接種室、培養(yǎng)室、細胞學實驗室等部分?？梢愿鶕?jù)實際需要和條件進行設(shè)計。二、組培室各部分功能和所需儀器設(shè)備：（1） 化學實驗室：用于培養(yǎng)器皿的清洗、培養(yǎng)基的配制、分裝和滅菌、試管苗的出瓶及整理等工作。冰箱、天平、高壓滅菌鍋、 pH 計、干燥箱、實驗臺、水槽、涼干架、藥品柜、離心機、水浴鍋、微波爐、電爐、磁力攪拌器、蠕動泵、移液器、各種玻璃器皿（燒杯、量筒、容量瓶、試劑瓶、三角瓶等）及培養(yǎng)基分裝用品等。（2） 接種室：植物材料的滅菌、接種以及培養(yǎng)物的繼代轉(zhuǎn)接等。超凈工作臺、紫外燈、小推車、擱架、磁盤

11、、接種工具（各種鑷子、解剖刀、手術(shù)剪、普通剪刀接種針、酒精燈、手持噴霧器、細菌過濾器等）等。.（3） 培養(yǎng)室：主要用于植物材料的培養(yǎng)。培養(yǎng)架及燈管、搖床（振蕩器）、空調(diào)、自動定時器、加濕及除濕器、光照培養(yǎng)箱、溫濕度計燈等。（4） 細胞學實驗室：主要用于培養(yǎng)材料的顯微觀察及照相等。體視顯微鏡、普通顯微鏡、倒置顯微鏡、熒光顯微鏡、配套顯微照相裝置、普通相機或數(shù)碼相機、切片機及配套制片及染色用品等。細洗滅接種室胞化學實驗室學滌菌培養(yǎng)室實室室驗室緩沖室3、培養(yǎng)基的組成成分包括哪些？常用的植物激素和生長調(diào)節(jié)劑有哪些？需掌握化學名稱和縮寫符號。（ p21 ）答：一、通常植物組織培養(yǎng)所用培養(yǎng)基包括以下六大類

12、成分，即礦質(zhì)營養(yǎng)、有機成分、植物生長調(diào)節(jié)劑、碳源、瓊脂以及其他附加物等。二、常用的植物激素及生長調(diào)節(jié)物涉及五大類植物激素：1、生長素類： IAA 、 IBA 、NAA 、2，4-D2、細胞分裂類：6-BA 、KT （ Kin ）、ZT 、2ip3、赤霉素類： GA3 、 GA4、 GA74、脫落酸： ABA5、乙烯： ETH4、莖尖培養(yǎng)的概念，以種苗繁殖為目的的莖尖培養(yǎng)包括哪些階段？各階段對培養(yǎng)基條件有何要求？（此題答案為老師課件上的）答：莖尖培養(yǎng)又稱分生組織培養(yǎng)，把莖尖的分生組織或包括有此分生組織的莖尖分離進行無菌培養(yǎng)的方法。（百度百科釋義）莖尖培養(yǎng)的階段： 1、起始培養(yǎng)階段 2、增殖培養(yǎng)階

13、段 3、生根培養(yǎng)階段 4、馴化移栽階段各階段對培養(yǎng)基的要求：起始培養(yǎng)階段：A 、培養(yǎng)基類型 : MS 、B5、WhiteB 、碳源的影響 : 蔗糖、葡萄糖等 C、植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)：細胞分裂素、生長素類、赤霉素類、其他有機化合物。 增殖培養(yǎng)階段： A、細胞分裂素濃度直接影響增殖的效果，通常使用濃度低于起始培養(yǎng)階段；B、添加少量的生長素，如 NAA 或 IAA 有利于維持無菌苗適宜的激素平衡，促進增殖。生根培養(yǎng)階段：培養(yǎng)基成分對不定根形成的影響。A 、礦質(zhì)營養(yǎng)： 76%的植物可以在MS, 1/2MS, 1/3MS 培養(yǎng)基上正常生根。低鹽有利于生根（ White, Knop ），提高 Ca 濃度有促

14、進作用。 B 、碳源的影響：多數(shù)植物在 2030gL-1蔗糖有利于生根。無蔗糖生根減少，濃度影響根重。C、 植物激素及生長調(diào)節(jié)物質(zhì)：生長素類：通常為生根必需。細胞分裂素： 通常有抑制作用，使用濃度較低。 ABA 和 GA：ABA/GA3 高比值促進生根。馴化移栽階段：洗去培養(yǎng)基，生根苗培養(yǎng)基中由于帶有蔗糖而易滋生細菌和真菌。選擇適宜的馴化基質(zhì)：透氣保水性要好。蛭石、泥炭、珍珠巖等。5、莖尖分生組織培養(yǎng)脫毒的原理是什么？影響脫毒效果的主要因素有哪些？病毒檢測方法包括哪些？其他脫毒方法還有哪些？答：一、脫毒原理：（p38 ）病毒在植物體內(nèi)的分布不均勻，越靠近頂端區(qū)域，帶毒越少，頂端分生組織（ 0.

