SOP-QC-增補本藥典-沉降菌及表面微生物測試標準操作規(guī)程

1、.制藥廠GMP操作文件名 稱沉降菌及表面微生物測試標準操作規(guī)程第 1 頁 共 3 頁 附件 0 個編 號頒發(fā)部門制 定 人審 核 人批 準 人制定日期審核日期批準日期分 發(fā) 至生效日期目的：建立正確的潔凈實驗室、潔凈廠房沉降菌表面微生物測試標準操作規(guī)程，保證藥品在規(guī)定潔凈級別內進行。范圍：要求有凈化級別的實驗室、廠房責任人：QA潔凈度檢測人員、微生物檢驗人員對本制度的實施負責。依據(jù)：醫(yī)藥工業(yè)潔凈室和潔凈區(qū)中沉降菌的測試方法，藥品生產(chǎn)質量管理規(guī)范（2010年修訂）內容：1 儀器：微波爐、生化培養(yǎng)箱、電冰箱、凈化工作臺。2 用具：培養(yǎng)皿、無菌觸碟、消毒棉棒，應在實驗前經(jīng)滅菌后備用。3 培養(yǎng)基：胰酪

2、胨大豆瓊脂培養(yǎng)基、PH7.04 培養(yǎng)皿的制備： 將培養(yǎng)皿在121濕熱滅菌30分鐘。配制培養(yǎng)基并滅菌，將滅菌培養(yǎng)基加熱熔化，冷至4560，在無菌操作條件下將培養(yǎng)基注入培養(yǎng)皿，每皿1520ml，待培養(yǎng)基凝固后，將培養(yǎng)基平皿倒置于3035恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時，若培養(yǎng)基平皿上確無菌落生長，即可供采樣用。5 測試方法及步驟5.1 采樣前潔凈區(qū)的狀態(tài)：5.1.1 沉降菌測試前：被測試潔凈室（區(qū)）的溫濕度須達到（1826）相對濕度在（45%65%）為宜；壓差必須控制在規(guī)定值內。5.1.2 測試狀態(tài)有靜態(tài)和動態(tài)兩種，并在報告中注明測試狀態(tài)。靜態(tài)測試時，室內測試人員不得多于2人。被測試潔凈室（區(qū)）已消毒。測

3、試人員必須穿戴符合環(huán)境潔凈度級別的工作服。測試報告中應標明測試時所采用的狀態(tài)和室內測試人員數(shù)。5.1.3 在空態(tài)或靜態(tài)a（無生產(chǎn)人員）測試時，對單向流潔凈室而言，測試宜在凈化空氣調節(jié)系統(tǒng)正常運行時間不少于10min后開始，對非單向流潔凈室，測試應在凈化空調系統(tǒng)正常運行不少于30分鐘開始。在靜態(tài)b測試時（生產(chǎn)結束人員撤離），對單向流潔凈室而言，測試應在生產(chǎn)操作人員撤離現(xiàn)場并經(jīng)過10min自凈后開始，對非單向流潔凈室，測試應在生產(chǎn)操作人員撤離現(xiàn)場并經(jīng)過20min自凈后開始。5.1.4 在動態(tài)測試時，則須記錄生產(chǎn)開始的時間以及測試時間。5.2采樣點數(shù)量及其布置5.2.1采樣點的確定： 根據(jù)潔凈區(qū)（室

4、）面積大小確定最少采樣點數(shù)目（根據(jù)國家標準GB/T16294-2010要求），在滿足最少采樣點數(shù)目的同時，還宜同時滿足最少培養(yǎng)皿數(shù)。采樣點的布置應力求均勻，避免在某局部區(qū)域過于集中，培養(yǎng)皿應布置在有代表性的地方（如關鍵設備或易受污染的地方）和氣流擾動最小的地方。工作區(qū)測試點位置離地0.81.5m左右（略高于工作面），可在關鍵設備或關鍵工作活動范圍處增加測點。5.2.2 最少采樣點數(shù)目在滿足最少采樣點數(shù)目的同時，還宜滿足最少培養(yǎng)皿數(shù)。面積m潔凈度級別微生物最大沉降菌數(shù)沉降菌 個/皿最少采樣點數(shù)最少培養(yǎng)皿數(shù)10A級123142040C級502240100D級10022100200D級1003220

5、0400D級100624001000D級10013210002000D級1003222000D級10063290mm，CFU/4h(培養(yǎng)皿暴露時間不超過4小時，以平均菌落數(shù)表示)（1）A級潔凈區(qū)采樣點分布圖（15點）（2）C、D級潔凈區(qū)采樣點分布圖示意5.3 采樣方法：5.3.1沉降菌：將已制備好的培養(yǎng)皿放置在預先確定的取樣點，打開培養(yǎng)皿蓋，使培養(yǎng)基表面暴露0.5小時（靜態(tài)），4小時（動態(tài)），再將培養(yǎng)皿蓋上蓋后倒置。5.3.2表面微生物：5.3.2.1 無菌碟法：用無菌觸碟(50mm)直接接觸所檢物體或工作服510秒，再將培養(yǎng)皿蓋上蓋后倒置。5.3.2.2棉簽擦拭法：無菌棉簽支擦拭物體表面25

6、cm2然后用消毒醫(yī)用剪子將棉頭放入100ml PH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液中，振搖至均勻。按細菌檢查法注皿。5.4 培養(yǎng)全部采樣結束，將培養(yǎng)皿倒置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。采用大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基（TSA）配制的培養(yǎng)皿經(jīng)采樣后，在30-35培養(yǎng)，時間不少于2天。培養(yǎng)基應有對照試驗，檢查培養(yǎng)基本身是否污染。5.5 菌落計數(shù)：4.6.1達到規(guī)定的培養(yǎng)時間后，菌落數(shù)用肉眼直接計數(shù)、標記或在菌落計數(shù)器上點計，并用510倍放大鏡檢查，有否遺漏。 4.6.2將測得的數(shù)據(jù)進行計算，計算公式如下 平均菌落數(shù)M=（M1+M2+Mn）/n式中：M1=1號培養(yǎng)皿菌落數(shù)M2=2號培養(yǎng)皿菌落數(shù)Mn=n號培養(yǎng)皿菌落數(shù)n=培養(yǎng)皿總數(shù)6 注意事項6.1 采取一切措施防止人為對樣本的污染。6.2 由于細菌種類繁多，差別甚大，計數(shù)時一般用透射光于培養(yǎng)皿背面或者正面仔細觀察，不要漏計培養(yǎng)皿邊緣生長的菌落，并須注意細菌菌落與培養(yǎng)基沉淀物的區(qū)別，必要時用顯微鏡鑒別。6.3 采樣前應仔細檢查每個培養(yǎng)皿的質量，如發(fā)現(xiàn)變質、破損或者污染的應剔除。6.4 沉降菌的測試需在懸浮粒子測試完成后并經(jīng)過對潔凈室的消毒，方能進行沉降菌的測試。6.5 測試記錄：測試報告中應記錄房間溫度、相對濕度、壓