12維生素B12的吸收曲線繪制及注射液的含量測定

1、新鄉(xiāng)醫(yī)學院分析化學實驗課教案首頁 授課教師姓名及職稱：一、實驗名稱維生素B12的吸收曲線繪制及注射液的含量測定二、授課對象藥學授課形式實驗教學三、教學目標1掌握分光光度計的使用方法2掌握注射劑含量的測定和計算方法3熟悉測繪吸收曲線的一般方法四、教學內容1吸收曲線的繪制方法2應用吸光系數(shù)法測定注射劑含量及計算方法3752型紫外可見分光光度計的使用方法五、教學安排與課時分配1講解演示 40 min2學生操作 教師輔導 120min六、授課重點1吸收曲線的繪制方法2752型紫外可見分光光度計的使用方法七、注意事項1752型分光光度計光源的使用 2每次改變波長，需重新調T為“0”3B12應避光八、授課

2、方法教師示范講述，學生操作九、使用教材分析化學實驗自編教材十、教研室審查意見主任簽字新鄉(xiāng)醫(yī)學院化學教研室 年 月 日實驗 維生素B12的吸收曲線繪制及注射液的含量測定一、實驗目的1. 掌握分光光度計的使用方法；2. 掌握注射劑含量的測定和計算方法；3. 熟悉測繪吸收曲線的一般方法。二、實驗原理維生素B12是含Co的有機化合物，其注射液為粉紅色至紅色的澄明液體。要測定B12注射液的含量，可以用紫外可見分光光度法測定，用此法進行含量測定，必須知道B12的max，max可以通過繪制吸收曲線來得到。吸收曲線：將不同波長的單色光依次通過被分析的物質，分別測得不同波長下的吸光度，以波長為橫坐標，以吸光度為

3、縱坐標所描繪的曲線。吸光度最大時對應的波長為max，在max處測吸光度。B12在278，361，550nm處有最大吸收，在max處測得A，根據(jù)吸光系數(shù)法可以求出注射液中B12的含量。吸光系數(shù)法：A=Ecl實驗中要求測361nm處的A，相應的吸光系數(shù)為207。三、儀器與試劑752型紫外可見分光光度計，10mL容量瓶，5mL吸量管；0.1gL-1維生素B12水溶液，維生素B12注射液(市售品)。四、實驗步驟1752型分光光度計的使用（1）開啟電源開關，使儀器預熱20分鐘。（2）用波長選擇旋鈕設置所需的分析波長。（3）將裝參比溶液的比色皿置于光路，打開樣品室蓋，調節(jié)T旋鈕，使顯示器指針指在“0.00

4、”。（4）將裝參比溶液的比色皿置于光路，關閉樣品室蓋，調節(jié)A旋鈕，使顯示器指針指在“100.00”。（5) 重復操作(3)和(4)，直至儀器顯示穩(wěn)定。（6）將裝參比溶液的比色皿置于光路，關閉樣品室蓋，進行測定，在顯示器上讀出A。（7）儀器使用完畢，關閉電源，拔下電源插頭。取出比色皿，洗凈、晾干。復原儀器，蓋上防塵罩。2吸收曲線的繪制將0.1gL-1維生素B12溶液置于1cm比色皿中，以蒸餾水為空白溶液，在不同波長(340nm580nm之間，其中從350nm370nm和540560nm每間隔5nm測量一次，其余每間隔20nm測量一次吸光度)下測量相應的吸光度。然后以波長為橫坐標，吸光度為縱坐標繪

5、出吸收曲線。從吸收曲線上得到最大吸收波長，從而選擇測定維生素B12的適宜波長。3注射液含量測定避光操作。準確吸取0.50ml維生素B12注射液于10ml容量瓶中，加水定容至刻度線。然后將溶液置于1cm比色皿中，在361nm波長條件下以蒸餾水作為空白測定吸光度，按C63H88CoN14O14P的吸收系數(shù)為207計算維生素B12標示量的百分含量。計算公式：五、注意事項1在每次測定前，首先應做吸收池配套性試驗。即將同樣厚度的4個比色皿都裝相同溶液，在所選波長處測定各比色皿的透光率，其最大誤差T應不大于0.5%。2儀器在不測定時，應隨時打開暗箱蓋，以保護光電管。3為使比色皿中測定溶液與原溶液的濃度一致，需用原溶液蕩洗比色皿23次。4比色皿內所盛溶液以超過皿高的2/3為宜。過滿溶液可能溢出，使儀器受損。使用后應立即取出比色皿，并用自來水及蒸餾水洗凈，倒立晾干。5比色皿一般用水蕩洗，如被有機物污染，宜用HCl乙醇(1+2)浸泡片刻，再用水沖洗，不能用堿液或強氧化性洗液清洗。切忌用毛刷刷洗，以免損傷比色皿。6350