15、2-0.5 mm）不帶病毒或含病毒量極低。因此，分離分生組織細胞進行培養(yǎng)，可以獲得無病毒種苗。二、影響脫毒效果的主要因素 :脫毒效果與莖尖大小的關(guān)系：脫毒效果和莖尖分生組織大小直接相關(guān)，莖尖分生組織越小，脫毒率越高，.但生長速度慢。如草莓莖尖切取0.2-0.3mm 時，脫毒率達到100%，而切取1.0mm 時，脫毒率為50%。因此，脫毒培養(yǎng)時，需要兼顧脫毒率、成活率及莖尖發(fā)育成完整植株的能力。既要脫除病毒，也要使莖尖分生組織迅速生長發(fā)育。一般莖尖分生組織大小以0.2-0.5mm 為適宜。三、病毒檢測方法： （ p41 ）形態(tài)檢測法指示植物法血清鑒定法分子生物學檢測法，包括核酸雜交技術(shù)、聚合酶鏈

16、反應(yīng)、雙鏈核糖核酸分析。電子顯微鏡檢測。四、其他脫毒方法： （p40）花器官培養(yǎng)脫毒，珠心胚培養(yǎng)脫毒，化學脫毒，超低溫處理脫毒，合并熱處理、莖尖培養(yǎng)或微嫁接脫毒。6、種苗離體快繁中污染發(fā)生的原因主要有哪些？如何控制污染的發(fā)生？（此題答案為老師課件上的）答：一、污染發(fā)生的原因：（ 1）培養(yǎng)基和接種用具滅菌不徹底；（ 2）外植體滅菌不徹底； （ 3）操作時人為帶入；（ 4）接種室環(huán)境不潔凈； （5）超凈工作區(qū)域不潔凈。二、控制污染的措施： （ 1）滅菌時充分排凈鍋內(nèi)冷空氣；（ 2）接種器具充分灼燒； （ 3）污染外植體及時挑出，滅菌后倒掉。外植體材料少可二次處理；（4）接種時用 75%乙醇擦拭雙手

17、和培養(yǎng)容器，操作區(qū)不放置過多的培養(yǎng)容器； (5) 接種室定期熏蒸或消毒液處理；并采用紫外燈進行空氣殺菌；（ 6）超凈工作臺定期清洗過濾網(wǎng)。7、原生質(zhì)體分離中材料預(yù)處理方法有哪些？原生質(zhì)體分離常用的酶類有哪些：原生質(zhì)體如何分離和如何純化？原生質(zhì)體培養(yǎng)方法有哪些？答：一、預(yù)處理方法： （ p88）低溫處理。以葉片等外植體為試材時，將其置于4下，黑暗中處理 12天，起源升值的產(chǎn)量高，均勻一致，分裂頻率高。等滲溶液處理。把材料放在等滲溶液中（如13甘露醇）數(shù)小時，再放到酶液中分離原生質(zhì)體，能提高其產(chǎn)量和活性，尤其是多酚化合物含量高的植物，如蘋果、梨等，采用這種方法處理效果好。二、常用的酶類有： A.

18、纖維素酶 B. 果膠酶 C. 崩潰酶 D. 半纖維素酶三、分離：（ p90） 原生質(zhì)體分離有機械法及酶消化法，前者產(chǎn)量極低而不多用、 后者又分步法及二步法。一步法是將材料在 2l 一 28用纖維素酶及果膠酶混合液一次性處理224h。 二步法是將材料先用果膠酶降解胞間膠層得到單細胞，再用纖維素酶脫壁而釋放原生質(zhì)體。四、純化：離心法漂浮法界面法滴洗法五、 1. 培養(yǎng)方法：（p91 ）（1）固體培養(yǎng)：平板培養(yǎng)法（ 2）液體培養(yǎng)： A. 淺層培養(yǎng)法 B. 懸滴培養(yǎng)法 C. 雙層培養(yǎng)法 D. 看護培養(yǎng)法8. 原生質(zhì)體融合方法有哪些？雜種細胞如何篩選？（ p93）答：原生質(zhì)體融合的方法包括化學誘導融合方法

19、和物理誘導融合方法。A.化學誘導融合包括： （ 1）鹽類融合法（2）高 PH高鈣離子法（3）PEG 法B.誘導原生質(zhì)體融合的物理因素有顯微操作、離心震蕩、激光照射以及電融合等。其中電融合應(yīng)用最為普遍。9. 離體小孢子發(fā)育 （雄核發(fā)育） 途徑有哪些？花粉分離方法有哪些？影響花藥和花粉培養(yǎng)的主要因素有哪些？培養(yǎng)適宜時期是哪個時期？預(yù)處理的方法有哪些？(98)答 : (1)根據(jù)小孢子最初幾次分裂方式的不同，可將花藥和花粉培養(yǎng)中雄核發(fā)育的途徑歸納為：小孢子發(fā)育途徑（途徑I ）、營養(yǎng)細胞發(fā)育途徑（途徑II ）、生殖細胞發(fā)育途徑（途徑III ）、生殖細胞和營養(yǎng)細胞共同發(fā)育途徑（途徑IV ）。（ 2）花粉分

