萊卡倒置顯微鏡使用

1、一、 運行程序：打開顯微鏡電源后，雙擊打開軟件二、 設(shè)定菜單欄禁止設(shè)置（非專業(yè)人員勿動）三、 采集圖片：（一） 采集基本設(shè)置下有有三個設(shè)置參數(shù):(Mic即microscope)一）設(shè)定：可進(jìn)行物鏡倍數(shù)切換，建議重低倍鏡到高倍鏡進(jìn)行觀察BF：明場，PH：相差，DIC：，POL：，F(xiàn)LUO：熒光Ap:孔徑光闌 Int.Fine：光強熒光激發(fā)光選擇：I3（GFP）設(shè)置目鏡與攝像頭分光情況可存儲上面拍攝的參數(shù)，建議連續(xù)拍攝多個樣品使用（如芯片）二）:選擇調(diào)焦（F精細(xì)，C粗調(diào)）后，把鼠標(biāo)放在右側(cè)，用鼠標(biāo)滾動輪進(jìn)行調(diào)焦（先粗調(diào)，后精細(xì)）載物臺移動調(diào)節(jié)快速/精確圖中+為現(xiàn)在拍攝位置，任意點擊框中地方，進(jìn)行快

2、速切換拍攝位置片子任意位置切換對比：在預(yù)設(shè)位置上，下拉窗口中選擇位置1，點擊保存更換位置后，下拉窗口中選擇位置2，點擊保存下拉窗口中選擇位置1，點擊 ，即可快速切換到位置1（如此類推）三）以下不建議使用： 點擊后自動曝光（不能調(diào)節(jié)增益）建議：不要使用自動曝光。曝光時間是指從快門打開到關(guān)閉的時間間隔，在這一段時間內(nèi)，物體可以在底片上留下影像，曝光時間是看需要而定的，沒有長短好壞的說法只有需要的講法。曝光時間越大，攝像頭反應(yīng)就越長。對于很弱的信號，曝光也不能無限增加，因為隨著曝光時間增加，噪音也會積累。增益：拍攝圖片時，增益不能調(diào)，需要放到最小。增益稍大一些，圖像的噪聲就出來了。畫質(zhì)反而不好。增益

3、越大噪音越大，同等質(zhì)量下的圖片信噪比越低，圖像質(zhì)量越差。在不過曝的前提下，增加曝光時間可以增加信噪比，使圖像清晰。（拍攝熒光時，用到該原理）飽和度是指的色彩飽合度。適可而止。調(diào)小了沒色，調(diào)大了也會有噪聲。建議參數(shù)1.5伽瑪值的意義是增強亮部反差（伽瑪值小于1）或者增強暗部反差（伽瑪值大于1）。是一種非線性的亮度調(diào)整。即伽馬調(diào)整是部分增強圖片暗的部分和亮的部分的對比所以拍攝熒光照片時，將伽瑪值調(diào)大會感覺能增加暗熒光的亮度。建議參數(shù)0.6/1免疫組化拍攝方法：1. 選擇BF，5X倍鏡下觀察，調(diào)焦2. 調(diào)節(jié)曝光時間，至適中（通過觀察柱狀圖，為正態(tài)分布）。3. 調(diào)節(jié)白平衡：用鼠標(biāo)在片子空白的地方，左擊

4、拖拉點擊白平衡（可能需多次調(diào)整）4. 每次轉(zhuǎn)換陪數(shù)，都要重新調(diào)節(jié)曝光時間及白平衡注意：先調(diào)節(jié)曝光時間，再調(diào)節(jié)白平衡。勿調(diào)轉(zhuǎn)。免疫熒光拍攝方法：拍攝熒光照片，一個是要調(diào)得背景黑，沒有噪聲點。二是盡量使微弱的熒光拍得明亮一些。一、 在BF/PH下，選所需陪數(shù)，觀察所需拍攝對象（操作同上）二、 拍攝熒光1. 選擇FLUO，選擇激發(fā)光I3/N21/A2. 將光強及視場光闌調(diào)至最大 3. 將增益調(diào)大，至觀察到熒光；若無，稍調(diào)節(jié)曝光時間。當(dāng)看到熒光后，調(diào)節(jié)焦距，尋找你想要的目的熒光。再把增益調(diào)至1.0X，同時把曝光時間調(diào)大，建議參數(shù)3s。（調(diào)節(jié)增益的目的：若當(dāng)一開始就調(diào)節(jié)曝光時間，此時拍攝會很慢，因為時間

5、由曝光時間決定，曝光時間越大，時間越長，反應(yīng)越慢，所以建議找到目的熒光后，再調(diào)節(jié)，最后拍攝）4. 此時，黑色背景可能有激發(fā)光的顏色，將伽馬值調(diào)大，建議0.6。5. 根據(jù)實際情況，進(jìn)行曝光時間和伽馬的調(diào)節(jié)。（拍攝熒光照片時，把柱狀圖的下限稍微設(shè)置一點數(shù)值，比如5到10左右。能使背景干凈一點。這也意味著比這個值小的熒光會被徹底抹黑）冷CCD就是靠降溫減少噪音，從而可以長時間曝光拍攝弱信號重設(shè)攝像頭：被人調(diào)得很亂時，使用（選擇默認(rèn)或test）點擊重置攝像機圖像格式：采集格式：即拍攝的圖片?；顖D格式：即屏幕上顯示的圖片。圖像種類：彩色適用于BF/PH；灰度適用于熒光定量。柱狀圖：通過柱狀圖，可判斷曝光

6、時間是否合適。并可利用上、下限進(jìn)行白水平及黑水平的應(yīng)用陰影化：當(dāng)鏡頭臟時應(yīng)用。操作：拿掉樣品選擇陰影化20X，拍攝時即自動應(yīng)用。勾選應(yīng)用到活動圖中，即在拍攝過程中可應(yīng)用陰影化。銳化：一般選擇無/低點曝光：拍攝熒光時，若想對某一部分進(jìn)行局部強化，可用鼠標(biāo)在該地方，左擊拖拉點擊點曝光。圖像會對該地方進(jìn)行自動曝光。可設(shè)置標(biāo)尺長度及單位一下為默認(rèn)設(shè)置，不要動可通過移動色彩輪，進(jìn)行調(diào)色，建議不適用色彩校準(zhǔn)（色溫）：亞洲人默認(rèn)5000k三、 瀏覽設(shè)置進(jìn)行瀏覽拍攝的圖片，設(shè)置拍攝圖片存放的位置。選擇拍攝圖片存放的文件夾（強制放于E盤，拍完拷走，丟失由本人承擔(dān)）選擇E盤后，點擊創(chuàng)建新文件夾，命名。選擇自己的文件夾后，點擊，此時，所選中拍攝的文件夾前有一紅點。移至拍攝文件夾界面設(shè)置：設(shè)置標(biāo)尺及基本注解建議勾選顯示比例尺/標(biāo)注，即拍攝過程及拍攝的圖片均顯示設(shè)置注解：設(shè)置比例尺：比例尺尺寸根據(jù)放大倍數(shù)進(jìn)行調(diào)整。瀏覽器調(diào)整圖片顯示大小，可通過滾輪進(jìn)行調(diào)整。五