實(shí)驗(yàn)二 影響酶促反應(yīng)的因素參考幻燈片.ppt

1、實(shí)驗(yàn)二溫度、pH值、激活劑和抑制劑對酶活性的影響及特異性,1,一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?1通過實(shí)驗(yàn)，觀察溫度、pH值、激活劑與抑制劑對酶促反應(yīng)速度的影響。 2能運(yùn)用所學(xué)的生化知識對實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行正確的分析。,2,二、實(shí)驗(yàn)原理,利用淀粉及其水解產(chǎn)物的顏色反應(yīng)，來比較唾液淀粉酶在不同條件下催化淀粉水解的程度，從而判斷溫度、pH、激動劑和抑制劑對酶的活性影響。,3,二、實(shí)驗(yàn)原理,在低溫時，酶活性降低，酶促反應(yīng)速度較慢，甚至停止；隨著溫度升高，酶的活性恢復(fù)，反應(yīng)速度加快；當(dāng)達(dá)到最適溫度時，酶的活性最大，酶促反應(yīng)速度達(dá)到最大。人體內(nèi)大多數(shù)的酶的最適溫度在37左右。溫度過高，酶變性失活，酶促反應(yīng)速度下降，甚至停止。 每

2、種酶都有最適的pH值，在最適pH值時，酶的活性最大，酶促反應(yīng)速度最快；偏離酶的最適pH均可引起酶蛋白變性而降低或失去活性。唾液淀粉酶的最適pH值為6.8。 氯離子對唾液淀粉酶有激活作用；銅離子對唾液淀粉酶有抑制作用。,4,三、實(shí)驗(yàn)材料,1.1%淀粉溶液 取可溶性淀粉1g, 加5ml蒸餾水, 調(diào)成糊狀, 再加80ml蒸餾水, 加熱并不斷攪拌, 使其充分溶解, 放冷, 最后用蒸餾水稀釋至100ml。 2.pH3.0緩沖液 取0.2mmol/LNa2HPO4溶液205ml，0.1mol/L檸檬酸溶液795ml, 混合即成. 3.pH6.8緩沖液 取0.2mmol/LNa2HPO4溶液772ml，0.

3、1mol/L檸檬酸溶液228ml, 混合即成. 4.pH8.0緩沖液 取0.2mmol/LNa2HPO4溶液972ml，0.1mol/L檸檬酸溶液28ml混合即成.,5,5.0.9%NaCl溶液 6.1% CuSO4溶液 7.碘液 9.試管架 11.試管夾 12.滴管 13.白瓷板 14.恒溫水浴箱 15.電爐 16.燒杯,6,【注意事項】 1.注意實(shí)驗(yàn)器材的干凈，避免雜質(zhì)影響反應(yīng)結(jié)果 2.各管反應(yīng)時間應(yīng)嚴(yán)格控制，保證一致。,7,四、實(shí)驗(yàn)方法,稀釋唾液制備 用水漱口，含蒸餾水咀嚼2分鐘后，把唾液吐進(jìn)燒杯中備用。（注：唾液淀粉酶活性具有個體差異，按下述各實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，有部分同學(xué)可能失敗，可重

4、新操作，但在重做過程中，要根據(jù)第一次實(shí)驗(yàn)結(jié)果改變稀釋唾液的用量，反應(yīng)太慢，則增加稀釋唾液用量，如果反應(yīng)太快，則減少稀釋唾液的用量） 煮沸唾液的制備 取上述唾液約5ml，放入沸水中煮沸5分鐘，取出備用。,8,（一）溫度對酶促反應(yīng)速度的影響,9,取白瓷板一塊，向各凹分別加1滴碘液，每隔半分鐘用滴管或玻棒從2號管取溶液1滴，加到已加有碘液的小凹中，觀察顏色變化，直至與碘不呈色時（即只顯棕黃色時），向各管加碘液1滴，搖勻觀察顏色變化(切記勿搖動)。搖勻再觀察。,10,（二）pH對酶促反應(yīng)速度的影響,11,將各管混勻，放進(jìn)37水浴箱中保溫。 取白瓷板一塊，向各凹分別加1滴碘液，每隔半分鐘用滴管或玻棒從2

5、號管取溶液1滴，加到已加有碘液的小凹中，觀察顏色變化，直至與碘不呈色時（即只顯棕黃色時），向各管加碘液1滴，搖勻觀察顏色變化。,12,（三）激活劑與抑制劑對酶促反應(yīng)速度的影響,13,將各管搖勻，放進(jìn)37水浴箱中保溫。取白瓷板一塊，向各凹分別加1滴碘液，每隔半分鐘用滴管或玻棒從2號管取溶液1滴，加到已加有碘液的小凹中，觀察顏色變化，直至與碘不呈色時（即只顯棕黃色時），向各管加碘液1滴，搖勻，觀察各管顏色變化。,激活劑與抑制劑,14,激活劑與抑制劑,五、思考題 1. 什么是酶的最適溫度？ 2. 什么是酶的最適pH? 3. 激活劑與抑制劑對酶活性影 響實(shí)驗(yàn)中設(shè)置第四管的作用 是什么？ 4. 什么是酶的特異性？,15,（四） 酶的專一性對酶