馬傳染性貧血課件.ppt

1、馬傳染性貧血 Equine Infectious Anemia（EIA）,馬傳染性貧血病簡介,馬傳染性貧血，是由馬傳染性貧血病毒引起馬屬動物的一種慢性傳染病，以病毒持續(xù)感染、反復(fù)發(fā)熱和貧血為特征，且可人畜互傳，一旦發(fā)生很難消滅。,流行病學(xué),病馬和帶毒馬是本病的傳染源，其血液、肝、脾、淋巴結(jié)等均有病毒存在，發(fā)熱期病馬分泌物和排泄物也含有病毒。 吸血昆蟲（蚊、虻等）是主要的傳播媒介，也可經(jīng)消化道、呼吸道、交配、胎盤傳染，也可由被病毒污染的注射針頭和診療器械等散播 。 僅馬屬動物易感，其中以馬最易感，驢、騾次之，且無品種、年齡和性別差異。 本病主要呈地方流行或散發(fā)。一般無嚴(yán)格的季節(jié)性和地區(qū)性，但在吸

2、血昆蟲較多的夏秋季節(jié)及森林、沼澤地帶發(fā)病較多。在新疫區(qū)以急性型多見，病死率較高，老疫區(qū)則以慢性型、隱性型為多，病死率較低。,病原學(xué),馬傳染性貧血病毒（EIAV）為RNA病毒，屬于反轉(zhuǎn)錄病毒科慢病毒屬。病毒粒子呈圓形，有囊膜，以出芽方式成熟和釋放。 病毒有群特異性抗原，用補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)和瓊脂擴(kuò)散反應(yīng)可以檢出，主要用于本病的診斷。另還有型特異性抗原，是各型毒株間不同的抗原，存在于病毒粒子表面，可用病毒-血清中和試驗(yàn)檢出，主要用于病毒型的鑒別。本病至少有14個型。 病毒只在馬屬動物白細(xì)胞及驢胎骨髓、肺、脾、皮膚、胞腺等細(xì)胞培養(yǎng)時才可復(fù)制。用馬屬動物以外的其它動物人工感染和進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)均未獲成功。,病毒

3、對外界的抵抗力較強(qiáng)。在糞便中能生存兩個半月，將糞便堆積發(fā)酵時，經(jīng)30分鐘即可死亡。2%4%氫氧化鈉液和福爾馬林液，均可在510分鐘內(nèi)將其殺死，3%來蘇兒液可在20分鐘內(nèi)殺死。日光照射14小時死亡。在-20左右病毒可保存毒力達(dá)6個月到2年。病毒對熱的抵抗力較弱，煮沸立即死亡。,臨床癥狀,臨床特征以發(fā)熱(稽留熱或間歇熱)為主，并有貧血、出血、黃疸、心機(jī)能紊亂、浮腫和消瘦等癥狀。 血相變化：紅細(xì)胞顯著減少，血紅蛋白降低，血沉加速。白細(xì)胞減少，丙種球蛋白增高，外周血液中出現(xiàn)吞鐵細(xì)胞。在發(fā)熱期，嗜酸粒細(xì)胞減少或消失，退熱后，淋巴細(xì)胞增多。 根據(jù)臨診表現(xiàn)，可分為急性、亞急性、慢性和隱性四種病型。,病理變化

4、,急性型呈現(xiàn)全身敗血變化。漿膜、黏膜、淋巴結(jié)和實(shí)質(zhì)臟器有彌漫性出血點(diǎn)(斑)。脾急性腫大，暗紅或紫紅色，紅髓軟化，白髓增生，切面呈顆粒狀。肝腫大，黃褐色或紫紅色，肝細(xì)胞索變性與中央靜脈、竇狀隙淤血交織，使肝切面形成豆蔻狀或檳榔狀花紋，有“豆蔻肝”或“檳榔肝”之稱。 亞急性和慢性病主要是脾、肝、腎、心臟及淋巴結(jié)等的網(wǎng)狀內(nèi)皮細(xì)胞的增生，肝臟內(nèi)見有多量吞鐵細(xì)胞。長骨的骨髓紅區(qū)擴(kuò)大，黃髓內(nèi)有紅髓增生灶，慢性嚴(yán)重病例骨髓呈乳白色膠凍狀。,馬傳染性貧血驢白細(xì)胞活疫苗,用馬傳染性貧血病毒(EIAV)通過驢白細(xì)胞人工馴化而制成的疫苗。為中國首創(chuàng)，可刺激馬、驢產(chǎn)生明顯體液和細(xì)胞免疫應(yīng)答，保護(hù)率分別達(dá)85%以上(馬

5、)和100%(驢)。 對馬、驢接種后免疫力的產(chǎn)生雖較緩慢,但免疫持續(xù)期較長，免疫保護(hù)率較高。這是目前國際上唯一的馬傳染性貧血活毒疫苗,該成果達(dá)到國際先進(jìn)水平。,毒種選擇,毒種：馬傳貧驢白細(xì)胞弱毒。（毒力弱，免疫原性良好。） 應(yīng)符合條件：毒種病毒液含毒量對培養(yǎng)的驢白細(xì)胞106TCID50/ml；病毒液對驢最小感染量與免疫量10-5/ml；病毒液對標(biāo)準(zhǔn)瓊擴(kuò)、補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)的陽性血清必須有抗原性，與補(bǔ)體抗原效價應(yīng)在3.0以上；接種健康馬屬動物不出現(xiàn)馬傳貧癥狀和不引起死亡，但具有血清學(xué)反應(yīng)。,制造要點(diǎn),驢白細(xì)胞培養(yǎng)：動物選擇，供提取驢白細(xì)胞的驢為25歲無馬傳貧感染的健康者。 無菌采取血漿并分離出白細(xì)胞，