20、離的方法： 1.花藥漂浮培養(yǎng)自然釋放法 2.機械分離法（ 3）影響花藥和花粉培養(yǎng)的主要因素： 1.供體植株基因型 2.小孢子發(fā)育時期 3.供體植株的生理狀態(tài) 4.預(yù)處理 5.培養(yǎng)基成分 6.培養(yǎng)條件 7.接種密度和方向（ 4）培養(yǎng)適宜時期：對大多數(shù)園藝植物而言，小孢子發(fā)育到單核期左右是適宜培養(yǎng)的小孢子發(fā)育時期。（ 5）預(yù)處理方法： 主要方法有低溫、 熱激、化學藥劑、 高滲透壓和離心等。 以低溫處理最為常用和有效。10. 植物染色體加倍的方法有哪些？化學方法誘導加倍常用試劑有哪些？影響加倍的因素包括哪些？多倍體鑒定方法有哪些？（ p104 109）.答：（ 1）加倍方法： 1.浸種法2.浸芽法3

21、.滴苗法4.涂抹法5.套罩法6.毛細管法（2）常用試劑：秋水仙素、氨磺靈、氟樂靈、APM（3）影響因素： 1.外植體2.加倍劑類型3.加倍劑的濃度和處理時間4.加倍劑的加入時間5.助劑（4）鑒定方法： 1.形態(tài)學鑒定2.細胞學鑒定3.生理生化鑒定4.分子生物學鑒定11.限制生長保存的方法有哪些？超低溫保存的基本程序是什么？（p58 ）答：（ 1）限制生長保存的方法：改變培養(yǎng)環(huán)境 （如降低培養(yǎng)溫度、減少培養(yǎng)瓶內(nèi)氧氣含量、減少光照等）、提高培養(yǎng)基滲透壓、加入生長抑制劑、饑餓法、失水干燥保存等。（不確定）（2）超低溫保存基本程序：包括材料準備、預(yù)處理、冷凍處理、冷凍儲存、解凍和再培養(yǎng)。12.體細胞無

22、性系變異的來源有哪些？無性系變異的發(fā)生與哪些因素有關(guān)？（p68）答：（ 1）主要有兩種來源：1.外植體細胞中預(yù)先存在而在再生植株中表現(xiàn)出來的變異2.植物組織培養(yǎng)過程中誘導產(chǎn)生的變異（2）因素： 1.培養(yǎng)基成分和培養(yǎng)條件2.植株再生途徑3.培養(yǎng)時間和繼代頻率4.母本植株的遺傳狀態(tài)基因工程部分（第7 11 章）第七章園藝植物基因工程的基礎(chǔ)知識與技術(shù)1.遺傳工程（ genetic engineering) 的基本概念是什么？P114答：基因工程（ genetic engineering)是將外源基因通過體外重組后倒入受體細胞內(nèi)，是這個基因能在受體細胞內(nèi)復(fù)制，轉(zhuǎn)錄，翻譯，表達的系列操作技術(shù)的總稱。2.

23、遺傳信息的物質(zhì)載體是什么？主要類型？P114答：載體：核酸主要類型：核酸分為兩類：一類為脫氧核糖核酸（DNA ），另一類為核糖核酸（RNA ）3.DNA 一級結(jié)構(gòu)與功能有何特點？DNA 二級結(jié)構(gòu)有何特點？P114 P115答： DNA 的一級結(jié)構(gòu)是指DNA 分子中脫氧核苷酸（dAMP,dCMP,dGMP,dTMP ）按照一定的排列順序，通過磷酸二酯鍵連接形成的多核苷酸。由于核苷酸之間的差異僅僅是堿基的不同，故又稱為堿基順序。核苷酸的連接方式是一個核苷酸的5位磷酸與下一位核苷酸的3-OH 形成 3，5-磷酸二酯鍵，構(gòu)成不分支的線性大分子，其中磷酸基和戊糖基構(gòu)成DNA 鏈的骨架，可變部分是堿基排列

24、順序，因此習慣上以堿基名稱的簡寫形勢作為核苷酸順序的代表符號。DNA 的二級結(jié)構(gòu)即雙螺旋結(jié)構(gòu)。DNA 分子由兩條反向平行的多聚核苷酸鏈圍繞同一中心軸盤曲而成，兩條鏈均為右手螺旋，鏈呈反平行走向，一條走向是5 3，另一條是 3 5。DNA 鏈的骨架由脫氧核糖基和磷酸基構(gòu)成，位于雙螺旋的外側(cè)，堿基配對位于雙螺旋的內(nèi)側(cè)。兩條多聚核苷酸鏈以堿基之間形成氫鍵配對而相連，即 A 與 T 配對兒，形成兩個氫鍵，G 與 C 配對，形成三個氫鍵。堿基相互配對又叫堿基互補。堿基對平面與螺旋軸幾乎垂直，相鄰堿基對沿軸轉(zhuǎn)36?，上升 0.34nm。每個螺旋結(jié)構(gòu)含 10bp，螺旋的距為 3.4nm。DNA 兩股鏈之間的

25、螺旋形成凹槽，一條淺的，叫小溝，一條深的，叫大溝。大溝是蛋白質(zhì)識別 DNA 堿基序列發(fā)生作用的基礎(chǔ)，是蛋白質(zhì)和DNA 可結(jié)合而發(fā)生作用。4.真核生物信使 RNA （mRNA) 的結(jié)構(gòu)與功能？ P116答：結(jié)構(gòu)： mRNA 的 5端被加上一個甲基化的鳥苷酸殘基帽子，在mRNA3 端多了一段長 100200 個腺苷酸 poly （ A ） 的尾巴結(jié)構(gòu)。 mRNA 從 5端到 3端的結(jié)構(gòu)依次是5帽子結(jié)構(gòu)， 5非編碼區(qū)，決定多肽氨基酸序列的編碼區(qū)， 3端非編碼區(qū)和多聚腺苷酸尾巴。功能： 3端 poly （ A） 結(jié)構(gòu)可能與增加轉(zhuǎn)錄活性以及mRNA 趨于相對穩(wěn)定有關(guān)。 mRNA 的 5端帽子結(jié)構(gòu)主要有以

