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文檔簡介
1、一、 運行程序:打開顯微鏡電源后,雙擊打開軟件二、 設(shè)定菜單欄禁止設(shè)置(非專業(yè)人員勿動)三、 采集圖片:(一) 采集基本設(shè)置下有有三個設(shè)置參數(shù):(Mic即microscope)一)設(shè)定:可進(jìn)行物鏡倍數(shù)切換,建議重低倍鏡到高倍鏡進(jìn)行觀察BF:明場,PH:相差,DIC:,POL:,F(xiàn)LUO:熒光Ap:孔徑光闌 Int.Fine:光強熒光激發(fā)光選擇:I3(GFP)設(shè)置目鏡與攝像頭分光情況可存儲上面拍攝的參數(shù),建議連續(xù)拍攝多個樣品使用(如芯片)二):選擇調(diào)焦(F精細(xì),C粗調(diào))后,把鼠標(biāo)放在右側(cè),用鼠標(biāo)滾動輪進(jìn)行調(diào)焦(先粗調(diào),后精細(xì))載物臺移動調(diào)節(jié)快速/精確圖中+為現(xiàn)在拍攝位置,任意點擊框中地方,進(jìn)行快
2、速切換拍攝位置片子任意位置切換對比:在預(yù)設(shè)位置上,下拉窗口中選擇位置1,點擊保存更換位置后,下拉窗口中選擇位置2,點擊保存下拉窗口中選擇位置1,點擊 ,即可快速切換到位置1(如此類推)三)以下不建議使用: 點擊后自動曝光(不能調(diào)節(jié)增益)建議:不要使用自動曝光。曝光時間是指從快門打開到關(guān)閉的時間間隔,在這一段時間內(nèi),物體可以在底片上留下影像,曝光時間是看需要而定的,沒有長短好壞的說法只有需要的講法。曝光時間越大,攝像頭反應(yīng)就越長。對于很弱的信號,曝光也不能無限增加,因為隨著曝光時間增加,噪音也會積累。增益:拍攝圖片時,增益不能調(diào),需要放到最小。增益稍大一些,圖像的噪聲就出來了。畫質(zhì)反而不好。增益
3、越大噪音越大,同等質(zhì)量下的圖片信噪比越低,圖像質(zhì)量越差。在不過曝的前提下,增加曝光時間可以增加信噪比,使圖像清晰。(拍攝熒光時,用到該原理)飽和度是指的色彩飽合度。適可而止。調(diào)小了沒色,調(diào)大了也會有噪聲。建議參數(shù)1.5伽瑪值的意義是增強亮部反差(伽瑪值小于1)或者增強暗部反差(伽瑪值大于1)。是一種非線性的亮度調(diào)整。即伽馬調(diào)整是部分增強圖片暗的部分和亮的部分的對比所以拍攝熒光照片時,將伽瑪值調(diào)大會感覺能增加暗熒光的亮度。建議參數(shù)0.6/1免疫組化拍攝方法:1. 選擇BF,5X倍鏡下觀察,調(diào)焦2. 調(diào)節(jié)曝光時間,至適中(通過觀察柱狀圖,為正態(tài)分布)。3. 調(diào)節(jié)白平衡:用鼠標(biāo)在片子空白的地方,左擊
4、拖拉點擊白平衡(可能需多次調(diào)整)4. 每次轉(zhuǎn)換陪數(shù),都要重新調(diào)節(jié)曝光時間及白平衡注意:先調(diào)節(jié)曝光時間,再調(diào)節(jié)白平衡。勿調(diào)轉(zhuǎn)。免疫熒光拍攝方法:拍攝熒光照片,一個是要調(diào)得背景黑,沒有噪聲點。二是盡量使微弱的熒光拍得明亮一些。一、 在BF/PH下,選所需陪數(shù),觀察所需拍攝對象(操作同上)二、 拍攝熒光1. 選擇FLUO,選擇激發(fā)光I3/N21/A2. 將光強及視場光闌調(diào)至最大 3. 將增益調(diào)大,至觀察到熒光;若無,稍調(diào)節(jié)曝光時間。當(dāng)看到熒光后,調(diào)節(jié)焦距,尋找你想要的目的熒光。再把增益調(diào)至1.0X,同時把曝光時間調(diào)大,建議參數(shù)3s。(調(diào)節(jié)增益的目的:若當(dāng)一開始就調(diào)節(jié)曝光時間,此時拍攝會很慢,因為時間
5、由曝光時間決定,曝光時間越大,時間越長,反應(yīng)越慢,所以建議找到目的熒光后,再調(diào)節(jié),最后拍攝)4. 此時,黑色背景可能有激發(fā)光的顏色,將伽馬值調(diào)大,建議0.6。5. 根據(jù)實際情況,進(jìn)行曝光時間和伽馬的調(diào)節(jié)。(拍攝熒光照片時,把柱狀圖的下限稍微設(shè)置一點數(shù)值,比如5到10左右。能使背景干凈一點。這也意味著比這個值小的熒光會被徹底抹黑)冷CCD就是靠降溫減少噪音,從而可以長時間曝光拍攝弱信號重設(shè)攝像頭:被人調(diào)得很亂時,使用(選擇默認(rèn)或test)點擊重置攝像機圖像格式:采集格式:即拍攝的圖片?;顖D格式:即屏幕上顯示的圖片。圖像種類:彩色適用于BF/PH;灰度適用于熒光定量。柱狀圖:通過柱狀圖,可判斷曝光
6、時間是否合適。并可利用上、下限進(jìn)行白水平及黑水平的應(yīng)用陰影化:當(dāng)鏡頭臟時應(yīng)用。操作:拿掉樣品選擇陰影化20X,拍攝時即自動應(yīng)用。勾選應(yīng)用到活動圖中,即在拍攝過程中可應(yīng)用陰影化。銳化:一般選擇無/低點曝光:拍攝熒光時,若想對某一部分進(jìn)行局部強化,可用鼠標(biāo)在該地方,左擊拖拉點擊點曝光。圖像會對該地方進(jìn)行自動曝光。可設(shè)置標(biāo)尺長度及單位一下為默認(rèn)設(shè)置,不要動可通過移動色彩輪,進(jìn)行調(diào)色,建議不適用色彩校準(zhǔn)(色溫):亞洲人默認(rèn)5000k三、 瀏覽設(shè)置進(jìn)行瀏覽拍攝的圖片,設(shè)置拍攝圖片存放的位置。選擇拍攝圖片存放的文件夾(強制放于E盤,拍完拷走,丟失由本人承擔(dān))選擇E盤后,點擊創(chuàng)建新文件夾,命名。選擇自己的文件夾后,點擊,此時,所選中拍攝的文件夾前有一紅點。移至拍攝文件夾界面設(shè)置:設(shè)置標(biāo)尺及基本注解建議勾選顯示比例尺/標(biāo)注,即拍攝過程及拍攝的圖片均顯示設(shè)置注解:設(shè)置比例尺:比例尺尺寸根據(jù)放大倍數(shù)進(jìn)行調(diào)整。瀏覽器調(diào)整圖片顯示大小,可通過滾輪進(jìn)行調(diào)整。五
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