動物細胞培養(yǎng)

1、專題2.2動物細胞工程,動物細胞工程常用的技術手段,動物細胞培養(yǎng)基礎,動物細胞融合,生產(chǎn)單克隆抗體,核移植,2.2.1動物細胞培養(yǎng)和核移植技術,一、動物細胞培養(yǎng),為什么要進行動物細胞培養(yǎng)？,材料一：在治療燒傷病人時，通常是取病人的健康皮膚進行自體移植。對于大面積燒傷的病人，自體健康皮膚非常有限，使用他人皮膚來源又不足，且會產(chǎn)生排斥反應。怎樣才能獲得大量的自體健康皮膚呢？ 材料二：許多動物細胞能分泌蛋白質(zhì)，如抗體等。但是，單個細胞產(chǎn)生的蛋白質(zhì)很少，怎樣才能獲得大量的分泌蛋白呢？,、什么是動物細胞培養(yǎng)？ 、具體培養(yǎng)過程 （1）為什么要把動物組織分散成單個細胞？ 完成44頁兩個問號。 （2）什么叫細

2、胞貼壁？什么叫接觸抑制？ （3）什么叫原代培養(yǎng)？什么叫傳代培養(yǎng)？ （4）總結(jié)出具體的培養(yǎng)過程？,任務：閱讀教材第44-46頁第一段 時間：4分鐘 問題：,就是從動物機體中取出相關組織，將它分散成單個細胞，然后,放在適宜的培養(yǎng)基中，讓這些細胞生長和繁殖。,1、概念：,一、動物細胞培養(yǎng),2、培養(yǎng)過程：,為什么要把動物組織分散成單個細胞？怎樣分散成單個細胞的？完成44頁兩個問號,成塊的組織中細胞與細胞靠在一起，彼此限制了細胞的生長和增殖。另外，單個細胞所需的營養(yǎng)容易供應，其代謝廢物容易排出。所以分散成單個細胞后培養(yǎng)。,用胰蛋白酶分散細胞，說明細胞間的物質(zhì)主要是蛋白質(zhì)。胃蛋白酶作用的適宜pH約為2，當

3、pH大于6時，胃蛋白酶就會失去活性。胰蛋白酶作用的適宜環(huán)境pH為7.28.4。多數(shù)動物細胞培養(yǎng)的適宜pH為7.27.4，胃蛋白酶在此環(huán)境中沒有活性，而胰蛋白酶在此環(huán)境中活性較高，因此胰蛋白酶適宜用于細胞培養(yǎng)時的消化。,44頁兩個小問題的答案,胰蛋白酶除了可以消化細胞間的蛋白外，長時間的 作用也會消化細胞膜蛋白，對細胞有損傷作用，因此必 須控制好胰蛋白酶的消化時間。,3、幾個重要的概念,細胞貼壁,懸液中分散的細胞很快就貼附在瓶壁上(單層)。,要求：,培養(yǎng)瓶（皿）內(nèi)表面光滑、無毒、易于貼附。,接觸抑制,當貼壁細胞分裂生長到表面相互接觸時，細胞會停止分裂增殖，這種現(xiàn)象稱為細胞的接觸抑制。,原代培養(yǎng),

4、傳代培養(yǎng),貼滿瓶壁的細胞需要重新用胰蛋白酶等處理讓細胞繼續(xù)培養(yǎng)，這樣的培養(yǎng)過程通常被稱為傳代培養(yǎng)。（即從原培養(yǎng)瓶內(nèi)轉(zhuǎn)接到新的培養(yǎng)瓶內(nèi)過程。）,通常將動物組織消化后的初次培養(yǎng)稱為原代培養(yǎng)。,細胞株,傳到40-50代后有部分細胞遺傳物質(zhì)發(fā)生了變化，具有癌細胞的特點，失去接觸抑制，可能在培養(yǎng)條件下無限制的傳代下去。,從原代培養(yǎng)細胞群中篩選出進行傳代培養(yǎng)的細胞，能傳到40-50代，其遺傳物質(zhì)沒有發(fā)生變化。,細胞系,注意,目前使用的細胞通常為10代以內(nèi)，以保持細胞正常的二倍體核型。,動物胚胎或幼齡動物的組織、器官,胰蛋白酶,剪碎,單個細胞,加培養(yǎng)液,細胞 懸浮液,10代 細胞,部分細胞“癌變”，無限傳代