26、下3 方面的功能：封閉mRNA 的 5端，使其沒有游離的5磷酸，這種結(jié)構(gòu)有抗5- 外切核酸酶降解的作用，使mRNA 更穩(wěn)定。作為mRNA 與核糖體結(jié)合的信號，無帽子結(jié)構(gòu)的mRNA 不能與核糖體的 40S 亞基結(jié)合?？赡芘c蛋白質(zhì)合成的正確起始作用有關(guān)。5.什么叫 tRNA 與 rRNA ？ P116 P117答： tRNA ：tRNA 是細胞內(nèi)分子質(zhì)量最小的一類核酸，由70120 核苷酸組成，各種tRNA 無論在一級結(jié).構(gòu)上，還是在二級，三級結(jié)構(gòu)上均有一些共同點。tRNA中含有 10%20% 的稀有堿基。 tRNA 約占細胞總RNA 的 15%。tRNA 的作用是 3端攜帶相應(yīng)的氨基酸將其轉(zhuǎn)運到

27、核糖體上以供蛋白質(zhì)合成。rRNA 是細胞內(nèi)含量最多的RNA ，約占 RNA 總量的80%以上。 rRNA 分子是蛋白質(zhì)合成工廠的核糖體的組分。核糖體由 rRNA 分子和蛋白質(zhì)組成， 并在大部分細胞中大量存在。典型的真核生物核糖體包含40S和 60S 兩個亞基。大亞基包含3 種 rRNA （28S,5.8S 和 5S)與 49 條多肽。小亞基只包含一個18S 的 rRNA和 33 條多肽。各種生物核蛋白體小亞基中的rRNA 具有相似的二級結(jié)構(gòu)。6.什么是遺傳中心法則？（可以圖示）P118答： DNA 通過復(fù)制把遺傳信息由親代傳遞給子代，在后代生長發(fā)育過程中，DNA 通過轉(zhuǎn)錄將遺傳信息轉(zhuǎn)入 RNA

28、 中，RNA 又通過翻譯將遺傳信息表達為特異的蛋白質(zhì)，以執(zhí)行各種生命功能， 這就是著名的的 “中心法則”。在某些情況下， RNA 也可作為遺傳信息的攜帶者，進行自我復(fù)制，還有許多包含由RNA 分子構(gòu)成的基因組反轉(zhuǎn)錄病毒，通過反轉(zhuǎn)錄的方式將遺傳信息傳遞給DNA ，單鏈 RNA 分子被轉(zhuǎn)換為雙鏈DNA拷貝，隨后插入宿主細胞基因組。圖略7.什么叫限制性核酸內(nèi)切酶？根據(jù)識別位點嚴格專一性可分為哪三類？P119答：限制性內(nèi)切核酸酶是一類能夠識別雙鏈DNA分子中某一特定核苷酸序列，并能對核酸內(nèi)部的磷酸二酯鍵進行切割的一種內(nèi)切核酸酶。類型： I 型酶， II 型酶， III 型酶I 型酶能識別專一的核苷酸序

29、列，并在識別點附近切割雙鏈，但切割序列沒有專一性。II 型酶識別位點（回文序列）嚴格專一，并在識別位點內(nèi)將雙鏈切斷。（最具實用價值）III 型酶識別位點嚴格專一（不是回文序列），但切點不專一，往往不在識別位點內(nèi)部。9.什么叫 DNA 連接酶？（百度）答：是一種封閉DNA 鏈上缺口酶，借助ATP 或 NAD 水解提供的能量催化DNA 鏈的 5-PO4與另一DNA 鏈的 3-OH 生成磷酸二酯鍵。11.什么是反轉(zhuǎn)錄酶？常用有哪些？主要用途？（P121）答：反轉(zhuǎn)錄酶（ reverse transcriptase）是以 RNA 為模板指導脫氧核苷酸合成互補DNA 的酶。常用兩類：AMV ：二鏈多肽。具

30、5 3DNA 活性。具很強的RNA 酶活性（用途：降解與DNA 雜交的 RNA ）；M M uLV ：單肽。 RNaseH 活性弱。（用途：合成較長cDNA ）。12.植物基因工程常用載體的作用？理想載體應(yīng)具備條件？根據(jù)功能可分為哪幾類？（P123）答：作用：把外源DNA 帶進宿主細胞，并使之在細胞內(nèi)建立穩(wěn)定的遺傳狀態(tài)，在細胞內(nèi)繁殖、傳代或進行表達。條件：能自主復(fù)制，即外源DNA插入后也如此。載體應(yīng)具備可供選擇的遺傳標記，可以借助于這些標記容易地把轉(zhuǎn)化的細胞與未轉(zhuǎn)化的分開，把重組分子與非重組分子所轉(zhuǎn)化的細胞相區(qū)別，便于進行重組體篩選和堅定。載體分子的合適位置上必須有供外源DNA插入的位點，即克