6、加賽氏液（Seligmarls）與牛血清混合的營養(yǎng)液培養(yǎng)48h。接毒按3%量接毒后，繼續(xù)培養(yǎng)。收獲病毒再培養(yǎng)57d進(jìn)行，收毒凍融二次。,質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),疫苗需無菌； 補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)效價不低于2.0； 驢白細(xì)胞做毒力測定不低于105TCID50/ml； 原苗5ml皮下注射健康馬，觀察3個月，每天測溫兩次，每2Od進(jìn)行補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)檢驗(yàn)；須無馬傳貧癥狀；血清陽性率需達(dá)到2/33/4，苗可判為合格。,保存與使用,液體苗04可保存7d ，-20以下可保存一年。凍干苗04可保存6個月，-20以下可保存兩年。 液體苗為微黃色澄清液體。凍干苗為微黃色海綿狀疏松團(tuán)塊，易與瓶壁脫離，加稀釋液后迅速溶解。按瓶簽注明頭份，用

7、PBS緩沖液稀釋，馬、驢、騾各皮下注射2毫升。注苗后，馬需3個月，驢、騾需2個月才能產(chǎn)生免疫力，免疫持續(xù)期為2年。,診斷制劑,1、馬傳貧瓊脂擴(kuò)散反應(yīng)抗原 毒種：驢胎肺、真皮、胸腺二倍體細(xì)胞上培養(yǎng) 傳代適應(yīng)，抗原性良好的馬傳貧病毒。 毒種條件：收毒后凍融三次，無菌收集。 按1.5%沉淀物制出抗原，免疫擴(kuò)散法測 定效價，擴(kuò)散環(huán)直徑10mm以上。,制造要點(diǎn)： 將6月齡左右驢胎肺、皮膚、胸腺等組織制成二倍體細(xì)胞，換入等量維持液，按2%-5%接種，培養(yǎng)10-15d收毒。調(diào)pH至5.0,4透析15h，離心，棄上清，沉渣以pH8.6硼酸緩沖液稀釋，再加乙醚研磨，待乙醚揮發(fā)后重復(fù)一次處理后即為抗原。,抗原檢驗(yàn)

8、： 用含8個單位標(biāo)準(zhǔn)陽性血清，配置成含1%標(biāo)準(zhǔn)陽性血清的1%瓊脂平板，經(jīng)反應(yīng)后出現(xiàn)沉淀環(huán)者即為合格。,2、馬傳貧補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)抗原 獨(dú)到特點(diǎn)：應(yīng)用驢白細(xì)胞或驢胎肺、骨髓傳代細(xì)胞生產(chǎn)抗原；把小牛血清改為大牛血清；把乙醚處理病毒培養(yǎng)物改為吐溫-80（非離子型表面活性劑）和乙醚等量聯(lián)合處理，大大增加抗原生產(chǎn)量。 3、ELISA抗原,馬傳貧疫苗研究意義,馬傳貧疫苗的研究成功，突破了慢病毒不能免疫的理論，對慢病毒的免疫預(yù)防提供了戰(zhàn)略性的理論依據(jù)，蘊(yùn)含著慢病毒免疫的巨大信息，為一系列人畜慢病毒免疫的研究開辟了新的路線，馬傳貧疫苗作用機(jī)理的闡明將為AIDS疫苗的研究提供借鑒。,原來，馬傳貧疫苗是采用傳統(tǒng)的細(xì)胞

9、學(xué)方法研制出來的，這種旨在使病毒在細(xì)胞傳代培養(yǎng)的過程中減低毒力的方法，不但所用的時間較長，而且由于受到技術(shù)手段的限制，研究者只能看到它最終的結(jié)果，卻并不能了解其中的免疫機(jī)理，無從知曉一個原本可以使動物致死的病毒究竟何時變成有免疫保護(hù)作用的疫苗了。如今，運(yùn)用現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)就能彌補(bǔ)傳統(tǒng)細(xì)胞學(xué)技術(shù)知其然、不知其所以然的缺憾。,馬傳貧病毒與艾滋病病毒的主要遺傳信息的基因結(jié)構(gòu)完全相同，所以，只要找到馬傳貧病毒基因中的有毒部分，就可以確定HIV中帶毒基因的位置；如果將HIV的這部分基因減掉后其毒性也隨之消失的話，艾滋病致人死地的謎底就將被揭開。因此，首當(dāng)其沖的是要找到馬傳貧病毒中這段關(guān)鍵的致病基因。此時，保存了20年的馬傳貧疫苗幾百代傳代樣本就派上了大用場各代病毒的毒力是怎樣減下來的，免疫原性是怎樣提上去的，這些信息對于艾滋病疫苗的研制有著重要的指導(dǎo)作用。,在完成了一系列不同層面的基因?qū)Ρ群螅芯咳藛T終于找到了那些缺失或突變的基因位點(diǎn)，并以實(shí)驗(yàn)證實(shí)了馬傳貧疫苗的減毒原理：這些位點(diǎn)中的某些突變，就是使馬