6.透射電鏡.ppt

1、透射電鏡樣品的 制備與觀察,1. 聽取電子顯微鏡的有關介紹，了解電子顯微鏡的基礎知識。 2. 觀察生物電鏡樣品，在電鏡下識別、掌握細胞器的亞顯微結構。 3.了解超薄切片的制備及觀察。,實驗目的,透射電鏡的基本結構 透射電鏡的成像原理 透射電鏡的使用方法 超薄切片的制備與觀察,實驗內(nèi)容,一、透射電鏡的基本結構 電子光學系統(tǒng) 電子槍 第一聚光鏡 第二聚光鏡 磁電子透鏡系列 物鏡 中間鏡 投影鏡 樣品室 觀察記錄裝置 真空系統(tǒng) 供電系統(tǒng)、水冷卻循環(huán)系統(tǒng)、壓縮空氣系統(tǒng),光學顯微鏡 電子顯微鏡 可見光 高壓加速電子束 玻璃透鏡 電磁透鏡 肉眼可見的像 肉眼不可見,電子顯微鏡與普通光學顯微鏡的主要區(qū)別：,

2、圖1 透射電子顯微鏡的結構圖,圖2 日立H-600透射電子顯微鏡,圖4 光鏡和透射電鏡結構的比較,二、透射電鏡的成像原理 在真空條件下，電子束經(jīng)高壓加速后形成極細的快速電子束流，此時為不帶樣品信息的入射電子射線。當它與樣品發(fā)生作用時，由于樣品的厚度和質量有差異，能產(chǎn)生多種帶有樣品信息的訊號，這些帶有樣品信息的電子束流經(jīng)物鏡作用產(chǎn)生樣品的最初放大像，接著經(jīng)中間鏡和投影鏡再次放大后，帶有樣品信息的電子最終激發(fā)熒光屏，產(chǎn)生強度不同的可見光，形成肉眼可觀察的電子顯微圖像。,三、電子顯微鏡的性能 透射電鏡是以電子束作為照明光源； 裝有聚光鏡、物鏡、中間鏡、投影鏡一系列電磁透鏡； 分辨率可達0.10.2n

3、m； 放大倍數(shù)可達100萬左右； 電子散射的因素在其成像反差中起主導作用； 適于100nm的超薄切片； 要求樣品在真空條件下成像。,四、透射電鏡的使用方法 開機 調(diào)試照明系統(tǒng) 觀察與拍照 換版 關機,五、超薄切片的制備與觀察 1.取材: 快 準 輕 小 . 2.固定: 0-4,戊二醛鋨酸雙重固定 (用緩沖液配制). 固定的目的在于使離體組織細胞盡量保持原有的形態(tài)結構. 3.漂洗: 用同系列緩沖液,避免殘留固定液在其后固定或脫水中還原生成 組織內(nèi)電子不透明沉淀物. 4.染色: 加強反差,醋酸雙氧鈾酒精溶液,30-60分鐘. 5.脫水: 用脫水劑置換樣品中的游離水, 常用酒精或丙酮. 6.浸透:

4、使包埋劑逐步浸入細胞內(nèi),取代脫水劑 ,環(huán)氧丙烷/包埋劑. 7.包埋: 純包埋劑,將浸透好的樣品塊放在膠囊或模具中,注入包埋劑包埋, 經(jīng)37過夜,4512小時,6048小時, 加溫聚合,即成包埋塊。 去膠囊,保存于干躁器中.,8.超薄切片: 能否切出沒有刀痕,沒有震顫,厚薄均勻,平整無皺折的切片 是超薄切片中的中心環(huán)節(jié),這取決于切片機的性能,切片刀的質量 包埋塊的軟硬以及操作者的經(jīng)驗與耐心. (1) 制備支持膜 (2) 包埋塊的修整 (3) 刀的制作 (4) 切片 (5) 收集切片 9.切片的染色: 超薄切片的染色，目的是提高生物樣品的反差.一般用重金屬 鹽（醋酸雙氧鈾和檸檬酸鉛）進行染色. 10.透射電鏡樣品的觀察: 為能獨立分析電鏡圖像和照片的資料,應掌握以下要領: (1)正確使用放大率 (2)對組織和細胞的初步鑒定,圖5 超薄切片制備過程,圖6 Leica超薄切片機,圖7 腎近曲小管上皮細胞之基底褶及其中的