31、隆位點。載體本身應(yīng)盡量小，不含或盡量少含多余DNA 部分，這樣可以容納較大外源DNA 。載體的特征應(yīng)是充分掌握的，包括基因和酶切位點的準確位置，以及它的核苷酸序列。功能分類：克隆載體：主要是對目的基因克隆，建立 DNA 文庫和 cDNA 文庫，其上有復(fù)制子即可表達載體：能使目的基因在宿主細胞表達充分穿梭載體：可在原核細胞中復(fù)制，也可在真核細胞中擴增表達。13.質(zhì)粒載體的基本特性？常用質(zhì)粒載體種類？（P123124）答：質(zhì)粒（ plasmid）存在于多種細菌中，是能自主復(fù)制的雙鏈環(huán)狀DNA分子，是染色體外獨立的遺傳因子。除含有 DNA 復(fù)制原點外，還產(chǎn)生抗生素、低抗抗菌素、降解有機化合物，產(chǎn)生大

32、腸菌素，內(nèi)毒素，或限制性和修飾性的酶等基因。常用種類： pBR322 和 pUC 系列質(zhì)粒。14.下列符號含義：Amp R,Tet r ,Cm r ,Kan r （ P124）答：抗氨芐青霉素標記抗四環(huán)素標記抗氯霉素標記抗卡那霉素標記16.什么是Yeast Artificial chromosome、Bacterial Artificial chromosome?.答：是酵母人工染色體 （ Yeast Artificial chromosome ，YAC ）。是目前能容納最大外源DNA 片段的載體。（P126）細菌人工染色體（ Bacterial Artificial chromosome，

33、BAC ） 指一種以 F 質(zhì)粒（ F-plasmid ）為基礎(chǔ)建構(gòu)而成的細菌染色體克隆載體， 長用來克隆 150kb左右大小的 DNA 片段，最多可保存 300kb個堿基對。（百度）17.什么是 PCR ？ PCR 反應(yīng)原理、主要體系與主要步驟？答：聚合酶鏈式反應(yīng)（ polymerase chain reaction,PCR）。是利用酶促反應(yīng)體外合成特異DNA片段的新方法。反應(yīng)原理：由高溫變性、低溫退火和適溫延伸三部。反應(yīng)體系： PCR 反應(yīng)緩沖液；模板DNA ；底物 dNTP 濃度；引物； DNA 聚合酶及其濃度主要步驟：在高溫（ 95）下，待擴增的靶 DNA 雙鏈受熱變性成為兩條單鏈DNA

34、 模版；再在低溫（3755 ）下，兩條人工合成的寡核苷酸引物與互補的單鏈DNA 模版退火結(jié)合形成部分雙鏈；最后將溫度升到 72左右保溫，以引物 3端為合成起點，以4 種脫氧核苷酸（ dNTP ）為原料，沿模版以5 3方向延伸，合成心得互補鏈。這樣，每一雙蓮的DNA模板，經(jīng)過一次解鏈、退火、延伸3 個步驟的熱循環(huán)后就成了兩條 DNA 分子。如此反復(fù)， PCR 產(chǎn)物以 2n 的指數(shù)形式迅速擴增，經(jīng)過2530 個循環(huán)后，理論上可使模板 DNA 擴增 106107 倍以上。18. 什么是 RT-PCR 與實時定量 PCR （ real time PCR） p133RT-PCR：以 mRNA 為模板，反

35、應(yīng)體系中， 加入反轉(zhuǎn)錄酶， RNA 經(jīng)過反轉(zhuǎn)錄酶反轉(zhuǎn)錄為cDNA，再以 cDNA為模板進行的 PCR 反應(yīng)稱為 RT-PCR。RT-PCR具有很高的敏感性，可以用來分析不同組織或是相同組織不同發(fā)育階段中 mRNA 表達狀況的相關(guān)性。實時定量 PCR：是一種在反應(yīng)體系中加入熒光集團，運用Taq 酶的 5-3 外切核酸酶活性和熒光能量傳遞技術(shù)，巧妙地把核酸擴增，雜交，光譜分析和實時檢測技術(shù)結(jié)合在一起，借助于熒光信號的積累來實時監(jiān)測整個 PCR 進程，最后通過標準曲線對未知核酸模板進行定量分析的方法。可分為絕對定量和相對定量兩種。19. Southern印跡雜交、 Northern雜交、 Weste

36、rn雜交主要檢測對象是什么？P135Northern 雜交用于分析RNA； Southern 雜交用于分析DNA ；Western 雜交用于分析蛋白質(zhì)。第八章園藝植物基因的分離與克隆1.什么是 GMOs ？GMOs:Genetically modified organisms（即轉(zhuǎn)基因作物）轉(zhuǎn)基因作物： 通過基因工程技術(shù)導入某種基因的植物、動物、微生物。所謂轉(zhuǎn)基因生物,即為了達到特定的目的而將 DNA 進行人為改造的生物。通常的做法是提取某生物具有特殊功能( 如抗病蟲害、增加營養(yǎng)成分)的基因片斷 ,通過基因技術(shù)加入到目標生物當中。（百度）2. 第一代與第二代轉(zhuǎn)基因作物有何特點？第一代轉(zhuǎn)基因作物