5、,動物細胞培養(yǎng)不能最終培養(yǎng)成動物體,50代細胞,原代培養(yǎng),傳代培養(yǎng),細胞貼壁,剝離、分瓶,細胞,培養(yǎng)過程：,分化程度低，增殖能力強,去掉組織間蛋白,細胞 懸浮液,10代細胞,50代細胞,無限傳代,原代培養(yǎng),傳代培養(yǎng),細胞株,細胞系,細胞貼壁生長,隨細胞增多，出現(xiàn)接觸抑制,部分細胞癌變，失去接觸抑制，無限傳代,動物細胞培養(yǎng)都需要滿足什么條件？,任務：閱讀教材第46頁黑體字后面 時間：4分鐘 問題：,4、動物細胞培養(yǎng)條件,無菌、無毒的環(huán)境,（添加一定量的抗生素，定期更換培養(yǎng)液）,營養(yǎng),（葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素、動物血清、微量元素等）,溫度和PH,溫度36.5+0.5度，pH 7.27.4,

6、氣體環(huán)境,O2和CO2（95%空氣和5%CO2）,離體培養(yǎng)的細胞對微生物和有毒物質(zhì)沒有防御能力。,保證細胞順利的生長增殖,CO2培養(yǎng)箱,哺乳動物離體細胞培養(yǎng)和體內(nèi)細胞一樣,需要在恒足溫度下才能生存,溫差變化一般不應超過0.5度，因此培養(yǎng)箱對溫度應具有較高靈敏度。 CO2培養(yǎng)箱的優(yōu)點在于能恒定地供應一定量的CO2,一般5%即可維持培養(yǎng)液PH值穩(wěn)定。,培養(yǎng)基的類型,天然培養(yǎng)基： 合成培養(yǎng)基：,營養(yǎng)價值高，成分復雜。,成分明確，便于控制試驗條件。,5、動物細胞培養(yǎng)技術的應用,（1）生產(chǎn)蛋白生物制品：病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體等；,（4）用于檢測有毒物質(zhì)；,（2）獲得大量自身的皮膚細胞，用于植皮；,

7、（3）作為基因工程的受體細胞。,（5）用于生理、病理、藥理等方面的研究，為治療和預防疾病提供理論依據(jù)；,6、植物細胞和動物細胞培養(yǎng)的比較,獲得細胞或 細胞分泌蛋白,細胞的全能性,細胞株、細胞系,植物體,快速繁殖、培育無病毒植株等,葡萄糖、動物血清 促生長因子,蔗糖、植物激素,液體培養(yǎng)基,固體培養(yǎng)基,細胞增殖,動物細胞培養(yǎng),特點,原理,概念：,貼壁生長，接觸抑制,培養(yǎng)條件,無菌無毒，營養(yǎng)，溫度、PH，氣體環(huán)境,過程,細胞增殖,1、在動物細胞培養(yǎng)過程中遺傳物質(zhì)發(fā)生改變的細胞是（ ） A細胞系 B細胞株 C原代細胞 D傳代細胞,2、動物細胞工程技術的基礎是（）A.動物細胞融合 B.單克隆抗體 C.胚胎移植 D.動物細胞培養(yǎng),A,D,3、用于動物細胞培養(yǎng)的組織和細胞大都取自胚胎或出生不久的幼齡動物的器官或組織，其主要原因是這樣的組織細胞（ ）A.容易產(chǎn)生各種變異 B.具有更強的全能性C.取材十分方便 D分裂增殖的能力強,D,4.動物細胞培養(yǎng)與植物細胞培養(yǎng)的重