瓊脂糖凝膠電泳實驗報告

1、精選文庫 實驗一：瓊脂糖凝膠電泳對DNA提取 實驗?zāi)康模簩W(xué)習(xí)使用水平式瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行DNA的提取。實驗原理： 瓊脂糖凝膠電泳是利用瓊脂糖溶化再凝固后能形成帶有一定孔隙的固體基質(zhì)的特性。DNA分子在瓊脂糖凝膠中泳動時有電荷效應(yīng)和分子篩效應(yīng)。根據(jù)DNA分子量不同，采用外加電場使其分開，用生物染料嵌入DNA分子后在紫外下顯色。1）在電場的作用下及中性pH的緩沖條件下，帶負(fù)電的核酸分子向正極遷移。由于糖磷酸骨架在結(jié)構(gòu)上的重復(fù)性質(zhì)，相同數(shù)量的雙鏈DNA幾乎具有等量的凈電荷，因此它們能以同樣的速度向正極方向移動。2）在一定的電場強度下，DNA分子的遷移速度取決于分子篩效應(yīng)，即DNA分子本身的大小和構(gòu)型

2、。具有不同的相對分子質(zhì)量和不同構(gòu)型的DNA片段泳動速度不一樣，可進(jìn)行分離。3）生物染料在紫外光照射下能發(fā)射熒光，當(dāng)DNA樣品在瓊脂糖凝膠中從負(fù)極向正極泳動時，生物染料從正極向負(fù)極移動，就會嵌入DNA分子中形成絡(luò)合物，使DNA在紫外光下發(fā)射很強的熒光。在生物染料足夠的情況下，熒光的強度正比于DNA的含量，這樣就可以檢測DNA的濃度。實驗材料：微量移液器(2l和4l)，高壓滅菌鍋，電泳儀，瓊脂糖平板電泳裝置，微波爐等。TAE電泳緩沖液 ，瓊脂糖凝膠，PCR擴(kuò)增樣品實驗步驟： 1膠液的制備：稱取0.2g瓊脂糖,置于200ml錐形瓶中, 加入20ml TAE稀釋緩沖液，放入微波爐里加熱至瓊脂糖全部熔化

3、，沸騰。取出搖勻。加熱時應(yīng)蓋上封口膜, 以減少水份蒸發(fā)。2膠板的制備：將有機(jī)玻璃膠槽兩端分別用透明膠帶(寬約1cm)緊密封住。將封好的膠槽置于水平支持物上,插上樣品梳子。3向冷卻至50-60的瓊脂糖膠液中小心地倒入膠槽內(nèi), 使膠液形成均勻的膠層。檢查有無氣泡。4室溫下約20分鐘后，瓊脂糖溶液完全凝固，小心垂直拔出梳子和擋板，注意不要損傷梳底部的凝膠，清除碎膠。將凝膠放入電泳槽中。5加入電泳緩沖液（TAE）至電泳槽中，使液面高于膠面約1mm。6加樣：取2lPCR樣品與2l 緩沖液液混勻, 用微量移液槍小心加入樣品槽中。小心操作, 避免損壞凝膠或?qū)悠凡鄣撞磕z刺穿。7電泳：加完樣后，插上導(dǎo)線，打

4、開電泳儀電源，按照需要調(diào)節(jié)電壓至160V，電泳開始，觀察電流情況或電泳槽中負(fù)極的鉑金絲是否有氣泡出現(xiàn)。8當(dāng)溴酚藍(lán)條帶移動到距凝膠前沿約1cm時，將電壓（或電流）回零，關(guān)閉電源，停止電泳。9取出凝膠，在紫外觀測儀上觀察電泳結(jié)果。在波長為302nm紫外燈下拍照觀察。實驗結(jié)果: 利用瓊脂糖凝膠電泳實驗做的圖如下： 結(jié)果分析：通過跑膠結(jié)果可以看出DNA的分離效果都很好，無斷裂，濃度可觀，點樣位置為第一排第16個，即第一排最后一個。與Mark的對照有相吻合的條帶，可進(jìn)行下一步的判斷與分析。注意事項1確保實驗全程無污染2緩沖系統(tǒng)：在沒有離子存在時，電導(dǎo)率最小，DNA不遷移，或遷移極慢，在高離子強度的緩沖液中，電導(dǎo)很高并產(chǎn)熱，可能導(dǎo)致DNA變性，因此應(yīng)注意緩沖液的使用是否正確。長時間高壓電泳時，常更新緩沖液或在兩槽間進(jìn)行緩沖液的循環(huán)是可取的。 3凝膠的制備：凝膠中所加緩沖液應(yīng)與電泳槽中的相一致，溶解的凝膠應(yīng)及時倒入板中，避免倒入前凝固結(jié)塊。倒入板中的凝膠應(yīng)避免出現(xiàn)氣泡，影響電泳結(jié)果。 4樣品加入量：加樣量的多少依據(jù)加樣孔的大小及DNA中片段的數(shù)量和大小而定，過多的量會