37、是抗病、抗蟲、抗除草劑轉(zhuǎn)基因作物。第二代轉(zhuǎn)基因作物主要目的是提高作物產(chǎn)品的品質(zhì)，增加營養(yǎng)保健。更豐富的微量元素，維生素和蛋白質(zhì)，低脂肪，低膽固醇，抗癌，藥用。（ ppt 上內(nèi)容）3. 園藝植物基因工程技術(shù)主要步驟？（ppt 上）目的基因分離與克隆- 目的基因修飾（啟動子，終止子）-植物表達載體構(gòu)建- 遺傳轉(zhuǎn)化（ Ti 介導的質(zhì)粒轉(zhuǎn)化，PEG 介導的原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化，植物DNA 病毒介導的轉(zhuǎn)化，電激，基因槍，花粉管通道法）- 轉(zhuǎn)化植物細胞的篩選 - 植株再生 - 轉(zhuǎn)基因植株鑒定（ PCR ，southern 或 western 雜交，表型檢測） - 發(fā)放或進一步培育新優(yōu)品種4.什么是基因gene ？

38、P118五基因是實體，它的物質(zhì)基礎(chǔ)是DNA 或 RNA ，基因是具有一定遺傳效應(yīng)的DNA 分子中特定的核苷酸序列，它是遺傳信息傳遞和性狀分化，發(fā)育的依據(jù)，基因是可分的。根據(jù)基因的產(chǎn)物可將基因分為結(jié)構(gòu)基因，調(diào)節(jié)基因，無翻譯產(chǎn)物基因。簡言之，基因是一個含有特定遺傳信息的核苷酸序列，它是遺傳物質(zhì)的最小功能單位。5.基因的 4 個基本特性？（ppt ）.都有固定的一級結(jié)構(gòu)，即核苷酸序列每一個基因在染色體均占有特定的位置（座位）均有特定轉(zhuǎn)錄模式（編碼mRNA 或大多數(shù)基因均有特定的功能6.基因文庫的定義及類型？（課本p138)基因文庫（ gene library) 是一組 DNA 或 cDNA 序列克隆

39、的集合體。園藝植物基因組文庫是指來自園藝植物基因組全部DNA片段組成的基因文庫。一般要求所構(gòu)建的植物基因組文庫必須符合以下幾個基本條件：文庫能夠覆蓋整個基因組插入的DNA片段比較大文庫易于保存且比較穩(wěn)定基因文庫包括基因組文庫（genomic library) 和 cDNA 文庫（ cDNA library) 。7.基因組 DNA 文庫構(gòu)建主要流程？（課本p138）載體的制備大片段基因組DNA 的制備大片段 DNA 與克隆載體的連接載體的遺傳轉(zhuǎn)化克隆的挑取、驗證文庫的擴增、分裝于保存8.cDNA 文庫構(gòu)建流程？（ ppt)含有目的基因的組織或細胞純化 mRNA 樣品的制備cDNA 第一鏈的合成雙

40、鏈 cDNA的合成cDNA 的甲基化銜接頭與 cDNA 相連接制備 cDNA 文庫9. 什么是基因序列同源克隆(p152) 與圖位克隆 Map-basde cloning?不同物種間基因和基因順序具有保守性。基因序列同源保守性：不同種植物，行駛類似功能的基因，其一級結(jié)構(gòu)可能相同或極其相似。據(jù)此，從一種生物中分離獲得的基因可被用作探針，來分離另一生物與之相應(yīng)的同源基因。（ ppt)圖位克隆 (Map-basde cloning) 又稱定位克?。╬ositional cloning) ，是根據(jù)目標基因在染色體上位置進行基因克隆的一種方法。圖位克隆的原理是首先找到一個與目標基因相連的DNA分子標記，

41、然后通過染色體步移技術(shù)克隆分離出目標基因。（書本 p144)第九章園藝植物遺傳轉(zhuǎn)化載體的構(gòu)建1.有效的植物遺傳轉(zhuǎn)化載體必須具備的功能？（ppt)能作為媒介將外源基因?qū)胫参锛毎⑶艺系剿拗骷毎幕蚪MDNA 上。能提供被宿主細胞的復(fù)制和轉(zhuǎn)錄系統(tǒng)所識別的DNA序列，即啟動子和復(fù)制子起始位點，以保證外源基因能在植物細胞中進行復(fù)制和表達。2.Agrobacteriumtumefaciens 與 Agrobacteriumrhizogenes 是什么？植物體遺傳轉(zhuǎn)化中常用的質(zhì)粒載體？（ ppt)Agrobacterium tumefaciens ：根癌農(nóng)桿菌Agrobacterium rhizog

42、enes ：發(fā)根農(nóng)桿菌Ti 質(zhì)粒載體， Ri 質(zhì)粒載體3、 Ti 質(zhì)粒的主要結(jié)構(gòu)？P159答：根據(jù)功能不同可以將Ti 質(zhì)粒劃分為 4 個區(qū)段： 1、與基因轉(zhuǎn)移相關(guān)的 T-DNA 區(qū)； 2、激活 T-DNA 的轉(zhuǎn)移，使農(nóng)桿菌對植物表現(xiàn)出侵染性的毒性區(qū)，即Vir 區(qū)； 3、調(diào)控 Ti 質(zhì)粒在農(nóng)桿菌間發(fā)生結(jié)合轉(zhuǎn)移的Con區(qū)； 4、調(diào)控 Ti 質(zhì)粒自我復(fù)制的 Ori 區(qū)4、什么是 ”卸甲載體 ”（ disarmed vector ）？P159卸甲載體是無毒的 Ti 質(zhì)粒載體，又稱 onc-載體，是將 Ti 質(zhì)粒的 T-DNA 區(qū)中的有致瘤作用的onc-基因切除，即“卸甲”，以此作為遺傳轉(zhuǎn)化載體時，不會

