實驗一MS培養(yǎng)基的配制

1、.,實驗一 MS培養(yǎng)基的配制,.,一、實驗?zāi)康?了解植物外植體離體培養(yǎng)所需各種營養(yǎng)成分及激素種類。 初步掌握培養(yǎng)基母液配制方法。,.,二、實驗原理,植物材料培養(yǎng)要獲得成功，并正常生長，培養(yǎng)基的成分是一個決定性因素，不同植物要求不同的培養(yǎng)基。 大多數(shù)植物組織培養(yǎng)所用的培養(yǎng)基由無機營養(yǎng)物、碳源、維生素、生長調(diào)節(jié)物質(zhì)和有機附加物等五類物質(zhì)組成。,.,在配制培養(yǎng)基之前，為了使用方便、簡化操作、用量準(zhǔn)確，減少每次配藥稱量各種化學(xué)成分所花費的時間和誤差，常常將配制培養(yǎng)基所需無機大量元素、微量元素、鐵鹽、有機物、激素成分分別配制成比需要量大若干倍的濃縮母液，置于冰箱內(nèi)保存。 當(dāng)配制培養(yǎng)基時，按預(yù)先計算好的量

2、分別吸取各種母液稀釋即可。,.,三、實驗材料與器具,1、用具器材 滅菌鍋、普通及精密天平、燒杯、醫(yī)用瓷缸、量桶、移液管、試劑瓶、藥勺、玻璃棒、pH試紙。 2、藥品試劑 蒸餾水、1N HCl、1N NaOH、95%酒精、蔗糖、瓊脂、各種所需化學(xué)藥品（分析純）。,.,四、實驗步驟,1、母液配制 （1）配制10倍1 L MS大量元素母液 NH4NO3 16.5 g KH2PO4 1.7 g KNO3 19 g CaCl22H2O 4.4 g MgSO47H2O 3.7 g,.,配制成200倍1 L母液，依次稱取: KI 0.166 g Na2MoO42H2O 0.05 g H3BO3 1.24 g

3、CuSO45H2O 0.005 g MnSO44H2O 4.46 g CoCl26H2O 0.005 g ZnSO47H2O 1.72 g,（2）配制MS微量元素母液,.,配制成200倍l L鐵鹽母液，依次稱取: EDTA二鈉（Na2EDTA7H2O） 7.46 g FeSO47H2O 5.56 g,（3）配制MS鐵鹽母液,.,配制成200倍1 L有機母液，依次稱?。?鹽酸硫胺素（VB1） 0.02 g 煙酸 0.1 g 鹽酸吡哆醇（VB6） 0.1 g,（4）配制MS有機母液,.,（5）配制MS有機母液,配制成200倍1 L有機母液： 肌醇 20.0 g,（6）配制MS有機母液,配制成200

4、倍1 L有機母液： 甘氨酸 0.4 g,.,0.1mg/mL 的6-BA溶液：取25mg的6-BA，用少量1N的鹽酸溶解，再加蒸餾水定容至250mL。 0.1mg/mL NAA：取25mg的NAA可溶于熱水中或用少量95%乙醇或少量1N的NaOH溶解后，再加水定容至250mL。 0.1mg/mL 2，4-D：取20mg的2，4-D溶于少量95%乙醇中，再加水定容至200mL。,（7）植物激素的配制,.,2、培養(yǎng)基的配制（以1L培養(yǎng)基為例）,1、計量 根據(jù)配制培養(yǎng)基的量（1L）和母液的濃度計算需要吸取母液的量，計算公式：吸取量 mL=培養(yǎng)基中物質(zhì)濃度（mg/L）1000mL/母液濃度（mg/L）

5、。 母液濃度/培養(yǎng)基中物質(zhì)濃度=稀釋倍數(shù) 2、移液 取大燒杯（1L）一只，按照計算吸取母液的量依次吸取各母液置于燒杯中備用。 3、稱取 稱取10g瓊脂，30g蔗糖備用。,.,4、融化 用搪瓷量杯量取600700mL 的蒸餾水放在電爐上，加入瓊脂，邊加熱邊用玻璃棒攪拌，直到液體呈半透明狀將其取下，加入蔗糖，攪拌使之溶解。 5、混合 將融化的瓊脂和蔗糖倒入裝有母液的大燒杯中，充分混合，用蒸餾水定容到1000mL。 6、調(diào)pH 用滴管吸取物質(zhì)的量濃度為1 mol/L的NaOH 或HCl溶液調(diào)pH 為6.0。,.,共分4組，每組配750mL培養(yǎng)基，每瓶倒25-30mL，共接種28瓶左右 每瓶編號1（1/2/3/4）n號,分組情況,.,3、培養(yǎng)基的分裝和滅菌,溶化的培養(yǎng)基應(yīng)該趁熱分裝。 分裝時，將燒杯中的培養(yǎng)基倒入錐形瓶中，每瓶約25 mL -30 mL。 注意不要讓培養(yǎng)基沾到瓶口和瓶壁上。 用封口膜封口并編號。 滅菌：121，15-20 min。,.,五、注意事項,配制鐵鹽母液時，F(xiàn)eS04和Na2EDTA應(yīng)分別加熱溶解后混合， 并