43、影響植物的生長。5、什么叫共整合載體（ co-integrated vector ）? P161指中間載體與改造后的受體Ti 質(zhì)粒之間，通過同源重組所產(chǎn)生的一種復(fù)合型載體。由于該載體的T-DNA區(qū)與 Ti 質(zhì)粒的 Vir 區(qū)連鎖，因此又稱為順式載體。6、什么叫雙元載體（binary vector ）系統(tǒng)？其特點是什么？P164.是指由兩個分別含有T-DNA 區(qū)和 Vir 區(qū)的相容性突變Ti 質(zhì)粒構(gòu)成的雙質(zhì)粒系統(tǒng)。特點： 1、可以在大腸桿菌和根癌瘤桿菌中復(fù)制，并且和Ti 質(zhì)粒是相容的；2、具有Ti 質(zhì)粒的左右兩側(cè)或右側(cè)的邊緣區(qū)序列，使 DNA 可以轉(zhuǎn)移到植物細胞； 3、邊緣區(qū)序列內(nèi)包含植物選擇標

44、記嵌合基因，用于轉(zhuǎn)基因陽性株的初步篩選； 4、帶有抗生素基因，一般是 Kanr 基因，可以作為細菌轉(zhuǎn)化子的選擇記號。7、載體構(gòu)建中常用的選擇標記基因（ selectable marker gene ）概念與基本特點？列舉 1-2 種常用的選擇標記基因。概念：選擇標記基因是指其編碼產(chǎn)物能夠使轉(zhuǎn)化的細胞、組織具有對抗生素或除草劑及其他一些脅迫物質(zhì)的抗性， 或者使轉(zhuǎn)化的細胞、組織具有代謝的優(yōu)越性，從而在含有這些選擇試劑的培養(yǎng)基中能夠繼續(xù)存活，進而將轉(zhuǎn)化的細胞、組織從大量的細胞或組織中篩選出來的一類基因。特點： 1、編碼一種不存在于正常植物細胞中的酶；2、基因較小，可構(gòu)成嵌合基因；3、能在轉(zhuǎn)化細胞中得

45、到充分表達； 4、檢測容易，并能定量分析；5、選擇劑最好能夠抑制植物細胞的正常生長，但并不殺死細胞，因為死細胞往往對鄰近細胞有很強的抑制作用；6、標記基因的表達產(chǎn)物應(yīng)為轉(zhuǎn)化細胞提供抵抗選擇劑抑制的作用，選擇培養(yǎng)基中使用的抗代謝物（即選擇劑）對轉(zhuǎn)化細胞再生植株的生長發(fā)育不應(yīng)有明顯的影響； 7、最好有一種簡便方法可以檢測選擇標記基因在轉(zhuǎn)化細胞或植株中的表達。舉例： Kan r(卡那霉素抗性基因) 、Tetr(四環(huán)素抗性基因 ) 、Amp r(氨芐青霉素抗性基因 )8、載體構(gòu)建中常用的報告基因（reporter gene ）概念與基本特點？列舉1-2 種常用的報告基因。是指其編碼產(chǎn)物能夠被快速地測定

46、，通過它的表達來標定目的基因是否導入到受體細胞、組織、器官中的一類特殊用途的基因。特點： 1、其產(chǎn)物在原植物中不存在，并對宿主植物細胞無毒性；2、表達產(chǎn)物應(yīng)有適度的穩(wěn)定性以利于檢測； 3、檢測手段高度敏感，檢測方法簡單、靈敏并可以定量；4、檢測過程應(yīng)不具有破壞性。舉例： -葡萄糖苷酸酶（GUS 基因）、綠色熒光蛋白（GFP）基因9、什么叫正義表達載體與反義表達載體？正義表達載體：是遺傳轉(zhuǎn)化載體中最常構(gòu)建的一種載體類型，是目的基因以全長或功能單元正向的方式連接于植物啟動子下游，轉(zhuǎn)化植物后，在啟動子的驅(qū)動下，實現(xiàn)外源基因的表達。反義表達載體：將目的基因按照3-5的方向反向連接到啟動子后，通過在植物

47、中進行的轉(zhuǎn)錄過程，獲得一個與原基因mRNA 完全互補的序列，進而與內(nèi)源基因形成雙鏈mRNA 結(jié)構(gòu)，從而阻止內(nèi)源基因的翻譯過程，達到抑制基因表達的目的。第十章園藝植物遺傳轉(zhuǎn)化1、什么叫植物遺傳轉(zhuǎn)化(plant genetic transformation)？植物遺傳轉(zhuǎn)化是應(yīng)用分子重組技術(shù)、細胞組織培養(yǎng)技術(shù)或種質(zhì)系統(tǒng)轉(zhuǎn)化技術(shù)，有目的地將外源基因或DNA 片段插入到受體植物基因組中，并使其在后代植株中得得以表達的過程。2、什么是植物遺傳轉(zhuǎn)化受體系統(tǒng)(receptor system) ？常用的遺傳轉(zhuǎn)化受體系統(tǒng)有哪些？植物遺傳轉(zhuǎn)化受體系統(tǒng)：是指用于轉(zhuǎn)化的外植體通過組織培養(yǎng)途徑或其他非組織培養(yǎng)途徑，能高效

48、、 穩(wěn)定地再生無性系，并能接受外源DNA 整合，對轉(zhuǎn)化選擇抗生素敏感的再生系統(tǒng)。常用的遺傳轉(zhuǎn)化受體系統(tǒng)：組織受體系統(tǒng)、原生質(zhì)體受體系統(tǒng)、生殖細胞受體系統(tǒng)3、什么叫園藝植物遺傳轉(zhuǎn)化中外源DNA 直接轉(zhuǎn)化法？并列舉外源 DNA 直接轉(zhuǎn)化法：通過物理或化學方法直接將外源目的基因?qū)胫参锘蚪M中物理方法：電穿孔轉(zhuǎn)化法、基因槍轉(zhuǎn)化法、激光微束穿孔轉(zhuǎn)化法、體內(nèi)注射法、超聲波法等化學方法： PEG、脂質(zhì)體介導轉(zhuǎn)化法4、什么是基因槍轟擊法（微彈轟擊技術(shù)micro-projectile bombardment)、 葉盤轉(zhuǎn)化法Leaf-disc method ？優(yōu)缺點？基因槍轟擊法：是利用火藥爆炸、高壓氣體和高壓

49、放電作為驅(qū)動力，將包裹有生物活性DNA的金屬小顆粒加速，高速轟擊植物組織或細胞，是外源基因?qū)崿F(xiàn)穿壁并導入受體細胞中，然后通過細胞和組織培養(yǎng)技術(shù)，再生出新的植株類型的技術(shù)。.優(yōu)點：（1）無宿主限制，特別適宜那些由原生質(zhì)體再生植株較為困難和對農(nóng)桿菌感染不敏感的單子葉植物，提高單子葉植物的轉(zhuǎn)化效率。（ 2）操作簡單，可控程度高，可以根據(jù)實驗需要調(diào)控微彈的速度和射入濃度，命中特定層次的細胞，提高遺傳轉(zhuǎn)化效率（ 3）靶受體類型廣泛，不受基因型限制，能轉(zhuǎn)化所有具有分生潛力的植物的任何組織或細胞（ 4）可將外源基因?qū)刖€粒體、葉綠體等植物細胞的細胞器，重復(fù)性好，獲得外源基因能穩(wěn)定表達的轉(zhuǎn)基因株系，這是目前質(zhì)

50、體轉(zhuǎn)化研究中最常用和最有效的DNA 導入方法。缺點：基因槍轟擊法因轟擊的隨機性導致轉(zhuǎn)化的效率極低；成本高；出現(xiàn)非轉(zhuǎn)化體和嵌合體的比率大；基因插入往往是多拷貝隨機整合到受體基因組中，可能發(fā)生多種方式的重排，也可能會因為與植物本身序列同源而相互作用，導致轉(zhuǎn)錄或轉(zhuǎn)錄后水平的基因沉默，因而遺傳穩(wěn)定性差；轟擊過程中可能造成外源基因的斷裂，使插入的基因成為無活性的片段。（非官方）葉盤轉(zhuǎn)化法：多種農(nóng)桿菌Ti 質(zhì)粒介導的植物基因轉(zhuǎn)化方法之一優(yōu)點：利用天然的載體系統(tǒng)，成功率高，效果好；轉(zhuǎn)移的外源基因常為單拷貝整合，很少發(fā)生甲基化和轉(zhuǎn)基因沉默，遺傳穩(wěn)定，并且符合孟德爾遺傳定律；費用低，方法簡單，易于操作；與基因槍

51、法結(jié)合使用，效果更佳；適用寄主范圍廣，幾乎所有的雙子葉植物都可采用此法。缺點：大多數(shù)單子葉植物，尤其是禾本科作物對農(nóng)桿菌不敏感，限制了它的應(yīng)用范圍；農(nóng)桿菌侵染后的外植體再生階段脫菌比較困難，需要長期使用抗生素，給實驗帶來麻煩。（此法屬于載體介導遺傳轉(zhuǎn)化法，優(yōu)缺點來自載體介導遺傳轉(zhuǎn)化法）5、什么是園藝植物遺傳轉(zhuǎn)化中載體介導遺傳轉(zhuǎn)化法（vector-mediatedtransformation）？基本步驟？優(yōu)缺點？載體介導遺傳轉(zhuǎn)化法：通過將目的基因連接在植物表達載體上，隨著載體DNA 的轉(zhuǎn)移而將外源目的基因整合到植物基因中的方法?；静襟E：（1）含重組 Ti 質(zhì)粒的工程菌培養(yǎng)及轉(zhuǎn)化（2）選擇合適的外植體（3）工程菌與外植體共培養(yǎng)（4）外植體脫菌及篩選培養(yǎng)（5）轉(zhuǎn)化植株再生及鑒定優(yōu)點：利用天然的載體系統(tǒng)，成功率高，效果好；轉(zhuǎn)移的外源基因常為單拷貝整合，很少發(fā)生甲基化和轉(zhuǎn)基因沉默，遺傳穩(wěn)定，并且符合孟德爾遺傳定律；費用低，方法簡單，易于操